κ-阿片受体激动剂U50488H通过调节巨噬细胞极化减轻体外循环致大鼠急性肺损伤的研究

目的探讨κ-阿片受体(KOR)激动剂U50488H是否通过调节巨噬细胞极化减轻体外循环(CPB)引发的大鼠急性肺损伤(ALI)。方法将24只成年雄性清洁级SD大鼠(50~450 g)随机分为Sham组(假手术)、CPB组(CPB)和U50488H组(KOR激动剂+CPB),每组8只。U50488H组于CPB前30 min静脉注射1.5 mg/kg U50488H。分别于CPB后0、1、2 h行动脉血气分析,计算肺泡-动脉氧分压差(A-aDO_(2))和呼吸指数(RI)。3组大鼠均在停CPB后2 h处死,取完整右肺下叶。采用重力法测定血管外肺水(EVLW),采用苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织形态学变化。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆酯多糖(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-4(IL-4)含量。采用免疫荧光法测定大鼠肺组织iNOS和CD206水平。结果与Sham组比较,CPB组大鼠EVLW和TNF-a、血浆IL-6水平及肺组织iNOS表达增高,血浆IL-4水平和肺组织CD206表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CPB后0、1、2 h,CPB组的A-aDO_(2)和RI、LPS高于Sham组,U50488H组的A-aDO_(2)和RI、LPS低于CPB组,差异有统计学意义(P<0.05)。CPB组大鼠出现严重肺损伤和肺泡内充血/出血,并伴有广泛的炎症细胞浸润,U50488H组肺损伤显著减轻。结论KOR激动剂U50488H可促进CPB后大鼠肺巨噬细胞向M2表型极化,减轻炎症反应,增加抗炎因子释放,进而减少CPB后ALI的发生。

κ-阿片受体激动剂对体外循环大鼠肺细胞焦亡和NLRP3炎症小体的影响

目的通过观察κ-阿片受体(KOR)激动剂U50488H对心肺转流(CPB)大鼠肺组织NLRP3炎症小体和细胞焦亡的影响,探讨U50488H减轻CPB致急性肺损伤(ALI)的可能机制。方法24只成年雄性清洁级SD大鼠,350~450 g,随机分为假手术组(Sham组)、CPB组和CPB+KOR激动剂组(U50448H组),每组8只。U50448H组于CPB前30 min静脉注射1.5 mg/kg U50488H。分别于CPB后0 h、1 h和2 h各时点行动脉血气分析,计算肺泡-动脉氧分压差(AaDO2)和呼吸指数(RI)。三组大鼠均在停CPB后2 h时处死,取完整右肺下叶,采用重力法测定血管外肺水(EVLW),HE染色观察肺组织形态学变化。采用ELISA方法检测血浆脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6和IL-4的含量,Western blot测定肺组织GSDMD-C、GSDMD-N和NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸酶前体(pro-Caspase-1)蛋白的表达。结果CPB组大鼠在CPB后0 h、1 h和2 h各时点的AaDO2和RI、LPS明显高于Sham组(P<0.05);U50488组三个时点的AaDO2和RI、LPS明显低于CPB组(P<0.05)。与Sham组比较,CPB组大鼠EVLW、血浆TNF-a和IL-6、肺组织GSDMD-C、GSDMD-N和NLRP3、pro-Caspase-1表达明显增高,血浆IL-4水平明显降低,其差异有统计学意义(P<0.05);而U50488组上述指标与Sham组无明显差异(P>0.05)。CPB组大鼠出现了严重的肺损伤和肺泡内充血/出血,并伴有广泛的炎症细胞浸润,U50448H组肺损伤明显减轻。结论KOR激动剂U50488H对CPB所致ALI期间NLRP3炎性小体诱导的细胞焦亡具有抑制作用,从而减轻了CPB后的肺损伤。

κ阿片受体激动剂对血管系统和呼吸系统的影响及临床应用进展

阿片类药物是临床上常用的一类镇痛药物。经典阿片类受体有δ阿片受体(δ-opioid receptor, DOR)、κ阿片受体(κ-opioid receptor, KOR)和μ阿片受体(μ-opioid receptor, MOR)3种[1]。阿片类药物可作为激动剂、拮抗剂或部分激动剂作用于阿片受体。阿片受体激动剂通过G蛋白与细胞内机制偶联受体引起细胞超极化[2]。

五行音乐干预中风后抑郁的潜在机制:内啡肽/μ阿片受体系统(综述)

中风后抑郁作为中风后常见的情志障碍,会对中风患者预后产生不良影响。五行音乐是临床治疗中风后抑郁的传统康复疗法,具有疗效确切、成本低廉、副作用少的特点,其临床疗效大多通过单胺类神经递质、氨基酸类神经递质、免疫反应、脑肠菌群等客观指标及相关量表判断,但具体作用机制尚未完全明确。研究发现,内啡肽/μ阿片受体系统参与调控中风后抑郁的发生,并与情绪调控脑区相互重合,且内啡肽/μ阿片受体系统与神经递质相互调节,从而发挥对中风后抑郁的调控作用。本文通过综述内啡肽/μ阿片受体系统与中风后抑郁密切相关的脑区及与5-羟色胺、谷氨酸、白细胞介素、肠道生物菌群的关系,探讨五行音乐干预中风后抑郁的潜在机制,为中医康复现代化提供科学的研究示范。

κ‑阿片受体激动剂U50488H通过抑制NLRP3/Caspase‑1信号通路对体外循环致大鼠肺损伤的影响

目的观察κ-阿片受体(KOR)激动剂U50488H对体外循环诱导的大鼠肺损伤的影响,并探讨U50488H对肺保护的作用机制。方法将24只SPF级SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、大鼠体外循环模型组(CPB组)和KOR激动剂在体外循环(CPB)模型中的干预组(U50448H组),每组8只。U50448H组于CPB前30 min静脉注射1.5 mg/kg U50488H,分别于CPB后0 h、1 h和2 h各时点行动脉血气分析,计算肺泡-动脉氧分压差(AaDO_(2))和呼吸指数(Respiratory index,RI)。三组大鼠均在停CPB后2 h时处死,取完整右肺下叶,采用重力法测定血管外肺水(Extravascular lung water,EVLW),HE染色观察肺组织形态学变化。采用ELISA方法检测血浆脂多糖(LPS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,TUNEL法检测肺组织的细胞凋亡,Western blot测定肺组织GSDMD-C、GSDMD-N、NLRP3、ASC、pro-Caspase-1和pro-IL-1β蛋白的表达。结果CPB组大鼠在CPB后0 h、1 h和2 h各时点的AaDO_(2)和RI、LPS明显高于Sham组(P<0.05);U50488H组3个时点的AaDO_(2)、RI、LPS均明显低于CPB组(P<0.05)。与Sham组比较,CPB组大鼠EVLW,血浆MDA和GSH,肺组织的凋亡指数(AI),NLRP3、ASC、pro-Caspase-1和pro-IL-1β蛋白的表达明显增高,血浆SOD含量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而U50488H组上述指标与Sham组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CPB组大鼠出现了严重的肺损伤和肺泡内充血/出血,并伴有广泛的炎症细胞浸润,U50448H组肺损伤明显减轻。结论κ-阿片受体激动剂U50488H通过抑制肺组织中NLRP3/Caspase-1信号通路介导的炎症和氧化应激反应,从而减轻CPB后大鼠的肺损伤。

基于各项异性网络模型研究μ阿片受体的动力学及关键位点

阿片类药物主要通过选择性作用于μ阿片受体(μ-opioid receptor, MOR),激活抑制性G蛋白来实现镇痛的效果。由于其使用常伴随成瘾、呼吸抑制等严重的不良反应,针对阿片受体的药物研发成为一大挑战。为研究MOR的结构动力学和功能性关键位点,首先基于各向异性网络模型(Anisotropic network model, ANM)分析低频、高频运动模式下的残基涨落以及残基间的交叉相关涨落;然后,构造氨基酸复杂网络识别与变构信号传导相关的关键残基。结果表明,慢运动模式可有效识别结构中的功能区域,快运动模式能够识别对稳定MOR非活性结构重要的热点残基,运动相关性分析则揭示了跨膜螺旋区域变构信号的转导机制。另外,复杂网络识别出的关键残基在配体结合和信号传递中起重要作用。本工作有助于理解μ阿片受体的动力学特性和关键位点,并为药物设计提供有益的参考信息。

甲硫脑啡肽通过阿片受体促进脂多糖作用下奶牛子宫内膜基质细胞的增殖

为明确甲硫脑啡肽(Met-enkephalin,MENK)调控原代奶牛子宫内膜基质细胞(bovine endometrial stromal cell,BESC)增殖的作用机制,采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、MENK和阿片受体拮抗剂共处理细胞进行了本试验。本研究使用的阿片受体拮抗剂包括非选择性阿片受体拮抗剂纳洛酮(naloxone,Nx)、δ阿片受体拮抗剂ICI 154129和μ阿片受体拮抗剂CTAP,分组情况:空白对照组,LPS处理组,LPS与MENK(10-10mol·L^(-1))共处理组(LM组),LPS、MENK和阿片受体拮抗剂(Nx、CTAP和ICI 154129,均为10-10mol·L^(-1))共处理组以及LPS与阿片受体拮抗剂共处理组。检测细胞活性、细胞周期、细胞增殖相关因子基因表达以及Wnt/β-catenin和PI3K/AKT相关通路变化。结果表明:阿片受体拮抗剂单独或与LPS共处理细胞24 h,对细胞活力无影响(P>0.05)。与LM组相比,LPS、MENK和Nx共处理组(LMN组)以及LPS、MENK和ICI 154129共处理组(LMI组)的G1期相对细胞数升高(P<0.05),LMN组以及LPS、MENK和CTAP共处理组(LMC组)S期相对细胞数降低(P<0.05)。与LM组相比,LMN组和LMI组细胞CCN2、TGFB1和TGFB3基因表达下调(P<0.01),LMC组细胞CCN2基因表达下调(P<0.01)。与LM组相比,LMN组cyclinD1和GSK-3β蛋白表达上调(P<0.05),LMI组细胞β-catenin和GSK-3β蛋白表达上调(P<0.01),LMC组细胞cyclinD1蛋白表达上调(P<0.05);与LM组相比,LMN组、LMI组和LMC组AKT磷酸化水平升高(P<0.05)。以上结果说明,μ阿片受体和δ阿片受体均参与MENK对BESC的促增殖作用。

阿片受体激动-拮抗剂的镇痛作用及不良反应研究进展

阿片受体激动-拮抗剂是一类对阿片受体兼有激动和拮抗作用的药物。已经上市的这类药物主要包括喷他佐辛、布托啡诺、纳布啡、丁丙诺啡和地佐辛等。与吗啡、芬太尼等单纯阿片受体激动剂相比,该类药物具有镇痛效果较强,成瘾性较弱,咳嗽、瘙痒以及呼吸抑制等副作用少的优点。由于阿片受体激动-拮抗剂在不同内源性阿片受体(μ、κ、δ等)间具有不同的倾向性作用,基于不同受体亚型,可在情绪影响、药物依赖方面表现出不同甚至相反的作用,因此合理地使用这类药物可以有效地减少阿片类药物导致的不良反应以及药物滥用的发生。随着学界对内源性阿片各受体亚型及相关药物研究的深入,阿片受体激动-拮抗剂在改善阿片类药物不良反应和提高患者药物依从性方面有着广泛的应用空间和前景。

5种阿片受体激动剂不良反应信号的数据挖掘与分析

目的基于美国食品药品管理局不良事件报告系统(FAERS)对5种阿片受体激动剂(吗啡、可待因、哌替啶、芬太尼、美沙酮)相关不良反应进行挖掘分析,为阿片受体激动剂的临床安全用药提供参考依据。方法利用美国食品药品管理局公共数据开放项目(OpenFDA)平台,收集2004年第1季度至2021年第4季度FAERS数据库中5种阿片受体激动剂的不良反应报告数据,采用报告比值比(reporting odds ratio,ROR)法对5种阿片受体激动剂的药品不良反应(ADR)进行信号挖掘,分析ADR报告中的安全警告信号。结果最终得到吗啡165572份,可待因79574份,哌替啶9838份,芬太尼145819份,美沙酮43433份ADR报告。这些ADR报告中女性207657份多于男性156810份,主要集中于18~60岁年龄段病人,且美国地区的上报数最多为282820份,严重ADR报告中以住院或住院时间延长的上报数最多为129454份。在上报数前20位的ADR中,药物依赖、过量、新生儿戒断综合征、怀孕期间胎儿暴露相关ADR在5种药物的说明书中均有提及,各类神经系统疾病及精神病类相关ADR在说明书较为常见。经ROR法检测发现,常见有精神障碍相关ADR,吗啡和可待因信号强度最为显著,药物依赖性吗啡信号最强,除芬太尼外其余学习障碍和发育迟缓高危信号均较强,自杀身亡美沙酮信号最强。结论通过对吗啡、可待因、哌替啶、芬太尼和美沙酮等阿片受体激动剂的严重和其他重要ADR信号的挖掘与分析,可更深入了解此类药物的ADR特征和潜在风险,促进临床安全用药。

吗啡对大鼠尾壳核神经元阿片受体基因表达的影响

目的探讨较长时间给予吗啡对体外培养大鼠尾壳核神经元的μ、δ型阿片受体mRNA表达的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。结果吗啡可使μ、δ型阿片受体的mRNA水平显著降低(P<0.01),吗啡作用12h、24h和48h可使μ型阿片受体mRNA由0h时的94.8%分别降至50%、42.7%和67.2%;而对δ型阿片受体,则只有在24h和48h有明显的抑制作用(P<0.01),由0h时的95.8%分别降至59.5%和84.5%;吗啡在10-8mol/L时即可引起μ型阿片受体的mRNA水平显著降低,且该抑制效应在10-8mol/L^10-5mol/L浓度范围内呈明显的剂量依赖性,但对δ型阿片受体则在10-6mol/L时才有效。结论吗啡较长时间作用于原代培养大鼠尾壳核神经元,可明显抑制μ、δ型阿片受体的基因表达。

μ-阿片受体激动剂通过MOR/AKT/Slug途径促进膀胱癌循环肿瘤细胞的形成:一项包含随机对照试验的综合研究

背景与目的μ-阿片受体激动剂(μ-opioid receptor agonists,MOs)是膀胱癌(bladder cancer,BC)患者手术和慢性疼痛治疗过程中不可或缺的麻醉镇痛药。MOs是否会影响膀胱癌的进展和转移仍未阐明。本研究关注MOs对BC循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)形成的影响,旨在提供潜在的治疗靶点。方法利用不同的临床前模型来确定MORAs对BC进展的影响。利用新型免疫捕获微流控芯片分析MORAs是否影响小鼠模型和临床BC患者的CTC数量。生物信息学分析、全转录组测序和分子生物学方法被用于研究潜在机制。结果血行转移和原位BC小鼠模型显示,MORAs治疗后肿瘤转移明显增加。在小鼠模型和临床试验患者中,MORAs治疗后检测到间质和/或上皮细胞CTC数量明显增加。从机制上看,MORAs通过激活MOR/PI3K/AKT/Slug信号通路促进CTC的形成,并促进BC细胞发生上皮–间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT),而敲除MOR、Slug或阻断PI3K可抑制EMT过程和CTC的形成。结论MOs通过促进CTC的形成来促进BC的转移。在MO治疗期间,可针对EMT-CTC轴采取预防措施,以抑制BC患者相关的肿瘤转移或复发。

阿片受体激动药伍用小剂量拮抗药用于镇痛的研究进展

阿片受体具有双向作用模式;阿片受体激动药与Gs蛋白耦联的阿片受体结合,产生兴奋性作用即痛超敏,与Gi/Go蛋白耦联的阿片受体结合会产生相反的作用,即镇痛效应;伍用(超)小剂量阿片受体拮抗药不拮抗甚至增强激动药的镇痛效能,同时有效减少副作用;对这方面的基础和临床研究进展及其机制探讨进行综述。

μ-阿片受体基因多态性与带状疱疹后神经痛患者疼痛敏感性及阿片类药物用量的关系

目的探讨μ-阿片受体基因(OPRM1)基因多态性与带状疱疹后神经痛(PHN)患者疼痛敏感性及阿片类药物用量的关系。方法收集带状疱疹(HZ)患者170例,并依据3个月后有无PHN分为PHN组(90例)和非PHN组(80例)。对可能影响PHN发生的因素进行logistic回归分析。比较PHN中、重度疼痛患者不同基因型间48 h阿片类药物用量、状态特质焦虑量表评分及睡眠质量评分。结果初治时间超过72 h、急性期重度疼痛、基因型GG是PHN发生的独立危险因素。PHN轻度疼痛、中度疼痛和重度疼痛组中,GG基因型分布频率明显升高;PHN中、重度疼痛组不同基因型患者48 h阿片类药物用量依次明显增加,且GG基因型患者用药量最多,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论初治时间超过72 h、急性期重度疼痛、基因型GG是PHN发生的独立危险因素。OPRM1基因多态性可能是引起PHN患者阿片类药物药效学个体差异的遗传因素之一。

阿片受体在氯胺酮药理效应中的作用机制研究

氯胺酮自1970年起在临床上被用作镇痛剂和麻醉剂,近年因被发现具有快速有效的抗抑郁作用而备受关注。然而,氯胺酮引起的成瘾、致幻等精神类不良反应限制了其临床应用,但不良反应的具体机制尚不明确。目前,学界普遍认为氯胺酮的药理效应主要由N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)受体介导,但越来越多的研究证据提示阿片受体在氯胺酮的药理效应中也有重要作用。该综述基于近20年公开发表的相关文献,总结了阿片受体在氯胺酮麻醉、镇痛、抗抑郁、抗成瘾和成瘾等药理效应中的机制,为揭示氯胺酮的作用机制提供参考,为解决氯胺酮的临床副作用做出有益探索。

临床用阿片受体拮抗剂研究进展

阿片受体拮抗剂是一类特异性地拮抗阿片类激动剂的药物,能与激动剂竞争性地作用于阿片受体,从而降低或逆转激动剂的麻醉镇痛活性,并能消除因激动剂的使用所引起的呼吸抑制、胃肠功能紊乱等副作用。拮抗剂在临床上常作为镇痛药用量过度而产生的昏迷及副作用的解药。本论文主要综述了临床上常见的几种阿片受体拮抗剂的类型及临床应用,近年来,拮抗剂的应用取得较大发展,但仍存在一些不足,需进一步开展阿片受体拮抗剂的研究,以获得竞争性更强、副作用小,安全性高、合成工艺简单的专一性新型μ阿片受体拮抗剂,更好的应用于临床治疗。

内吗啡肽2对神经病理性痛大鼠背根神经节内μ-阿片受体表达的影响

目的探讨在内吗啡肽2(EM2)的镇痛过程中,μ-阿片受体(MOR)的表达变化及胞内囊泡转运对其变化的影响。方法成年雄性SD大鼠,随机分为3组:正常对照组、病理性痛组和药物组,病理性痛为坐骨神经分支选择性损伤(SNI)诱导的神经病理性痛(NP)。药物组为鞘内注射EM2的NP大鼠。采用免疫荧光单标染色和免疫印迹方法检测MOR总蛋白和磷酸化蛋白以及Rab7蛋白表达量的变化,采用免疫荧光双标染色方法检测MOR/Rab7和MOR/LAMP1免疫阳性标志物的表达变化。结果与正常对照组比较,病理性痛组大鼠背根神经节(DRG)内MOR总蛋白和磷酸化蛋白的表达量降低(P<0.05),Rab7蛋白的表达量明显增高(P<0.05);MOR/Rab7免疫阳性标志物占Rab7或MOR、MOR/LAMP1免疫阳性标志物占LAMP1或MOR阳性标志物的比例均增高(P<0.05)。鞘内多次注射EM2后,病理性痛大鼠的后足缩足反应阈值明显增高(P<0.01),DRG内MOR总蛋白和磷酸化蛋白的表达量增高(P<0.05),Rab7的表达量降低(P<0.05)。MOR/Rab7阳性双标产物占Rab7或MOR阳性标志物、MOR/LAMP1阳性双标产物占LAMP1或MOR阳性标志物比例均降低(P<0.05)。结论在镇痛过程中,EM2抑制SNI的NP大鼠DRG内Rab7的表达,减少MOR向溶酶体运输,促进MOR复敏。

μ阿片受体在大鼠结肠平滑肌细胞中的表达

目的通过培养大鼠结肠原代平滑肌细胞,探索μ阿片受体(MOR)在结肠平滑肌细胞中的表达特性。方法分离、培养和鉴定结肠平滑肌细胞;运用免疫荧光组织化学双重标记法观察MOR、内吗啡肽2(EM2)、钙调蛋白(CaM)在结肠平滑肌细胞的分布特性;施加乙酰胆碱(ACh)(1×10^(-3)mol/L)或EM2(2μmol/L)后,Western blot技术检测CaM蛋白表达变化;单独或依次施加ACh(1×10^(-3)mol/L)和EM2(2μmol/L)后,钙离子成像法观察平滑肌细胞内钙离子浓度的变化。结果鉴定结肠平滑肌细胞:α-肌动蛋白(α-SMA)标记的阳性细胞占细胞总数的95%以上;免疫荧光组织化学双重标记显示,在结肠平滑肌细胞有MOR和EM2的分布,且所有MOR和EM2阳性细胞均与α-SMA有共存;Western blot检测发现,施加ACh 10 min后,CaM表达升高(P<0.05);施加EM210 min后,CaM表达降低(P<0.05);钙离子成像结果显示,单独施加ACh,平滑肌细胞内钙离子浓度明显升高(P<0.05);单独施加EM2,结肠平滑肌细胞内钙离子浓度下调(P<0.05),依次施加ACh和EM2后,EM2显著抑制了ACh诱发的钙离子浓度升高(P<0.05)。结论MOR和EM2在结肠平滑肌细胞有表达,且EM2可通过MOR抑制CaM的表达与降低钙离子浓度。

κ阿片受体激动剂对体外循环术后大鼠认知功能及海马p-tau、Aβ蛋白表达的影响

目的探讨κ阿片受体(KORs)激动剂对体外循环(CPB)术后大鼠认知功能及海马组织p-tau、Aβ蛋白表达的影响。方法选取40只清洁级成年雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为假手术组(S组)、CPB组(C组)、CPB+KORs激动剂U50488H组(U组)、CPB+KORs拮抗剂Nor-BNI+KORs激动剂U50488H组(N组),每组10只。术前,各组大鼠均进行为期5 d(4次/d)的水迷宫训练。S组仅穿刺置管,不进行CPB;C组行动静脉穿刺置管,且进行CPB 1 h;U组于CPB前30 min静脉注射U50488H 1.5 mg/kg,其余同C组;N组于CPB前1 h静脉注射Nor-BNI 2.0 mg/kg,其余同U组。CPB术后第3天水迷宫测试结束后,将大鼠放血处死后取海马组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测Aβ蛋白含量,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测p-tau蛋白表达情况。结果与S组相比,其余3组大鼠逃避潜伏期均延长,穿越平台次数、目标象限游泳距离和停留时间均减少,海马组织中p-tau蛋白表达、Aβ蛋白含量均增加,差异有统计学意义(P<0.05);与C组相比,U组大鼠逃避潜伏期缩短,穿越平台次数、目标象限游泳距离和停留时间增加,海马组织p-tau蛋白表达、Aβ蛋白含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);N组各项指标与C组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论KORs激动剂可减少海马组织中p-tau、Aβ蛋白表达,且或许由此发挥对CPB术后大鼠认知功能的保护作用。

共表达人μ阿片受体与Gq蛋白的稳定细胞株的建立及功能鉴定

建立共表达人μ阿片受体(humanμ-opiatereceptor,hMOR,OPRM)与Gq蛋白的CHO-Flp In稳定细胞模型,并鉴定其药理学功能,可为体外高通量筛选靶向OPRM的药物奠定基础。该研究首先构建重组表达质粒OPRM-pcDNA5/FRT,并进行鉴定;然后通过脂质体转染法将OPRM-pcDNA5/FRT、GqG66Di5-pIRES/puro3和FLP重组酶质粒POG44共转染CHO-Flp In细胞,经抗性加压和有限稀释法挑取耐药单克隆,采用FLIPR钙信号检测方法筛选阳性克隆株;最后,通过RT-q PCR对细胞中的OPRM和GqG66Di5m RNA表达水平进行检测,并选用OPRM激动剂DAMGO和抑制剂Naloxone对稳定细胞株的药理学功能进行鉴定。结果显示:经酶切确定了重组质粒的正确构建;通过重组质粒转染、抗生素加压筛选以及钙信号测定获得22个具有活性的克隆细胞株,其中15号细胞株的荧光信号值最高,命名为Gq-OPRM1-CHO;与对照组相比,Gq-OPRM1-CHO细胞组中OPRM与GqG66Di5基因m RNA水平分别升高约400倍和120倍;在Gq-OPRM1-CHO细胞中,FLIPR钙信号检测激动剂DAMGO的EC_(50)为0.02±0.002μmol/L,抑制剂Naloxone的IC_(50)为0.04±0.003μmol/L。该研究成功建立了OPRM与GqG66Di5蛋白稳定共表达的细胞模型Gq-OPRM1-CHO,该细胞株具有对OPRM激动剂和拮抗剂特异性反应的药理学功能。