源于纤维单胞菌的聚阿拉伯糖内切酶性质的研究

目的确定源于纤维单胞菌（Cellulomonose sp．）的聚阿拉伯糖内切酶的性质。方法SDS—PAGE和凝胶层析测定相对分子质量，离子交换层析估计等电点，TLC法测定酶活力，Lineweare—Burk双倒数做图法测定酶促反应动力学特性。结果相对分子质量为45kD，等电点约为6．0，酶促反应动力学符合Michaelis—Menten动力学规律，在37℃反应条件下，米氏常数Km为2．5mg／ml，最大反应速率Vmax为0．083μmol／L·min，最适pH为8．0，pH6．0～9．0时较稳定。最适温度为40℃，在40℃以下较稳定，超过50℃时酶活力开始下降。结论确定了一种聚阿拉伯糖内切酶的性质。

源于纤维单胞菌的聚阿拉伯糖内切酶的分离纯化

目的:分离纯化一种由纤维单胞菌属(Cellulomonose sp.)的细菌发酵产生的具有聚阿拉伯糖内切酶的性质的蛋白酶。方法:用薄板层析法(TLC)分离酶促反应的产物-寡糖,以Quanti-Scan软件计算薄板上条带的面积灰度值,以此定量,计算酶活力。用Bradford法测定蛋白含量。通过DEAE-Sepharose离子交换层析,SephacrylS-300分子筛和Blue-Dye活性染料亲和层析三种手段串联,对粗酶进行分离纯化,用SDS-PAGE测定纯度,SDS-PAGE和凝胶层析测定相对分子质量。结果:分离得到了电泳纯的阿拉伯糖内切酶,该酶的相对分子质量为45kD,蛋白酶比活性为15.42×10(3U/ug),纯化倍数为77.1。结论:该酶是一种阿拉伯糖内切酶,可以作为一种新型的工具酶,应用于结核分枝杆菌细胞壁的结构分析及寻找抗结核药物作用的靶点。