阿克替苷通过调控ERK1/2信号通路抑制肝癌细胞上皮间质转化

目的探讨阿克替苷(ACT)通过调控ERK1/2通路抑制人肝癌HCCLM3细胞上皮间质转化(EMT)的作用及其机制。方法CCK-8法检测肝癌细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测肝癌细胞侵袭及迁移能力;实时定量PCR和蛋白质印迹实验检测ACT对ERK1/2信号通路和上皮间质转化相关基因(E-cadherin、N-cadherin)mRNA和蛋白的表达。结果CCK-8法检测结果显示,ACT可降低肝癌HCCLM3细胞的活性,抑制肝癌细胞的增殖能力,并与药物浓度和时间有一定的相关性。划痕实验和Transwell实验结果显示,ACT能抑制肝癌HCCLM3细胞迁移和侵袭能力,并呈浓度依赖性。荧光定量PCR和蛋白质印迹实验表明,ACT可下调ERK1/2信号通路相关基因mRNA和蛋白的表达,上调EMT相关基因E-cadherin mRNA和蛋白的表达,下调N-cadherin mRNA和蛋白的表达。结论ACT可抑制人肝癌HCCLM3细胞EMT、侵袭及迁移,其作用机制与下调ERK1/2信号通路密切相关。

阿克替苷的体内外抗肿瘤作用研究

目的探讨阿克替苷(acteoside)的抗肿瘤作用。方法采用MTT法检测阿克替苷对体外培养的人肿瘤细胞增殖的抑制作用;体内试验采用小鼠H22肝癌,小鼠Lewis肺癌接种小鼠,连续给药14 d,计算抑瘤率。结果阿克替苷在25～100μg/ml剂量范围内对肿瘤细胞均有抑制作用;体内试验结果显示小鼠分别灌胃给予2.5、5、10 mg/kg 3个剂量的阿克替苷,对接种的H22细胞株的抑瘤率为17.18%～70.28%,对接种的Lewis肺癌细胞株的抑瘤率为16.9%～55.3%。结论阿克替苷对体外培养的人肿瘤细胞和接种的小鼠肿瘤具有明显抑制作用。

阿克替苷对大鼠试验性前列腺增生模型的抑制作用

去势大鼠皮下注射丙酸睾酮建立良性前列腺增生模型,阿克替苷[40、20 mg.(kg.d)-1]灌胃4周。光学显微镜观察前列腺细胞结构;免疫组织化学方法检测雄激素受体(AR)和转化生长因子型受体(TGF-β1R)的表达。探讨管花肉苁蓉的化学成分阿克替苷对大鼠实验性前列腺增生模型的抑制作用。结果表明:阿克替苷可明显减轻大鼠前列腺湿重指数,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。高剂量阿克替苷使前列腺上皮细胞AR表达减弱,GFβR1的表达亦减弱,与模型组比较差异显著性(P<0.01)。证明阿克替苷可通过下调AR及TGF-β1R表达抑制上皮细胞增殖,从而抑制大鼠试验性前列腺增生。

阿克替苷抑制大鼠前列腺增生的药理学研究

建立良性前列腺增生大鼠模型,用不同剂量的阿克替苷灌胃4周,研究肉苁蓉的化学成分阿克替苷对前列腺增生大鼠前列腺细胞凋亡和超微结构的影响。结果表明:模型组细胞凋亡率较低;高剂量阿克替苷处理后,大鼠前列腺细胞凋亡率明显高于模型组。超微结构显示阿克替苷较模型组细胞核完整,细胞核浓缩不明显,细胞核致密度增高,粗面内质网空泡减少。证明阿克替苷能促进细胞凋亡,对超微结构有明显的改善作用,因而抑制前列腺增生。

阿克替苷通过激活血红素加氧酶-1抑制H_(2)O_(2)诱导的视网膜神经节细胞氧化损伤

目的研究阿克替苷对视网膜神经节细胞(RGC-5)的保护作用及其机制。方法将RGC-5细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、阿克替苷+H_(2)O_(2)组(1μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)、30μmol·L^(-1)阿克替苷分别预处理细胞2 h),MTT法检测各组细胞活力;后续实验阿克替苷+H_(2)O_(2)组选择阿克替苷30μmol·L^(-1)作为治疗浓度,荧光探针H2DCF-DA检测活性氧(ROS)产生和罗丹明123检测线粒体膜电位,Western blot检测各组细胞中Bcl-2、Bcl-2/Bax、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。机制研究中首先用不同浓度阿克替苷单独处理RGC-5细胞24 h,Western blot检测血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平,进一步锌原卟啉(ZnPP)预处理RGC-5细胞1 h,而后30μmol·L^(-1)阿克替苷单独预处理后与200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)共孵育24 h,通过MTT法测定细胞活力。结果与对照组相比,H_(2)O_(2)组中细胞活力明显降低(P<0.01)。与H_(2)O_(2)组相比,阿克替苷+H_(2)O_(2)组中10μmol·L^(-1)、30μmol·L^(-1)阿克替苷预处理可显著提高细胞活力(P<0.05、P<0.01)。与对照组相比,H_(2)O_(2)组RGC-5细胞ROS生成明显增加,线料体膜电位显著降低,同时Bcl-2/Bax比值降低和Caspase-3蛋白相对表达量增加(均为P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,阿克替苷+H_(2)O_(2)组RGC-5细胞ROS生成减少,线粒体膜电位增加,Bcl-2/Bax比值提高,Caspase-3蛋白相对表达量减少(均为P<0.05)。与阿克替苷未处理组相比,阿克替苷剂量依赖性诱导HO-1蛋白的表达,与阿克替苷+H_(2)O_(2)组相比,加入ZnPP后细胞活力降低(P<0.01),说明HO-1抑制剂ZnPP降低了阿克替苷对H_(2)O_(2)损伤的抑制作用。结论阿克替苷能够通过上调HO-1表达抑制H_(2)O_(2)诱导的RGC-5氧化应激损伤。

紫葳科植物猫爪藤阿克替苷的提取富集工艺

建立UPLC测定猫爪藤Macfadyena unguis-cati阿克替苷含量的方法,采用单因素实验和正交试验优化阿克替苷提取工艺,通过静态、动态吸附与解吸实验筛选适合富集阿克替苷的大孔树脂,并对富集工艺进行研究。UPLC条件:色谱柱HSST3柱(2.1×100 mm,1.8μm);流动相0.1%甲酸(A)-乙腈(B);梯度90%A 5 min,75%A 7.5 min,30%A 9 min,90%A;检测波长310 nm;柱温25℃;流速0.3 mL·min^(-1);保留时间5.21 min。在UPLC条件下阿克替苷在0.25~100 ng进样范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系,回归方程为Y=89.002X-4.8275,R=0.9999。单因素实验显示,70%乙醇为最佳提取溶剂。正交试验确定最佳提取条件为70%乙醇,料液比1∶10,提取时间12 h。静态、动态吸附和解吸实验确定HP-20大孔树脂为最佳富集材料。富集工艺为4倍体积15%乙醇洗脱除杂后收集4倍体积40%乙醇洗脱的部分。

阿克替苷通过调控JNK信号通路促进肝癌细胞自噬与凋亡的实验研究

探讨阿克替苷(acteoside)通过JNK信号通路抑制H22荷瘤小鼠瘤体的分子机制。50只BALB/c雄性小鼠经H22肝癌细胞皮下造模后,分为模型组、顺铂组以及阿克替苷低、中、高剂量组5组,每组均给药2周,每周连续给药5 d。观察各组小鼠精神、饮食、饮水、活动度、皮毛等一般状况。比较给药前后小鼠体质量变化及各组小鼠瘤体体积、瘤重和抑瘤率。HE染色观察肝癌组织形态学变化,免疫组化和Western blot检测各肿瘤组织中p-JNK、JNK、Bcl-2、Beclin-1和LC3的表达,qRT-PCR检测JNK、Bcl-2、Beclin-1和LC3 mRNA的表达。模型组和阿克替苷低剂量组小鼠一般状况较差,其余3组小鼠的一般状况均改善。阿克替苷中、高剂量组和顺铂组小鼠体质量小于模型组(P<0.01)。模型组瘤体体积与阿克替苷低剂量组比差异无统计学意义,顺铂组瘤体体积与阿克替苷高剂量组比差异无统计学意义。阿克替苷中、高剂量组和顺铂组瘤体体积和瘤重与模型组相比显著减小(P<0.001)。阿克替苷低、中、高剂量组和顺铂组的抑瘤率分别为10.72%、40.32%、53.79%、56.44%。HE染色显示,阿克替苷组和顺铂组肝癌细胞数逐渐减少,细胞坏死征象不断增多,阿克替苷高剂量组和顺铂组坏死区域较多。免疫组化结果显示,阿克替苷组和顺铂组可上调Beclin-1、LC3、p-JNK、JNK的表达(P<0.05)。免疫组化、Western blot和qRTPCR结果显示,阿克替苷中、高剂量组和顺铂组可下调Bcl-2的表达(P<0.01)。Western blot结果显示,阿克替苷组和顺铂组可上调Beclin-1、LC3和p-JNK的表达(P<0.01),各组JNK的表达水平差异无统计学意义。qRT-PCR结果显示,阿克替苷组和顺铂组可上调Beclin-1、LC3 mRNA的水平(P<0.05),阿克替苷中、高剂量组和顺铂组可上调JNK mRNA的水平(P<0.001)。综上,阿克替苷可上调JNK信号通路促进H22荷瘤小鼠肝癌细胞的凋亡和自噬进而发挥抑制瘤体生长的作用。

阿克替苷对大鼠前列腺增生的组织形态及其对凋亡蛋白表达的影响

目的研究阿克替苷对大鼠前列腺增生的组织形态及Bax和Bcl-2表达的影响。方法大鼠予以50 mg·kg^(-1)丙酸睾丸,隔日皮下注射,连续4周,构建前列腺增生模型。建模成功后,将其分为模型组、对照组和低、中、高3个剂量实验组,每组各10只。另取,10只正常大鼠作为空白组。空白组和模型组均予以等剂量0.9%Na Cl,灌胃;对照组予以0.8 mg·kg^(-1)非那雄胺,灌胃;低、中、高3个剂量实验组分别予以20,40,80 mg·kg^(-1)阿克替苷,灌胃。6组大鼠每天灌胃1次,连续6周。取各组大鼠前列腺组织并称重,计算前列腺指数。用组织切片观察各组大鼠前列腺组织的病理形态,用免疫印迹法检测各组大鼠前列腺Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果空白组、模型组、对照组、低、中、高3个剂量实验组的前列腺湿重分别为(815.52±262.68),(1220.49±353.52),(1075.25±174.03),(1103.00±106.23),(816.12±132.87)和(815.37±106.81)mg,前列腺指数分别为(2.43±0.85)%,(3.74±0.78)%,(3.15±0.28)%,(3.10±0.22)%,(2.53±0.41)%和(2.48±0.37)%,Bax分别为(11.41±2.72)%,(8.49±2.01)%,(10.17±2.87)%,(9.09±1.98)%,(11.01±2.04)%和(11.10±1.91)%,Bcl-2分别为(7.79±1.74)%,(13.79±3.59)%,(10.23±2.74)%,(12.18±2.10)%,(8.53±2.62)%和(8.61±1.99)%,模型组、低剂量实验组的上述指标与中、高2个剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论阿克替苷能显著抑制前列腺增生,其机制可能是通过调节Bcl-2和Bax的表达,从而促进良性前列腺增生的细胞凋亡。

毛蕊花糖苷抗肿瘤机制研究进展

综述了毛蕊花糖苷抗肿瘤机制的研究进展,毛蕊花糖苷通过抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移,诱导肿瘤细胞凋亡、分化及逆转其多药耐药等多重机制发挥抗肿瘤作用。研究显示毛蕊花糖苷也在肿瘤的化学预防中发挥着重要作用。

中草药有效提取物抗肝细胞癌的研究进展

中草药有效提取物因其独特的抗炎、抗氧化、免疫调节、抗肿瘤以及逆转耐药等特点成为目前的研究热点。众多中草药有效提取物在肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移方面可发挥重要作用,如阿克替苷、异泽兰黄素、丹参酮、复方黄芪丹参提取物、甘草香豆素和白藜芦醇等均具有抑制肝癌细胞增殖、促进细胞凋亡的作用;此外,它们还具有其他独特的抗肝细胞癌作用。目前,肝细胞癌的治疗以多学科治疗方式为主,且方法较多,而药物治疗在中晚期患者中发挥了关键作用,故亟须研发抗肝细胞癌作用明显且不良反应少的药物,以期为多种中草药有效提取物协同抗肝细胞癌提供重要的理论依据。