斜卧青霉114-2 cbh1基因的TAIL-PCR克隆及与抗阻遏突变株JU-A10的比较

【目的】研究斜卧青霉(Penicillium decumbens)114-2与其抗阻遏突变株JU-A10外切酶基因序列的差异。【方法】用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)和RT-PCR扩增得到斜卧青霉114-2外切葡聚糖酶Ⅰ(cbh1)基因全长和cDNA全长。【结果】cbh1基因全长为1500bp,含有两个内含子,编码453个氨基酸(GenBank,EF397602)。克隆并分析了1.9kb的cbh1基因上游序列,分别发现了葡萄糖代谢抑制因子CREⅠ与纤维素酶转录调控蛋白ACEΙ的两个的潜在结合位点。【结论】在相同的培养条件下,其抗阻遏突变株JU-A10的外切酶活明显高于野生株114-2。两菌株的cbh1基因序列完全一致,说明外切酶活明显提高不是由于cbh1基因发生突变引起的。

产纤维素酶细菌的选育研究

以产黄纤维单胞菌ＣＬ１和芽孢杆菌ｘｘ－０１为出发株，经诱变处理后，在含葡萄糖的产酶培养基平板上筛选到能形成较大透明圈的抗分解代谢物阻遏突变株．其中ＣＬ１的突变株ＣＭＣ酶活可提高２．１倍（６０．１Ｕ／ｍｌ），微晶纤维素酶可提高３～４倍（３９．５Ｕ／ｍｌ），芽孢杆菌ｘｘ－０１的ＣＭＣ酶活可提高５．０倍（７８０Ｕ／ｍｌ）。