基于HPLC-QAMS法同时测定清肺散结丸中阿克苷、苦玄参苷ⅠB、苦玄参苷ⅠA、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ的含量

目的:建立高效液相一测多评法同时测定清肺散结丸中阿克苷、苦玄参苷ⅠB、苦玄参苷ⅠA、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷ⅩLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ的含量。方法:采用高效液相一测多评法,以Welch Material C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,柱温:25℃;流动相为乙腈-0.2%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.9 ml·min-1;检测波长分别为264 nm(检测阿克苷、苦玄参苷ⅠB和苦玄参苷ⅠA)和203 nm(检测三七皂苷R1、绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ)。以苦玄参苷ⅠA为内参物,建立其与阿克苷、苦玄参苷ⅠB、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ的相对校正因子,计算各成分含量。结果:阿克苷、苦玄参苷ⅠB、苦玄参苷ⅠA、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ分别在1.87~46.75μg·ml-1(r=0.9991)、2.03~50.75μg·ml-1(r=0.9997)、1.06~26.50μg·ml-1(r=0.9993)、0.97~24.25μg·ml-1(r=0.9996)、0.81~20.25μg·ml-1(r=0.9991)、1.39~34.75μg·ml-1(r=0.9997)、2.26~56.50μg·ml-1(r=0.9995)范围内线性关系良好;平均加样回收率(RSD)分别为98.83%(0.97%),100.11%(0.62%),97.92%(1.38%),96.96%(1.40%),97.74%(1.18%),99.15%(0.89%)和99.36%(1.01%)(n=9);一测多评法的计算值与外标法(ESM)测定值间无明显差异。结论:所建立的HPLC-QAMS法结果准确,可用于清肺散结丸的质量控制。

天然植物中阿克苷抗氧化作用研究进展

阿克苷为苯丙素苷类单体化合物,属天然多酚类成分,可从多种植物中分离提纯得到。阿克苷具有强抗氧化作用,可通过清除自由基、抑制细胞色素P450 2E1等作用和(或)协同超氧化物歧化酶、谷胱甘肽等抗氧化物质对抗氧化应激,从而保护因氧化应激造成的细胞和生物大分子损伤,对阿克苷的生理活性研究可为开发新一类抗机体氧化药物提供科学依据。

HPLC同时测定裸花紫珠叶中金石蚕苷、阿克苷和木犀草苷含量

目的 HPLC法同时测定裸花紫珠叶中金石蚕苷、阿克苷和木犀草苷的含量。方法色谱柱为COSMOSIL 5C18-MS-Ⅱ柱(4.6 ID×250 mm),检测波长为330 nm,以乙腈-0.1%磷酸水溶液(21∶79∶0.1)为流动相,体积流量:0.8 m L·min^(-1)。结果金石蚕苷、阿克苷和木犀草苷的线性范围分别为41.25~1320.0 ng(r=0.9999)、103.125~3300.0 ng(r=1.0000)和2.578~8.25 ng(r=0.9999);平均回收率分别为96.19%、100.69%和103.58%。结论该法简便、快捷、准确,可用于裸花紫珠叶中金石蚕苷、阿克苷和木樨草苷的含量测定。

HPLC同时测定裸花紫珠叶中金石蚕苷、阿克苷和木犀草苷含量

目的 HPLC法同时测定裸花紫珠叶中金石蚕苷、阿克苷和木犀草苷的含量。方法 色谱柱为COSMOSIL 5C18-MS-Ⅱ柱（4.6 ID×250 mm）,检测波长为330 nm,以乙腈-0.1%磷酸水溶液（21∶79∶0.1）为流动相,体积流量：0.8 m L·min-1。结果 金石蚕苷、阿克苷和木犀草苷的线性范围分别为41.25-1320.0 ng（r=0.9999）、103.125-3300.0 ng（r=1.0000）和2.578-8.25 ng（r=0.9999）;平均回收率分别为96.19%、100.69%和103.58%。结论 该法简便、快捷、准确,可用于裸花紫珠叶中金石蚕苷、阿克苷和木樨草苷的含量测定。

阿克替苷通过调控ERK1/2信号通路抑制肝癌细胞上皮间质转化

目的探讨阿克替苷(ACT)通过调控ERK1/2通路抑制人肝癌HCCLM3细胞上皮间质转化(EMT)的作用及其机制。方法CCK-8法检测肝癌细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测肝癌细胞侵袭及迁移能力;实时定量PCR和蛋白质印迹实验检测ACT对ERK1/2信号通路和上皮间质转化相关基因(E-cadherin、N-cadherin)mRNA和蛋白的表达。结果CCK-8法检测结果显示,ACT可降低肝癌HCCLM3细胞的活性,抑制肝癌细胞的增殖能力,并与药物浓度和时间有一定的相关性。划痕实验和Transwell实验结果显示,ACT能抑制肝癌HCCLM3细胞迁移和侵袭能力,并呈浓度依赖性。荧光定量PCR和蛋白质印迹实验表明,ACT可下调ERK1/2信号通路相关基因mRNA和蛋白的表达,上调EMT相关基因E-cadherin mRNA和蛋白的表达,下调N-cadherin mRNA和蛋白的表达。结论ACT可抑制人肝癌HCCLM3细胞EMT、侵袭及迁移,其作用机制与下调ERK1/2信号通路密切相关。

阿克替苷的体内外抗肿瘤作用研究

目的探讨阿克替苷(acteoside)的抗肿瘤作用。方法采用MTT法检测阿克替苷对体外培养的人肿瘤细胞增殖的抑制作用;体内试验采用小鼠H22肝癌,小鼠Lewis肺癌接种小鼠,连续给药14 d,计算抑瘤率。结果阿克替苷在25～100μg/ml剂量范围内对肿瘤细胞均有抑制作用;体内试验结果显示小鼠分别灌胃给予2.5、5、10 mg/kg 3个剂量的阿克替苷,对接种的H22细胞株的抑瘤率为17.18%～70.28%,对接种的Lewis肺癌细胞株的抑瘤率为16.9%～55.3%。结论阿克替苷对体外培养的人肿瘤细胞和接种的小鼠肿瘤具有明显抑制作用。

阿克替苷对大鼠试验性前列腺增生模型的抑制作用

去势大鼠皮下注射丙酸睾酮建立良性前列腺增生模型,阿克替苷[40、20 mg.(kg.d)-1]灌胃4周。光学显微镜观察前列腺细胞结构;免疫组织化学方法检测雄激素受体(AR)和转化生长因子型受体(TGF-β1R)的表达。探讨管花肉苁蓉的化学成分阿克替苷对大鼠实验性前列腺增生模型的抑制作用。结果表明:阿克替苷可明显减轻大鼠前列腺湿重指数,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。高剂量阿克替苷使前列腺上皮细胞AR表达减弱,GFβR1的表达亦减弱,与模型组比较差异显著性(P<0.01)。证明阿克替苷可通过下调AR及TGF-β1R表达抑制上皮细胞增殖,从而抑制大鼠试验性前列腺增生。

阿克替苷抑制大鼠前列腺增生的药理学研究

建立良性前列腺增生大鼠模型,用不同剂量的阿克替苷灌胃4周,研究肉苁蓉的化学成分阿克替苷对前列腺增生大鼠前列腺细胞凋亡和超微结构的影响。结果表明:模型组细胞凋亡率较低;高剂量阿克替苷处理后,大鼠前列腺细胞凋亡率明显高于模型组。超微结构显示阿克替苷较模型组细胞核完整,细胞核浓缩不明显,细胞核致密度增高,粗面内质网空泡减少。证明阿克替苷能促进细胞凋亡,对超微结构有明显的改善作用,因而抑制前列腺增生。

阿克替苷通过激活血红素加氧酶-1抑制H_(2)O_(2)诱导的视网膜神经节细胞氧化损伤

目的研究阿克替苷对视网膜神经节细胞(RGC-5)的保护作用及其机制。方法将RGC-5细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、阿克替苷+H_(2)O_(2)组(1μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)、30μmol·L^(-1)阿克替苷分别预处理细胞2 h),MTT法检测各组细胞活力;后续实验阿克替苷+H_(2)O_(2)组选择阿克替苷30μmol·L^(-1)作为治疗浓度,荧光探针H2DCF-DA检测活性氧(ROS)产生和罗丹明123检测线粒体膜电位,Western blot检测各组细胞中Bcl-2、Bcl-2/Bax、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。机制研究中首先用不同浓度阿克替苷单独处理RGC-5细胞24 h,Western blot检测血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平,进一步锌原卟啉(ZnPP)预处理RGC-5细胞1 h,而后30μmol·L^(-1)阿克替苷单独预处理后与200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)共孵育24 h,通过MTT法测定细胞活力。结果与对照组相比,H_(2)O_(2)组中细胞活力明显降低(P<0.01)。与H_(2)O_(2)组相比,阿克替苷+H_(2)O_(2)组中10μmol·L^(-1)、30μmol·L^(-1)阿克替苷预处理可显著提高细胞活力(P<0.05、P<0.01)。与对照组相比,H_(2)O_(2)组RGC-5细胞ROS生成明显增加,线料体膜电位显著降低,同时Bcl-2/Bax比值降低和Caspase-3蛋白相对表达量增加(均为P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,阿克替苷+H_(2)O_(2)组RGC-5细胞ROS生成减少,线粒体膜电位增加,Bcl-2/Bax比值提高,Caspase-3蛋白相对表达量减少(均为P<0.05)。与阿克替苷未处理组相比,阿克替苷剂量依赖性诱导HO-1蛋白的表达,与阿克替苷+H_(2)O_(2)组相比,加入ZnPP后细胞活力降低(P<0.01),说明HO-1抑制剂ZnPP降低了阿克替苷对H_(2)O_(2)损伤的抑制作用。结论阿克替苷能够通过上调HO-1表达抑制H_(2)O_(2)诱导的RGC-5氧化应激损伤。

紫葳科植物猫爪藤阿克替苷的提取富集工艺

建立UPLC测定猫爪藤Macfadyena unguis-cati阿克替苷含量的方法,采用单因素实验和正交试验优化阿克替苷提取工艺,通过静态、动态吸附与解吸实验筛选适合富集阿克替苷的大孔树脂,并对富集工艺进行研究。UPLC条件:色谱柱HSST3柱(2.1×100 mm,1.8μm);流动相0.1%甲酸(A)-乙腈(B);梯度90%A 5 min,75%A 7.5 min,30%A 9 min,90%A;检测波长310 nm;柱温25℃;流速0.3 mL·min^(-1);保留时间5.21 min。在UPLC条件下阿克替苷在0.25~100 ng进样范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系,回归方程为Y=89.002X-4.8275,R=0.9999。单因素实验显示,70%乙醇为最佳提取溶剂。正交试验确定最佳提取条件为70%乙醇,料液比1∶10,提取时间12 h。静态、动态吸附和解吸实验确定HP-20大孔树脂为最佳富集材料。富集工艺为4倍体积15%乙醇洗脱除杂后收集4倍体积40%乙醇洗脱的部分。

大孔吸附树脂结合HSCCC分离小叶苦丁茶中2个苯乙醇苷

目的采用大孔吸附树脂结合高速逆流色谱(HSCCC)分离小叶苦丁茶中2个苯乙醇苷。方法药材水提液直接上树脂柱,50%甲醇洗脱部位直接进行HSCCC分离。以乙酸乙酯-正丁醇-水(5∶2∶5)为两相溶剂体系;上相为固定相,下相为流动相;转速850 r/min;体积流量10 mL/min。结果大孔吸附树脂能快速富集阿克苷、紫茎女贞苷A,HSCCC仅需500 min就可从1 g富集分段样品中得到两者,质量分别为300、265 mg,纯度分别为96.5%、98%。结论该方法可快速、大量地同时分离出小叶苦丁茶中高纯度的阿克苷、紫茎女贞苷A。

毛蕊花糖苷抗肿瘤机制研究进展

综述了毛蕊花糖苷抗肿瘤机制的研究进展,毛蕊花糖苷通过抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移,诱导肿瘤细胞凋亡、分化及逆转其多药耐药等多重机制发挥抗肿瘤作用。研究显示毛蕊花糖苷也在肿瘤的化学预防中发挥着重要作用。

阿克替苷通过调控JNK信号通路促进肝癌细胞自噬与凋亡的实验研究

探讨阿克替苷(acteoside)通过JNK信号通路抑制H22荷瘤小鼠瘤体的分子机制。50只BALB/c雄性小鼠经H22肝癌细胞皮下造模后,分为模型组、顺铂组以及阿克替苷低、中、高剂量组5组,每组均给药2周,每周连续给药5 d。观察各组小鼠精神、饮食、饮水、活动度、皮毛等一般状况。比较给药前后小鼠体质量变化及各组小鼠瘤体体积、瘤重和抑瘤率。HE染色观察肝癌组织形态学变化,免疫组化和Western blot检测各肿瘤组织中p-JNK、JNK、Bcl-2、Beclin-1和LC3的表达,qRT-PCR检测JNK、Bcl-2、Beclin-1和LC3 mRNA的表达。模型组和阿克替苷低剂量组小鼠一般状况较差,其余3组小鼠的一般状况均改善。阿克替苷中、高剂量组和顺铂组小鼠体质量小于模型组(P<0.01)。模型组瘤体体积与阿克替苷低剂量组比差异无统计学意义,顺铂组瘤体体积与阿克替苷高剂量组比差异无统计学意义。阿克替苷中、高剂量组和顺铂组瘤体体积和瘤重与模型组相比显著减小(P<0.001)。阿克替苷低、中、高剂量组和顺铂组的抑瘤率分别为10.72%、40.32%、53.79%、56.44%。HE染色显示,阿克替苷组和顺铂组肝癌细胞数逐渐减少,细胞坏死征象不断增多,阿克替苷高剂量组和顺铂组坏死区域较多。免疫组化结果显示,阿克替苷组和顺铂组可上调Beclin-1、LC3、p-JNK、JNK的表达(P<0.05)。免疫组化、Western blot和qRTPCR结果显示,阿克替苷中、高剂量组和顺铂组可下调Bcl-2的表达(P<0.01)。Western blot结果显示,阿克替苷组和顺铂组可上调Beclin-1、LC3和p-JNK的表达(P<0.01),各组JNK的表达水平差异无统计学意义。qRT-PCR结果显示,阿克替苷组和顺铂组可上调Beclin-1、LC3 mRNA的水平(P<0.05),阿克替苷中、高剂量组和顺铂组可上调JNK mRNA的水平(P<0.001)。综上,阿克替苷可上调JNK信号通路促进H22荷瘤小鼠肝癌细胞的凋亡和自噬进而发挥抑制瘤体生长的作用。

HPLC法测定不同产地苦玄参中3种成分的含量

目的：采用HPLC法测定不同产地苦玄参中阿克苷、苦玄参苷ⅠA和苦玄参苷ⅠB的含量。方法：Waters色谱柱（250mm×4.6 mm,5μm）;流动相：乙腈-0.8%醋酸溶液（40∶60）;流速：0.8 m L/min;检测波长：264nm;柱温：30℃;进样量：20μL。结果：不同产地5批苦玄参中的阿克苷、苦玄参苷ⅠA和苦玄参苷ⅠB含量分别为2.0~3.5mg/g、1.9~3.1mg/g和1.3~1.9mg/g。结论：阿克苷、苦玄参苷ⅠA和苦玄参苷ⅠB的HPLC同时检测为苦玄参的质量控制提供了参考。广西产苦玄参质量较好。

阿克替苷对大鼠前列腺增生的组织形态及其对凋亡蛋白表达的影响

目的研究阿克替苷对大鼠前列腺增生的组织形态及Bax和Bcl-2表达的影响。方法大鼠予以50 mg·kg^(-1)丙酸睾丸,隔日皮下注射,连续4周,构建前列腺增生模型。建模成功后,将其分为模型组、对照组和低、中、高3个剂量实验组,每组各10只。另取,10只正常大鼠作为空白组。空白组和模型组均予以等剂量0.9%Na Cl,灌胃;对照组予以0.8 mg·kg^(-1)非那雄胺,灌胃;低、中、高3个剂量实验组分别予以20,40,80 mg·kg^(-1)阿克替苷,灌胃。6组大鼠每天灌胃1次,连续6周。取各组大鼠前列腺组织并称重,计算前列腺指数。用组织切片观察各组大鼠前列腺组织的病理形态,用免疫印迹法检测各组大鼠前列腺Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果空白组、模型组、对照组、低、中、高3个剂量实验组的前列腺湿重分别为(815.52±262.68),(1220.49±353.52),(1075.25±174.03),(1103.00±106.23),(816.12±132.87)和(815.37±106.81)mg,前列腺指数分别为(2.43±0.85)%,(3.74±0.78)%,(3.15±0.28)%,(3.10±0.22)%,(2.53±0.41)%和(2.48±0.37)%,Bax分别为(11.41±2.72)%,(8.49±2.01)%,(10.17±2.87)%,(9.09±1.98)%,(11.01±2.04)%和(11.10±1.91)%,Bcl-2分别为(7.79±1.74)%,(13.79±3.59)%,(10.23±2.74)%,(12.18±2.10)%,(8.53±2.62)%和(8.61±1.99)%,模型组、低剂量实验组的上述指标与中、高2个剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论阿克替苷能显著抑制前列腺增生,其机制可能是通过调节Bcl-2和Bax的表达,从而促进良性前列腺增生的细胞凋亡。

中草药有效提取物抗肝细胞癌的研究进展

中草药有效提取物因其独特的抗炎、抗氧化、免疫调节、抗肿瘤以及逆转耐药等特点成为目前的研究热点。众多中草药有效提取物在肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移方面可发挥重要作用,如阿克替苷、异泽兰黄素、丹参酮、复方黄芪丹参提取物、甘草香豆素和白藜芦醇等均具有抑制肝癌细胞增殖、促进细胞凋亡的作用;此外,它们还具有其他独特的抗肝细胞癌作用。目前,肝细胞癌的治疗以多学科治疗方式为主,且方法较多,而药物治疗在中晚期患者中发挥了关键作用,故亟须研发抗肝细胞癌作用明显且不良反应少的药物,以期为多种中草药有效提取物协同抗肝细胞癌提供重要的理论依据。

弯管列当的化学成分研究

目的研究列当科药用植物弯管列当Orobanche cernua全草的化学成分。方法利用大孔树脂、硅胶、MCI、SephadexLH-20等柱色谱技术分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从弯管列当全草70%乙醇提取物分离鉴定了12个化合物,其中8个为苯乙醇苷类：阿克苷（1）、campneoside II（2）、crenatoside（3）、campneoside I（4）、isocrenatoside（5）、异阿克苷（6）、leucosceptoside A（7）和肉苁蓉苷F（8）;3个为木脂素类：丁香脂素-4′-O-β-D-葡萄糖苷（9）、连翘脂素-4′-O-β-D-葡萄糖苷（10）和isoeucommin A（11）;1个为甾醇类：豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷（12）。结论化合物7和12为首次从列当科植物中分离得到;4、7、9~12为首次从列当属植物中分离得到,2、4、6~12为首次从该植物中分离得到。