侧脑室注射鼠神经生长因子对阿尔茨海默病转基因模型小鼠学习能力及行为学的影响

目的探讨鼠神经生长因子(mNGF)侧脑室注射影响阿尔茨海默病(AD)转基因模型小鼠学习记忆能力及行为学的可能机制。方法将20只老年痴呆转基因小鼠(C57BL/6J)采用随机数字表法分为AD转基因模型组(AD组)和实验组,每组10只小鼠,另取老年正常C57BL/6J小鼠10只设为老年组。AD组和实验组分3次(间隔10 d)侧脑室注射mNGF,老年组注射等量0.9%氯化钠注射液。用Morris水迷宫视频跟踪分析系统进行空间探索实验;采用全细胞膜片钳记录海马CA1区诱发的群峰电位(PS)和自发性动作电位(AP);采用免疫组化法检测小鼠海马CA1区脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)表达水平;实时定量聚合酶链式反应检测海马CA1区中BDNF mRNA和NGF mRNA水平。结果治疗第40天,实验组小鼠脑薄片海马回CA1区BDNF[(100.51±2.27) ng/mL]和NGF[(159.85±1.23) ng/mL]蛋白阳性表达及BDNF mRNA[(72.02±0.98)β-actin]、NGF mRNA[(67.08±1.16)β-actin]明显升高,PS[(63.02±1.25) mV]和AP[(58.57±0.93) mV]膜电位降低,三组间的治疗前和第40天比较均差异有统计学意义(均P<0.05)。实验组小鼠跨越平台次数(4.29±0.64)明显高于AD组和治疗前同组[(2.85±0.12),(2.68±0.24)](F=49.815,232.391,P<0.05),实验组逃避潜伏期[(21.73±0.54)s]较AD组[(68.59±2.01)s]明显缩短,与AD组和治疗前同组比差异有统计学意义(F=2 910.165,3 137.281,P<0.05)。老年组运动轨迹主要在原平台位置,AD组则主要分散在外周,而实验组运动轨迹在两者之间。结论鼠神经生长因子能促进AD转基因模型小鼠学习记忆能力,其作用机制可能与mNGF稳定海马CA1区膜电位,上调BDNF和NGF蛋白及其基因表达以营养和修复神经有关。

淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默病转基因模型小鼠大脑皮质DMT1表达的影响

目的探讨淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方对阿尔茨海默症(AD)APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠模型大脑皮质二价金属离子转运蛋白1(DMT1)表达的影响。方法将APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠60只,分为模型组、淫羊藿组、黄芪组、葛根组、复方组、去铁胺(DFO)组,C57BL/6J小鼠作为健康对照组。用药结束后,取各组小鼠脑组织,分别采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠大脑皮质DMT1的表达情况。结果免疫组织化学结果显示:阴性对照未见DMT1阳性细胞。与健康对照组相比,模型组DMT1的表达增高;与模型组相比,复方组和DFO组DMT1的表达降低(P<0.05);DFO组与复方组DMT1的表达无明显差异。RT-PCR结果、Western blot结果与免疫组织化学结果相一致。结论淫羊藿、黄芪、葛根有效组分复方可以下调AD模型小鼠大脑皮质DMT1的表达,从而抑制小鼠脑铁超载,缓解铁超载带来的中枢神经系统功能衰退。

CYP46A1过表达对阿尔茨海默病转基因模型小鼠的认知改善和抗炎症作用

目的探讨细胞色素P450 46A1(CYP46A1)对阿尔茨海默病的影响。方法构建含人源CYP46A1的慢病毒载体,通过立体定位仪注射到3月龄的雄性5XFAD转基因小鼠双侧海马中,对照组在相应部位注射空载体。2个月后,通过Morris水迷宫和T迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力,通过免疫组织化学染色和ELISA检测脑组织内β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积情况和炎症水平。结果与对照组相比,CYP46A1过表达组小鼠海马中CYP46A1 mRNA和蛋白表达显著增加,学习记忆能力显著提高。小鼠脑组织海马区域的Aβ斑块面积和星形胶质细胞数量显著减少,β淀粉样蛋白40(Aβ_(40))、Aβ_(42)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平均显著下降。结论 CYP46A1过表达可改善5XFAD转基因小鼠的认知障碍及脑内炎症水平,提示CYP46A1具有抗阿尔茨海默病样的作用。

调补心肾方通过活化PI3K/Akt/mTOR通路促进阿尔茨海默病5xFAD转基因小鼠突触可塑性相关蛋白的合成

目的探讨调补心肾方(党参、制首乌、枸杞子、黄芪等)对阿尔茨海默病5xFAD转基因小鼠突触可塑性的影响及机制。方法取5月龄雄性野生型(WT)小鼠和5xFAD转基因小鼠各18只,分别随机分为对照组(0.9%NaCl)、调补心肾方组(颗粒剂,4.18 g·kg^(-1))、安理申组(盐酸多奈哌齐,0.625 mg·kg^(-1)),每组6只。按照上述分组灌胃给药,每日1次,共60 d。采用透射电镜观察小鼠海马组织超微结构;Western Blot法检测小鼠皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1、NMDAR1、p-CaMKⅡa、CaMKⅡa、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平。结果与WT对照组比较,5xFAD对照组小鼠海马CA1区突触的超微结构不规则,线粒体萎缩、减少,线粒体嵴断裂、消失,突触膜弯曲不规则,突触囊泡减少,突触后致密物(PDS)变薄甚至断裂;皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKⅡa/CaMKⅡa、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均明显下调(P<0.05)。与5xFAD对照组相比较,5xFAD调补心肾方组小鼠海马CA1区突触的超微结构有明显变化,线粒体数量增加,突触囊泡增多,突触膜完整,突触后致密物有增厚现象;皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKⅡa/CaMKⅡa、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论调补心肾方可能通过活化PI3K/Akt/mTOR通路,促进突触可塑性相关蛋白合成,进而改善AD的认知功能障碍。

人脐带间充质干细胞联合莱菔硫烷对阿尔茨海默病转基因小鼠治疗作用的初步研究

目的:探索人源性脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)或莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)单独或联合应用对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)转基因小鼠脑内生物标志物的影响,并为AD治疗策略或进一步研究提供依据。方法:将24只8周龄雄性APP/PS1转基因小鼠随机分为4组,分别接受PBS、SFN、hUC-MSCs单用或与SFN联合治疗。药物腹腔内注射、间充质干经细胞脑室注入,14天后处死小鼠,取大脑进行免疫荧光染色和蛋白质印迹分析。结果:hUC-MSCs和SFN单独或联合使用均能降低大脑皮层Aβ和Tau蛋白水平,联合使用效果更显著。结论:本研究动物实验初步结果见AD主要两个生物标志物Aβ和Tau蛋白下调,提示hUC-MSCs与SFN联合应用可能有效治疗早期AD,这表明SFN和hUCMSCs的联合治疗可能是治疗AD的一种新颖、有效的策略,需要进一步研究。

APP/PS1转基因鼠中阿尔茨海默病对听功能的影响

目的探究在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)进程中APP/PS1转基因鼠的听力和耳蜗组织形态学变化情况,判断AD发生发展是否会影响其听功能。方法选择4、8和12月龄的APP/PS1转基因鼠和同窝野生型小鼠,通过免疫荧光染色法以及听性脑干反应(ABR)等方法检测,比较分析不同月龄APP/PS1转基因鼠的听功能变化情况。结果与对照组相比,4、8和12月龄APP/PS1转基因鼠海马中Aβ斑块显著增多,且随着年龄的增加APP/PS1转基因鼠海马组织中β淀粉样蛋白斑块沉积显著增加,表明随年龄的增加APP/PS1转基因鼠AD呈加重趋势;在4、8和12月龄,与同窝野生型小鼠相比APP/PS1转基因鼠的各频率听力阈值均未见显著差异。耳蜗组织形态学检测结果显示,两种小鼠耳蜗毛细胞、螺旋神经节等内耳关键细胞均无显著差异。APP/PS1转基因鼠和同窝野生型小鼠ABR检测结果显示,随着年龄增长两种小鼠的听力阈值均显著上升,均表现为年龄相关性听力损失。结论APP/PS1转基因鼠的发病进程中存在年龄相关性听力损失,但AD发生发展几乎不会对APP/PS1转基因鼠的听功能产生影响。

PS1/APP双转基因阿尔茨海默病模型传代小鼠的基因型鉴定及其组织学分析

目的对所获的PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(A lzhe im er d isease,AD)模型小鼠进行基因鉴定,进一步对其进行组织学分析,检测老年斑(sen ile p laque,SP)的形成情况。方法设计特定的引物,PCR扩增转入基因组DNA中的APP基因,对转入PS1/APP的小鼠应用刚果红染色结合免疫组化观察Aβ沉积、小胶质细胞和星型胶质细胞的活化。结果与未转入的阴性对照相比,在PS1/APP双转基因的AD小鼠皮质和海马内可见Aβ斑块形成,围绕在Aβ斑块周围的小胶质细胞和星形胶质细胞处于活化状态,形成典型的SP结构。结论我们获得的PS1/APP双转基因小鼠能够模拟AD患者脑内的主要病理过程,提供有效的实验动物模型。

复方丹参片对阿尔茨海默病转基因细胞模型Aβ表达的影响

目的研究复方丹参片对阿尔茨海默病(AD)转基因细胞模型β-淀粉样肽(Aβ)表达的影响。方法用前期试验已构建成功的转基因细胞模型做为AD转基因细胞模型,0.5、1、2、4倍复方丹参片饲养大鼠,取0.5、1、2、4倍浓度大鼠血清培养AD转基因细胞,并在24、48、72h用Western blot方法检测转基因细胞Aβ的表达情况。结果 24h,1倍剂量组量效关系最佳。结论复方丹参片能减少AD转基因细胞模型Aβ的表达。

雌激素对app/ps1双转基因阿尔茨海默病模型小鼠海马老年斑形成的抑制作用

目的 :用无偏性体视学定量研究雌激素对app/ ps1双转基因 (app/ ps1dtg)AD模型小鼠海马β 淀粉样蛋白 (Aβ)沉积及老年斑形成的抑制作用。方法 :雌性app/ ps1dtg小鼠行双侧卵巢切除 ,于颈部皮下植入可持续释放 6 0d的 17β 雌二醇片剂 (17 βestradiol,E2 ) ;6 0d后取脑行冰冻切片 ,6E10免疫组化染色显示沉积于海马的Aβ ,刚果红组织学染色显示老年斑 ,无偏性体视学测量海马内Aβ斑及老年斑的总体积。结果 :E2抑制Aβ在海马内沉积 ,降低海马内Aβ斑的总体积 ,并抑制老年斑的形成。 结论 :E2防治阿尔茨海默病可能与E2抑制Aβ在脑内沉积并聚集形成老年斑有关。

复方丹参片对阿尔茨海默病转基因细胞模型Tau蛋白表达的影响

目的研究复方丹参片对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)转基因细胞模型微管相关蛋白(Tau蛋白)表达的影响。方法将SD大鼠随机分成复方丹参片0.5、1、2、4倍剂量组、空白对照组及多奈哌齐组,分别灌服相应药液,空白组给予等容积生理盐水,1次/日,连续7 d之后,取各组血清培养AD转基因细胞,于24、48、72 h采用Western Blot法分析AD转基因细胞Tau蛋白表达情况。结果与空白对照组相比,24 h时复方丹参片1、2、4倍剂量组能降低Tau蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.01);48 h时复方丹参片2、4倍剂量组差异有统计学意义(P<0.01);72 h时各剂量组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论复方丹参片2倍剂量48 h时能显著减少AD转基因细胞模型Tau蛋白表达。

APP／PS双转基因阿尔茨海默病小鼠模型的老年斑及行为学动态分析

目的研究APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠模型老年斑形成和行为改变的动态过程。方法将转APPswe突变基因小鼠与转PSΔE9基因突变小鼠杂交,PCR鉴定APPswe/PSΔE9双突变转基因小鼠的基因表型,筛选阳性小鼠建立APPswe/PSΔE9双转基因C57BL/6J小鼠模型。抗Aβ免疫组化、改良Bieschowsky银染法、Thioflavin-S荧光分别动态检测3、4、5、6、9、12月龄APPswe/PSΔE9双转基因小鼠大脑病理改变。荷兰Noldus公司Ethovision XT监测分析软件动态观察3、6、9月龄的APPswe/PSΔE9双转基因小鼠Morris水迷宫行为学改变。利用SPSS16.0软件统计分析。结果建立了人APPswe/PSΔE9双转基因阿尔茨海默病小鼠模型。3月龄APP/PS1双转基因小鼠大脑组织抗Aβ1-17免疫组织化学、改良Bieschowsky银染法、Thioflavin-S荧光未检测到有明显老年斑形成。4.5月龄APPswe/PSΔE9双转基因小鼠大脑组织上述三种方法均可检测到老年斑。9、12月龄双转基因小鼠老年斑数量体积明显增加,出现与阿尔茨海默病患者较相似的老年斑改变。Morris水迷宫试验发现3、6、9月龄APPswe/PSΔE9双转基因小鼠行为学结果与同月龄野生型小鼠有差异,说明与同月龄野生型小鼠相比出现记忆学习能力缺陷(P<0.05)。结论成功建立了人APPswe/PSΔE9双转基因小鼠阿尔茨海默病模型,为阿尔茨海默病发病机制研究和药物研发提供了有价值的动物模型。

阿尔茨海默病转基因动物模型的学习记忆能力改变及病理学观察

目的观察APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠的学习记忆功能及其病理学改变。方法 9月龄雄性APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠和9月龄雄性C57BL/6J小鼠各10只,采用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力情况,并于水迷宫后灌注处死各组小鼠,采用改良Bielschowsky银染法以及尼氏染色法观察小鼠大脑组织病理学变化。结果水迷宫定位航行实验结果显示,APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠的逃避潜伏期与C57对照组小鼠相比明显延长(P<0.05);空间探索实验结果显示,APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠与C57对照组小鼠相比跨台次数减少(P<0.05)。改良Bielschowsky银染法结果显示,C57对照组小鼠大脑皮质未见明显改变,神经原纤维排列有序、稀疏。APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠大脑皮质神经原纤维肿胀,密集成宽带状,可见神经纤维缠结,有老年斑散在分布。尼氏染色结果显示,C57对照组小鼠海马各区神经细胞排列密集、整齐,胞浆中尼氏体丰富,大脑皮质尼氏小体呈深蓝色,细胞核淡蓝色,背景略呈浅蓝色;APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠神经元水肿,细胞数量减少,排列稀疏,细胞间隙增大,胞浆内尼氏体减少,分界不清,染成淡蓝色。结论 APPswe/PS1ΔE9双转基因AD小鼠能够较好的模拟AD患者的表现及病理过程,提供有效的实验动物模型。

阿尔茨海默病转基因动物模型:如何更接近病理特征?

背景:目前阿尔茨海默病的病因、发病机制还不是十分清楚,很大程度上制约了阿尔茨海默病治疗药物的筛选,而主要障碍之一是缺少合适的动物模型。日趋成熟的转基因动物技术可以在活体上研究某一特定致病基因的作用,已成为阿尔茨海默病较为理想的动物模型。目的:综述近几年国内外阿尔茨海默病转基因动物模型的研究进展。方法:第一作者应用计算机检索2013年7月以前PubMed数据库、中国期刊全文数据库有关阿尔茨海默病转基因动物模型的文章,英文检索词为"Alzheimer’s disease,transgenic mouse,Animal model,dementia",中文检索词为"阿尔茨海默病,转基因动物,动物模型,痴呆"。最终选择41篇文献进行综述。结果与结论:阿尔茨海默病的病因是多元性的,遗传因素是其中的一个重要因素。现有的阿尔茨海默病转基因动物模型,包括单转基因模型、双转基因模型以及多重转基因模型。单转基因动物模型是通过重组DNA技术,将某一种突变的外源性基因片段整合到动物的基因组中,该模型只能研究阿尔茨海默病某一特定的病理变化;双转基因动物模型是通过重组DNA技术将两种外源性突变基因同时转染动物,相比单转基因模型,其病理变化与阿尔茨海默病更加吻合,但是仍然不能完全模拟疾病;多重转基因模型是利用不同的转基因鼠杂交或多个基因同时转入等方法,得到的多重转基因模型,该模型能更好的模拟临床阿尔茨海默病的发病过程和病理特征,但存在近亲衰退等缺点。各种动物模型都有其优点,但也存在着缺点,还需进一步建立更为完善的阿尔茨海默病转基因动物模型,更准确、完整地再现阿尔茨海默病的病理特征。

APP swe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠生物学特征

阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）是一种以进行性认知功能障碍和记忆损害为特征的中枢神经系统常见的退行性疾病.AD的主要病理特征为大脑萎缩,脑组织内形成老年斑、神经纤维缠结及神经元丢失.AD的病因和发病机制目前虽未完全明了,但与一些基因的遗传突变密切相关.因此,AD转基因动物模型应运而生,拓展了对该模型鼠的认识,从而对进一步深入探讨AD的发病机制及治疗途径大有裨益.

APP/PS-1/tau三转基因阿尔茨海默病模型小鼠早期认知功能研究

目的观察APP/PS-1/tau三转基因阿尔茨海默病（3×Tg-AD）模型小鼠空间学习和记忆能力、海马CA1区突触可塑性和可溶性β-淀粉样蛋白42（Aβ42）表达变化,探讨3×Tg-AD小鼠早期认知功能障碍发生机制。方法 4月龄雄性3×Tg-AD小鼠和相匹配的129/C57BL/6杂交野生型小鼠各10只,旷场实验和Morris水迷宫实验观察小鼠在新环境中的焦虑程度和自主活动能力,以及空间学习和记忆能力;记录海马CA1区场兴奋性突触后电位和高频强直电刺激诱导的长时程增强;酶联免疫吸附试验检测海马组织可溶性Aβ42表达变化。结果与对照组相比,3×Tg-AD组小鼠旷场实验结果无明显改变（均P〉0.05）,定位航行实验第3~5天逃避潜伏期延长（P=0.001,0.003,0.001）,空间探索实验穿越平台区时间百分比降低（P=0.000）,海马CA1区高频强直电刺激诱导的长时程增强下降（均P〈0.01）,海马组织可溶性Aβ42表达水平升高（P=0.000）。结论 4月龄3×Tg-AD小鼠海马组织可溶性Aβ42表达上调,导致海马CA1区突触可塑性受损,出现空间学习和记忆能力下降。

铁在阿尔茨海默病APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠模型脑组织内的沉积

目的:研究铁在阿尔茨海默病(AD)APPswe/PS1ΔE9转基因小鼠脑区中的沉积情况以及与老年斑的对应关系,并探讨铁在AD发病机制中的作用。方法:将PCR鉴定为阳性的APPswe/SI△E双转基因4及8月龄小鼠为实验组,通过Thioflavine S,Perl’s-DAB,Aβ免疫组化染色,观察铁在脑组织中的沉积并与同月龄野生型小鼠(对照组)对照比较。结果:实验组小鼠基底神经节处均见到铁的沉积,在皮质及海马处呈棕褐色沉积,其分布与老年斑的分布相类似;而对照组小鼠的皮质及海马未见铁的沉积。结论:脑内过多铁的沉积可能是Aβ蛋白在脑内聚集,从而形成老年斑的原因之一,提示铁螯合剂疗法有可能成为治疗AD的一个新的靶点。

复方丹参片对阿尔茨海默病转基因细胞模型AChE表达的影响

目的:研究复方丹参片对阿尔茨海默病(AD)转基因细胞模型乙酰胆碱酯酶(AChE)表达的影响。方法:将SD大鼠60只随机分成复方丹参片0.5、1、2、4倍剂量组,空白对照组及多奈哌齐对照组。各组大鼠分别灌服相应浓度药液,空白对照组给予等容积生理盐水,每天1次,连续7天。末次给药后1 h,取各组大鼠含药血清培养AD转基因细胞,于24、48、72 h采用Western Blot方法分析AD转基因细胞AChE的表达。结果:与空白对照组比较,24、48 h时2、4倍复方丹参片组AChE表达明显降低,差异有非常显著性意义(P<0.01),72h时差异无显著性意义(P>0.05);2、4倍复方丹参片组组内48h与24h比较,AChE表达降低,差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:复方丹参片能在一定程度上减少AD转基因细胞模型AChE的表达。

阿尔茨海默病非转基因动物模型研究

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病。主要病理特征是大脑萎缩、老年斑（senile plaques）、神经纤维缠结fneurofibrillary tangle，NFT）、脑血管沉淀物、颗粒空泡变性为特征。

appps1双转基因阿尔茨海默病模型小鼠脑内胶质细胞的激活及iNOS的表达

目的 研究 10～ 12月龄雌性app ps1双转基因阿尔茨海默病 (AD)模型小鼠 (app ps1,dtg)脑内小胶质细胞和星形胶质细胞的激活 ,以及诱导型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxide,iNOS)的表达。 方法 免疫组织化学结合刚果红组织学染色 ,普通光学显微镜观察。 结果 在app ps1dtg小鼠皮质和海马内有广泛的神经炎斑形成 ,围绕在神经炎斑周围的小胶质细胞和星形胶质细胞处于活化状态 ,且活化的星形胶质细胞表达iNOS。 结论 app ps1dtg小鼠能够模拟AD病人脑内的主要病理过程。神经胶质细胞的激活及iNOS的表达在app ps1dtg小鼠和AD脑内病理过程中具有重要的作用。