N^+注入诱变筛选阿拉伯糖利用缺陷型肌苷高产菌株

以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HSD06为出发菌株发酵制备肌苷,注入不同剂量的N+离子束选育不能利用阿拉伯糖的突变株。结果表明低剂量和较低的致死率利于正突变株的筛选。当照射剂量为2×1014ions/cm2时,获得肌苷高产菌株B67,肌苷的摇瓶发酵产量为15.12g/L,比出发菌株提高了18.6%。

金顶侧耳不同交配型营养缺陷突变菌株的制备

以金顶侧耳的营养缺陷突变菌株为供试菌株,在确认其交配型的基础上,配制杂交株,利用其减数分裂中基因的高频率重组性制备不同交配型的营养缺陷突变菌株。结果表明:除突变型Ade2-、Ade5-、Pdx2-各自获得3种不同交配型的营养缺陷突变菌株外,其他突变型均获得4种不同交配型的营养缺陷突变菌株,共计获得具有不亲和性因子和营养缺陷型双重标记的金顶侧耳菌株(包括供试菌株)133株。

酒精酵母的紫外诱变呼吸缺陷型突变株的筛选

通过对酒精酵母进行紫外诱变及 2 ,3,5 -氯化三苯基四氮唑 (TTC)鉴别性培养 ,获得了 2 6株呈白色菌落表型的呼吸缺陷型突变株。诱变条件为 :紫外 (灯管功率 15 W)波长 2 5 3. 7nm ,照射距离 2 1cm ,照射时间为 1m in、 3min分别获得突变菌株 15和

定向筛选组氨酸营养缺陷型突变菌株的研究

从机理上探讨了青霉素浓缩法中关键参数确定的依据。确定饥饿培养至菌浓不再增加为止。青霉素作用前培养至细胞生长进入对数期。当 5 0 %～ 6 0 %细胞转变为原生质球时 ,停止青霉素的作用。在此条件下 ,组氨酸营养缺陷型突变菌株的获得率达 8%。

双重营养缺陷型(Met^-,Ile^-)黄色短杆菌突变株SFL8-3的选育

以一株黄色短杆菌SFL-8为出发菌株,经紫外线、盐酸羟胺和硫酸二乙酯等多次诱变处理,单菌落分离、摇瓶初筛和摇瓶复筛,获得了一株蛋氨酸和异亮氨酸双重缺陷型突变株SFL8-3(Met-,Ile-),摇瓶发酵L-亮氨酸产量达18.98g/L。

丙酮酸激酶缺陷型黄色短杆菌突变株生成赖氨酸的机制研究

黄色短杆菌(Brevibacterinm flavum)突变株№.1—231为 S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸(AEC)抗性、甲硫氨酸敏感性、低活力高丝氨酸脱氢酶(HD)和丙酮酸激酶(PK)缺失的赖氨酸产生菌,由此菌株得到了对甲硫氨酸不敏感的回复突变株,它们有正常的 HD,并有与№.1—231相同的 AEC 抗性和 PK 缺失,但是它们并不比其出发菌株№.15—8产生更多的赖氯酸,而№.1—231从№.15—8得到。赖氨酸高产突变株№.22是从菌株№.1—231通过筛选对β—氟代丙酮酸(FP)的敏感株而得到,它 HD 缺失,此通过从№.1—231两次突变筛选高丝氨酸缺陷型的 HD 缺失突变株产生更多的赖氨酸。菌株№.22在试验的条件下,并不对FP 敏感。在测定的各种赖氨酸生物合成酶中,№.22比其亲株和后者 HD 缺失突变株具有较高活力的天冬氨酸-β-半醛脱氢酶。菌株№.22在含有大豆水解液、甲硫氨酸和100克/升葡萄糖的培养基中培养72小时,可产50克/升赖氯酸盐酸盐。

漫谈微生物氨基酸缺陷型突变株建株方法

70年代初期,国际上开始采用两组氨基酸缺陷型突变株监测环境致变剂,其中一组是鼠伤塞沙门氏菌组氨酸缺陷型突变株;另一组是埃希氏大肠杆菌色氨酸缺陷型突变株。由于极大多数的致癌剂均具有致变作用,因此上述突变株在短期筛选致癌物工作中得到广泛推广。这类突变株有二个共同特点。

银耳的诱变与营养缺陷型菌株的筛选

实验结果表明,银耳酵母状分生孢子对紫外线的效应为多靶单击类型,而对60Coγ射线的效应为单靶单击。紫外线诱变获得2个营养缺陷型菌株,其中1株T811经鉴定是肌醇缺陷型。突变体T811的生长迟缓期比野生型多3d,生长速度较慢。同时还提出了该突变体的应用前景。

双重筛选产甘油假丝酵母营养缺陷型菌株及其发酵性能

运用化学诱变的手段 ,以亚硝基胍为诱变剂 ,以产甘油假丝酵母WL2 0 0 2 5为出发菌株 ,诱变获得 2 7株尿嘧啶缺陷型突变株 .并对所获菌株进行了传代稳定性试验和稳定性试验 ,其中 1# 、2 2 # 、2 3# 、2 5 # 、2 6 # 菌株稳定性优良 ,适宜作为进行酵母转化的带有遗传标记的工具菌株 .同时 ,从所获突变株中选出两株进行生长特性的研究和发酵性能的检测 .研究表明 ,缺陷型菌株的生长速度明显慢于亲株 ,但其产甘油的性状并没有较大的改变 .

利用具有低丝氨酸脱水酶活性的嗜甘氨酸棒杆状菌突变株提高 L-丝氨酸产量

以甘氨酸为前体,利用嗜甘氨酸棒状杆菌发酵法生产 L-丝氨酸中,由于减少了 L-丝氨酸被酶降解,从而提高了 L-丝氨酸产量。细胞内具有降解 L-丝氨酸能力的 L-丝氨酸脱水酶(SD)活性在不能利用 L-丝氨酸作氮源或作为生长需要的氨基酸的突变株里降低。通过遗传育种技术由 AJ-3170(ATCC21341)获得两株营养缺陷型:L-亮氨酸和 L-异亮氨酸缺陷型突变株(AJ-3414)和 L-毫氨酸和蛋氨酸缺陷型突变株(AJ-3413),前者完全缺失 SD 活性,后者 SD 活性仅为亲株的32％。这两株突变株由30mg/ml 甘氨酸作前体的培养基中分别可以累积13.8和13.9mg/ml L-丝氨酸,其生产收率也由亲株的15.3％提高到46％。

里氏木霉QM9414尿嘧啶缺陷型转化体系改进和β-葡萄糖苷酶的过量表达

里氏木霉是广泛应用于纤维素酶生产的工业真菌,但高产突变株遗传操作困难,限制了菌种改良。首先利用定点整合策略敲除里氏木霉突变株QM9414的pyr4基因,成功构建尿嘧啶营养缺陷型菌株QP4,其遗传转化效率显著提高,而且产酶能力不受影响。进一步在QP4中过量表达β-葡萄糖苷酶(BGL)基因bgl1,经大量平板显色筛选获得2株BGL活力明显增强的工程菌QPB4和QPB5,其酶活分别提高10.01倍和8.26倍。利用发酵酶液对2种不同预处理的玉米芯底物进行水解糖化实验,结果显示以酸处理玉米芯为底物时QPB4和QPB5的葡萄糖得率比QP4分别提高60.98%和52.44%,而以脱木素处理玉米芯为底物时其葡萄糖得率分别提高80.01%和86.00%。研究表明改进里氏木霉高产突变株遗传转化体系可以显著促进菌株改良,提高糖化应用效果。

多形汉逊酵母的诱变及突变株的筛选

为获得多形汉逊酵母(Hansenulapolymorpha)营养缺陷型突变株,以亚硝基胍(NTG)、硫酸二乙酯(DES)为诱变剂诱变多形汉逊酵母HP 1,使用制霉菌素对诱变后的菌悬液进行富集筛选,并对诱变筛选条件进行了优化,筛选出16株ade、11株ura、8株leu营养缺陷型突变株及1株ura、Mut-(不能利用甲醇)双突变株。

用乳酸发酵短杆菌2256的突变株生产L-苯丙氨酸

从L-谷氨酸生产杆菌—乳酸发酵短杆菌2256诱变的酪氨酸、蛋氨酸双重营养缺陷型和抗代谢物突变株中筛选出了优良的L-苯丙氨酸生产菌株。选出的菌株—乳酸发酵短杆菌No.123,当以13％的葡葡糖为碳源时,72小时产L-苯丙氨酸21.7mg/ml。No.123菌株积累L-苯丙氨酸比母本菌株No.808高5.17倍。在迄今为止的报导中,这个收率是最高的。在培养基中添加反丁烯二酸,促进了L-苯丙氨酸的生产。培养基中其它氨基酸的积累,与主要产物L-苯丙氨酸相比可以忽略不计。

Nit突变体技术在玉米弯孢菌研究中的应用

采集了河南省12个地区的玉米弯孢菌叶斑病标样,分离获得了34个菌株,其中3个是画眉草弯孢(Curvu-laria eragrostidis),其余均为新月弯孢(C.lunata)。利用含KClO3的培养基对其中14个新月弯孢菌株和1个画眉草弯孢菌株(XZ3c)进行诱导,在MM培养基上鉴定均获得了Nit突变体。对获得的190个Nit突变体在MO2和MH培养基上进行了生理表型的划分,并用于菌株内、菌株间的营养体亲和性研究,发现有不少配对组合中均出现了明显的亲和现象,表明Nit突变体技术可以用于玉米弯孢病菌营养体亲和性的研究。根据亲和性测定的结果将这15个菌株初步分为2个营养体亲和群。

阿维菌素B_(1a)组分高产菌株的选育

以阿维链霉菌 (Streptomyces avermitillis R- 12 71)为出发菌株 ,进行 6 0 Co诱变处理后 ,筛出缬氨酸缺陷型回复突变株。其中 R- V- 2 2高产突变株的 B1 a组分摇瓶发酵单位可达到 16 0 0 μg/ml,比出发菌株提高 33%。

淫羊藿多糖的致突变研究

淫羊藿多糖(简称EPS)是从中草药淫羊藿中提取的多糖，临床上有增加机体免疫力的作用，按有关规定，以Ames试验．体外培养细胞株(CHL)染色体畸变分析及小鼠骨髓微核试验来检测EPS的致突变性．①Ames试验按微粒体酶平板温育法选用鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型突变菌株TA97、TA98、TA100、TA102。

透明质酸产生菌的紫外诱变及摇瓶条件的优化

对马疫链球菌SH-0进行紫外诱变,筛选出溶血素和透明质酸酶双缺陷型突变菌株SH-2,使透明质酸产量提高5倍;突变株经5次传代,其产酸量及HA的相对分子质量保持稳定.经过发酵条件的优化,确定最佳摇瓶条件是初始pH7.6,发酵温度37℃,发酵时间44h.

微生物发酵法生产乳清酸

以谷氨酸棒杆菌JSIM 201为出发菌株,通过紫外线和甲基磺酸乙酯诱变处理,得到了一株尿嘧啶营养缺陷型突变体U 12菌株,它能以葡萄糖为碳源,硫酸铵为氮源,在发酵液中积累一种紫外吸收物质.该紫外吸收物质经物理、化学分析鉴定,证明是乳清酸.对U 12菌株进行了发酵条件优化研究,在最佳发酵工艺条件下,积累乳清酸最高达到8.6g/L.

赖氨酸锌的鼠伤寒沙门氏菌诱变实验研究

锌是人体所必需的较重要的微量元素,缺锌可引起多种疾病。以往临床上使用的补锌剂多为硫酸锌和葡萄糖酸锌等,往往有明显的胃肠道不良反应。为解决这一问题,我们已研制出赖氨酸锌,本品毒性低,生物利用度高。