新型阿卡斑病毒NSs蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备

【目的】对新型阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)非结构蛋白(non-structura,NSs)进行生物信息学分析,进而制备抗多克隆抗体,为新型AKAV检测及功能研究提供必要材料。【方法】使用蛋白生物信息学在线分析网站,对新型AKAV NSs蛋白进行系统分析。克隆NSs全长基因,利用大肠杆菌表达系统表达NSs重组蛋白,优化蛋白诱导条件并分析重组蛋白的可溶性;收获破碎菌体,经8 mol/L尿素变性、Ni 2+-NTA亲和层析纯化、透析及浓缩后进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定;将纯化的重组NSs蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;应用间接ELISA、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)测定多克隆抗体效价及特异反应性。【结果】生物信息学分析表明,NSs蛋白由91个氨基酸残基构成,等电点为12.10,属于碱性蛋白,不稳定指数约为79.04,平均亲水性为指数为―0.059,为不稳定的亲水蛋白;无跨膜区和信号肽,属于非分泌蛋白。试验成功构建了NSs蛋白原核表达载体pET-32a-NSs,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定显示,成功表达重组NSs蛋白,分子质量为29.3 ku,主要以包涵体形式存在,与生物信息学分析结果一致;制备的多克隆抗体效价可达1∶16384000,Western blotting和IFA结果表明所制备抗体能够与NSs蛋白发生特异性反应,具有较好的特异性。【结论】试验成功获得纯化的新型AKAV NSs蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性;制备获得效价高、特异性好的多克隆抗体,为后续新型AKAV疫苗开发、检测及NSs蛋白功能研究提供了基础。

阿卡斑病毒研究进展

阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)可感染多种家养动物及野生动物,引起动物流产、早产、死胎、胎儿先天性畸形及脑脊髓炎等临床症状。AKAV以蚊虫和库蠓为主要传播媒介,已在多个国家地区被报道,严重影响家畜养殖业并造成了较大的经济损失。因AKAV分布广泛,危害较大,其感染引起的阿卡斑病(Akababe disease,AKAD)已是世界动物卫生组织(WOAH)法定通报的疾病之一。对AKAV的病原学、流行病学、临床症状、致病机制及诊断方法进行综述,以期为AKAD的预防与控制提供参考。

父亲的缺位——论《阿卡迪亚》中的知识逻辑与性别秩序

在当代英国剧作家汤姆·斯托帕德所著《阿卡迪亚》中,贵族家庭里父亲的缺席和学术场域中权威的消解具有某种相似性,不仅表明传统父权秩序走向了崩塌,更体现出以颠覆与重述为核心的知识逻辑。这种知识逻辑贯穿剧中人物对知识的追寻、认知与重构,其背后则是理性与感性以及人文与科学的结合。首先,生活在19世纪英国的贵族小姐托马西娜具有罕见的科学禀赋,亦怀揣热情与爱,拒绝接受传统性别角色。其次,以汉娜为代表的20世纪当代学者致力于挖掘尘封的历史,坚信在权威论断和主流观点之外,其实另有真相。最后,剧中的一众知识青年慢慢发觉,无论是盲目崇拜理性与逻辑,还是完全遵从自身激情与想象,都会导致对真实的扭曲和对学术事业的破坏,其经历揭示知识霸权的本质在于拒绝多元与差异,固守自封。随着情节发展,对立与冲突被化解,原有秩序下中心与边缘的二元对立消融。通过对比、再现发生在古今不同时空西德利庄园中的故事,斯托帕德构想了一个理性与感性有机结合、古典主义与浪漫主义交融碰撞的图景,指出在知识追寻与生产过程中,人们需要避免急功近利的学术浮夸,努力消除性别对立与学术霸权,以还原女性被父权话语遮蔽的才华,消解依仗传统权力话语关系的逻各斯中心话语体系。

从语言文化转型看景哈阿卡话的中华民族共同体意识

以景哈阿卡话为研究个案,主要从语言结构、语言使用、口传文化、生活习俗以及谱系与历法等方面,分析其中蕴含的中华民族共同体意识,发现景哈哈尼族阿卡人的中华民族共同体意识贯穿于他们的语言文化的方方面面,并呈现出不断增强的趋势。此外,本文还分析了语言文化在共同体背景下出现的各种转型,认为这种转型由中华民族共同体决定的,是社会进步的反映。

阿卡斑病毒培养特性和灭活疫苗免疫效果评估

为制备一种阿卡斑病毒灭活疫苗并初步评价其免疫效果,本研究应用组织半数感染量(TCID_(50))测定的方法对阿卡斑病毒CX-01株在HmLu-1、Vero、BHK-21细胞上的扩繁规律进行判定,研究病毒在终浓度0.002 mol/L的BEI灭活剂、37℃条件下的灭活规律,然后应用ISA 206佐剂乳化制备疫苗,通过小鼠模型评估抗原中的添加剂蔗糖、海藻糖和左旋咪唑对免疫效果的影响。结果:HmLu-1细胞培养病毒效价最高为10^(6.75)TCID_(50)/mL,优于Vero和BHK-21细胞;终浓度为0.002 mol/L的BEI灭活剂处理5 h即可完全灭活病毒,为确保对阿卡斑病毒的灭活完全彻底,在BEI灭活剂用量和灭活条件不变的前提下,选择最优的灭活时间为8 h;添加5%蔗糖、5%海藻糖、1%左旋咪唑的疫苗组免疫效果最好,平均中和抗体滴度为18.0。本研究结果对阿卡斑病毒的培养和灭活疫苗的制备具有一定的借鉴意义。

2022年云南省边境地区牛蓝舌病病毒及阿卡斑病毒抗体检测

为了解云南省边境地区牛蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)与阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)的流行与分布现状,2022年在云南省9个边境县(市)采集1 820份牛血清样本,应用c ELISA方法进行BTV与AKAV抗体检测,并对检测结果利用IBM SPSS Statistics 22、Excel 2007等软件进行区间、群间和时间的分类统计分析。结果显示:共检出BTV阳性样品1 207份,样品阳性率为66.32%(1 207/1 820);检出AKAV阳性样品350份,样品阳性率为32.17%(350/1 088)。各县(市、区)的BTV样品阳性率为43.50%~93.00%,AKAV为12.90%~50.00%,不同地区间的差异有统计学意义(P <0.01);黄牛和西门塔尔牛的BTV和AKAV抗体样品阳性率均高于水牛,入境牛BTV抗体阳性率显著高于本土牛,两组数据差异均有统计学意义(P <0.01);规模养殖场的BTV和AKAV抗体阳性率和散养户差异无统计学意义(P> 0.05);7-8月的BTV和AKAV抗体阳性率显著高于5-6月(P <0.01)。结果表明:BTV和AKAV在云南省边境地区已广泛存在,其感染有加重趋势;病原通过境外牛传入国内的风险不断增加,防控形势较为严峻。因此,云南省应继续加强边境地区BTV、AKAV等虫媒病毒的监控,并制定实施相应防控措施,以保障国内畜牧业健康发展。

小学音乐课堂引入阿卡贝拉的教学策略

教师可通过充分调动学生的感官,简化阿卡贝拉的声部,以节奏为主游戏为辅的方式切入,开展小学音乐课堂阿卡贝拉的教学。

泰国万伟乡阿卡族母语使用状况——兼与中国哈尼族母语使用比较

本文通过实地调查,发现泰国万伟乡阿卡族目前基本上是全民稳定地使用母语阿卡语,但青少年的母语能力出现了一定程度的衰变。文章还将泰国阿卡族与中国哈尼族的母语使用状况进行了比较,主要结果是:1.均全民使用母语;2.青少年母语使用能力均出现下降,但国内哈尼族下降程度更大。

阿卡音乐人紫谷之身份认同建构研究

近年来,“身份”与“认同”这两个概念在社会学领域研究当中备受关注,对于身份认同的研究也在不同方面有不同的诠释。身份认同的建构基于个体与社会之间的互动,是一个相互影响的过程,是人的一种自我意识的体现。在此过程中,强调个体的心理层面和行为方面的一致性。阿卡作为西双版纳傣族自治州哈尼族的一个族群,其音乐受到了外界音乐元素的影响,由从前的原生古歌形式转变为现代流行方式,其间经历了诸多本土知名音乐人的不懈努力。现以阿卡族群内部的一位阿卡流行音乐人紫谷作为研究对象,对其身为阿卡这一特定社会群体的身份认同进行研究。

对比分析《读碑窠石图》与《阿卡迪亚的牧人》

千年前的中国画师李成和几百年前的法国有尼古拉斯·普桑,他俩出生的所处时代和国家都不一样,但他俩都选择了“读碑”这个题材,各画了一幅流传至今的名画。在画种、材料、风格、时代背景、作者经历等都不同的情况下画出来的两张相同题材的画,它们之间却有一些共同点,那就是作者思考人生得出“时光易逝不可留”的哲学思想。

国产与进口阿卡波糖治疗2型糖尿病药物经济学评价的Meta分析

目的对国产与进口阿卡波糖的药物经济学评价进行系统分析，为临床决策和药品集中招标采购提供循证参考。方法通过计算机检索中国期刊全文数据库CNKI、万方数据库、中华医学会和中国医师协会期刊全文数据库、中国生物医学文献服务系统（SinoMed）和中文科技期刊数据库，查找国产和进121阿卡波糖治疗2型糖尿病的所有药物经济学评价，进行数据提取和质量评价后，采用RevMan5．3软件进行Meta分析，并对两种方案采用药物经济学中CEA和最小成本法进行分析。结果共纳入8个研究，合计709例患者。Meta分析显示，国产与进口阿卡波糖片剂治疗2型糖尿病临床总有效率和不良反应发生率分别为[OR合并=1．03，95％CI=（0．68，1．56），P=0．88]和[OR合并=0．70，95％CI=（0．46，1．07），P=0．101。CEA和最小成本法分析均表明，国产阿卡波糖治疗2型糖尿病的经济性优于进口阿卡波糖。结论国产与进口阿卡波糖治疗2型糖尿病临床疗效、不良反应发生率差异均无统计学意义，国产阿卡波糖具有较高的经济优势。

阿卡波糖胶囊剂与进口片剂的临床疗效比较

目的探讨阿卡波糖胶囊剂与进口片剂的临床疗效比较。方法研究对象为2009年7月至2010年12月我院收治的56例2型糖尿病患者,随机分为观察组及对照组,每组28例。观察组给予国产阿卡波糖胶囊剂,对照组给予进口阿卡波糖片剂,观察2组降糖效果。结果治疗后,观察组及对照组的FBG、2hPBG、HbAlc等指标均有显著改善(P<0.05);而同一时期2组之间各指标均无显著差异(P>0.05);观察组的腹胀、腹痛发生率显著低于对照组(P<0.05);而排期增加2组之间无显著差异(P>0.05)。结论 2种降糖药物治疗效果无显著差异,而不良反应上阿卡波糖胶囊剂优于进口阿卡波糖片剂,值得临床上推广应用。

西昆仑山阿卡孜岩体锆石SHRIMP定年及其地球化学特征

西昆仑山阿卡孜岩体是该区已知的最古老侵入体。岩体侵入于太古代赫罗斯坦群(TTG岩系)中。获得最新的单颗粒锆石SHRIMP年龄为2426±46Ma。岩石地球化学研究表明,岩石具有高碱度富K特征;∑REE为409.94×10^(-6)～787.76×10^(-6),δEu为0.48～0.73;微量元素显示富集大离子元素。综合分析该岩体地质地球化学特征,认为该岩体形成于晚太古代～古元古代初期碰撞后拉张背景,是TTG岩系(赫罗斯坦群)重熔的结果。这对研究西昆仑山早前寒武纪陆壳增生及构造演化提供了重要的地质资料。

阿卡斑(赤羽病)病毒的分离与初步鉴定

１９９８年７月－８月从上海地区采集的蚊、蠓等标本中分离到１２株病毒，其中有３株电镜观察病毒近似球形，有囊膜，病毒对乙醚、氯仿和胰蛋白酶敏感，对酸、热不敏感，抵抗５－氟脱氧尿苷。经血清－细胞和动物中和试验鉴定，该三株病毒均能被ＡＫＶ病毒高效价免疫血清中和，其余９株病毒未被ＡＫＶ高价免疫血清中和，经初步鉴定证实上述三株病毒为阿卡斑病毒（Ａｋａｂａｎｅ ｖｉｒｕｓ， ＡＫＶ）。阿卡斑病毒在我国的分离尚属首次报道，具有重要的动物流行病学意义。

阿卡斑病毒竞争ELISA抗体检测方法的建立和比较试验

为建立阿卡斑病毒抗体检测方法,本研究以纯化的阿卡斑病毒作为包被抗原,以制备的抗阿卡斑病毒的多克隆抗体与待检血清竞争结合抗原,采用方阵滴定法优化反应条件,建立了阿卡斑病毒竞争ELISA(cELISA)抗体检测方法。通过对60份牛、羊阿卡斑病毒抗体阳性血清和40份阴性血清样品的检测,确定阴阳性样品抑制率(PI)临界值为60%;特异性试验结果显示,该方法对BTV-1、BTV-4、BTV-9、BTV-16、小反刍兽疫、中山病病毒、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、羊痘和O型、A型、Asia-1型口蹄疫病毒阳性血清无交叉反应;敏感性试验结果显示,标准阳性血清1颐128倍稀释时,检测结果仍为阳性,SNT最低检出为,敏感性高于微量血清中和试验(SNT)检测结果(1颐64);批内和批间变异系数(CV)在0.54%~5.27%和0.3%~9.3%之间,具有较好的可重复性;用该方法与法国IDVET公司的同类试剂盒对85份牛、羊血清样品同时检测,结果显示二者符合率为91.76%,可以替代进口同类产品。本研究建立的检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以用于阿卡斑病毒抗体检测和流行病学调查。

阿卡地新对体外循环心肌缺血再灌注损伤模型犬心肌能量代谢的影响

目的:探讨阿卡地新对体外循环(CPB)心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型犬心肌能量代谢的影响。方法:将犬随机分为对照组、模型组和阿卡地新低、高剂量组(0.8、3.2 mg/kg),每组6只。所有犬行CPB术,除对照组外,其余各组犬建立MIRI模型,并于主动脉阻断60 min后灌注含相应药物的St.Thomas心脏停搏液。分别于转流前和再灌注15、60、90 min时检测并计算心肌葡萄糖和游离脂肪酸(FFA)摄取率、静脉窦血浆中肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量、线粒体中三磷酸腺苷(ATP)含量;分析左心室收缩压(LVSP)和左心室舒张末期压(LVEDP);检测心肌组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)mRNA表达和磷酸化AMPK(p-AMPK)蛋白表达。结果:各组犬转流前的所有指标差异均无统计学意义(P>0.05);转流后,与对照组比较,模型组和各给药组犬3个时间点的心肌葡萄糖摄取率、FAA摄取率、ATP含量、AMPK mRNA表达、p-AMPK蛋白表达和LVSP均明显降低(P<0.05),LVEDP和血浆中CK-MB含量均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,各给药组犬3个时间点的心肌葡萄糖摄取率、FAA摄取率、ATP含量、AMPK mRNA表达、p-AMPK蛋白表达和LVSP均明显升高(P<0.05),LVEDP和血浆中CK-MB含量均明显降低(P<0.05),其中高剂量组较低剂量组变化更明显(P<0.05)。结论:阿卡地新可促进AMPK磷酸化,有助于心肌葡萄糖和FFA的摄取,促使心肌线粒体中ATP增加,有助于减轻CPB术后MIRI。

新型阿卡斑病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR建立及广西边境地区蚊携带新型阿卡斑病毒调查

【目的】建立检测新型阿卡斑病毒(AKAV)的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR,并结合序列测定开展广西边境地区蚊携带新型AKAV调查,了解其流行趋势及遗传进化特征,为建立重要蚊媒病毒病预警机制提供技术支持。【方法】分别针对新型AKAV的S基因和M基因主要变异位点设计引物,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR并通过Ct值、标准曲线斜率、相关系数、扩增效率及扩增准确性等指标确定最佳反应体系及扩增程序;以优化的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测2019年6-10月在广西边境地区采集的139份蚊样品,获得的新型AKAV经测序后采用ClustalW构建遗传进化树。【结果】SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR最佳反应体系:SYBR Premix Ex Taq Ⅱ 10.0μL,上、下游引物(4μmol/L)各1.0μL,标准品或反转录产物2.0μL,双蒸水补齐至20.0μL。扩增程序:95℃预变性30 s;95℃30 s,64℃(S基因)/66℃(M基因)30 s,72℃30 s,进行40个循环。SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测新型AKAV S基因和M基因的极限为1.0×101copies/μL和1.0×102copies/μL,对应的扩增效率分别为98.61%和105.81%,但不能扩增蓝舌病病毒、鹿流行性出血热病毒、竹鼠圆环病毒和布鲁氏杆菌;检测S基因和M基因的批内重复试验、批间重复试验变异系数(CV)均低于5.00%。采用建立的SYBR Green I荧光定量RT-PCR成功从广西边境地区防城港市、东兴市、宁明县、大新县及北海市的阿蚊和库蚊中检出新型AKAV,且均属于基因Ia型,尤其与广东和湖南蠓虫、中华按蚊、致倦库蚊分离毒株具有较高的相似性。【结论】针对新型AKAV S基因和M基因建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点,更适用于检测病毒拷贝数低的样品。此外,从广西边境地区蚊样品中检出的AKAV毒株均为新型AKAV,属于基因Ia型,与广东和湖南蠓虫、中华按蚊、致倦库蚊分离毒株具有较高的相似性,推测新型AKAV已在广西周边省份流行。

沙格列汀联合阿卡波糖治疗初诊老年2型糖尿病的疗效

目的探讨和分析沙格列汀联合阿卡波糖治疗初诊老年2型糖尿病的临床治疗效果。方法将本院2015年1月~2017年1月期间收治的60例初诊老年2型糖尿病患者选取为本次的研究对象,将其按照随机数字表法分为对照组与研究组,每组30例。对照组患者采用阿卡波糖进行治疗,研究组患者采用沙格列汀联合阿卡波糖进行治疗,治疗时间为3个月,将2组患者在分别进行不同方法治疗之后的糖化血红蛋白、低血糖发生率、体质量指数变化以及血糖水平的变化进行观察和对比。结果对照组患者的低血糖发生率为23.33%,研究组患者的低血糖发生率为6.67%,研究组患者的低血糖发生率明显的低于对照组,2组间差异具有统计学意义（P〈0.05）;研究组患者的糖化血红蛋白水平明显的低于对照组患者,2组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）;研究组患者的总治疗费用与对照组相比差异不具有统计学意义。结论沙格列汀联合阿卡波糖治疗初诊老年2型糖尿病的临床治疗效果比较显著,能够使患者的血糖水平得到明显的降低,具有很高的安全性,低血糖发生率也明显降低,同时还可以减少患者的体重影响,治疗过程中的总费用也没有增加,不会对患者造成经济负担。

阿卡贝拉演唱发声技巧的历史演进

阿卡贝拉作为一种新兴的人声演唱形式,深受当代青年人喜爱。在历史进程中,阿卡贝拉经过一系列的发展和演变,形成了特色鲜明的现代阿卡贝拉,通过对传统阿卡贝拉与现代阿卡贝拉的对比,总结归纳出现代阿卡贝拉的艺术特征和表现形式及其手法,从而立足声乐演唱和发声技巧的角度,剖析现代阿卡贝拉真声和气声的频繁使用、多元流行元素的融合、非实意音节的运用、电音技术的发展所带来的革新,通过对真声、气声的使用技法和演唱效果透析现代阿卡贝拉中真声与气声的矛盾与均衡,进而解决现代阿卡贝拉演唱中的声音个性与共性问题。

消失的秋千架——阿卡人“耶苦扎”节的变迁与文化调适分析

秋千这一作为连接世俗与神圣纽带的文化符号在"耶苦扎"节中的消失是阿卡人社会、经济、文化变迁的直接结果。经济和社会发展在带给老帕瓦村阿卡人生产生活方式改变的同时,也带来价值观、意识形态等方面的变化。哈尼族传统节日"耶苦扎"节的举办逐渐由宗教性质向世俗性质转变,同时,"耶苦扎"节开始更加注重社会交往活动的扩大与新的社会关系建构。