131I-FIAU／TK报告基因系统监测大鼠脑梗死模型中移植细胞的研究

目的检测经不同途径移植骨髓间充质干细胞后大鼠脑梗死模型中131I一氟一碘阿糖呋喃基尿嘧啶（FIAU）的生物分布及脑组织中胸苷激酶（TK）基因的表达，为核素报告基因显像无创性监测细胞移植治疗脑梗死提供实验依据。方法制备携带TK一内部核糖体连接位点一脑源性神经生长因子（IRES—BDNF）基因的腺病毒重组体Ad5一TK—IRES—BDNF一增强型绿色荧光蛋白（EGFP）；线栓法制作大鼠脑梗死模型；将转基因的干细胞分别通过脑实质、侧脑室、颈动脉和尾静脉注射人大鼠脑梗死模型中，以正常大鼠为对照组；Iodogen固相氧化法标记氟·阿糖呋喃基尿嘧啶（FAU）后进行生物分布研究，计算％ID／g；采用实时定量PCR和Westernblot定量分析TK基因的表达；数据分析采用独立样本t检验、单因素方差分析及Pearson相关分析。结果原位移植组梗死侧脑组织中的％ID／g为0．124±0．013，明显高于侧脑室移植组（0．052±0．004）、颈动脉移植组（0．061±0．002）、尾静脉移植组（0．059±0．005）和对照组（0．005±0．001），差异有统计学意义（t=2．913～5．652，P均〈0．05），其他移植细胞组组间差异无统计学意义（￡=0．694—1．448，P均〉0．05）。所有移植细胞组内两侧脑组织％ID／g的差异有统计学意义（f=9．004～15．734，P均〈0．05），而对照组两侧间差异无统计学意义（t=1．511，P=0．182）。此外，原位移植组梗死侧脑组织中TK基因的表达高于其他各组，差异有统计学意义（t=7．482～12．371，P均〈0．05）；且脑组织TK基因表达的相对量与％ID／g呈正相关（r=0．971，P〈0．001）；脑组织内TK／[3一actin的比值与％ID／g呈正相关（r=0．899，P：0．002）。结论原位注射是治疗脑梗死的最佳细胞移植途径；选择适当示踪剂，可利用PET或SPECT进行无创性活体监测细胞移植治疗脑梗死的效果。

I型内含子核酶介导靶向CEA双报告基因显像的体外研究

目的构建靶向CEA的以I型内含子核酶为载体核心介导的生物发光一核素双报告基因显像系统。方法采用基因工程技术构建靶向CEA的I型内含子核酶及核酶-荧光素酶-胸苷激酶（Rib53-Fluc-tk）报告质粒，采用细胞生物发光等方法检测核酶反式剪接产物的表达；以Iodogen固相氧化法合成131I-氟-碘阿糖呋喃基尿嘧啶（FIAU），行细胞摄取实验。采用两样本t检验、方差分析及最小显著差异（LSD）t检验进行统计分析。结果Rib53一Fluc—tk测序正确；乳腺癌细胞MCF-7的荧光素酶比值增高，可达O．64±0．10（n=4）；MCF-7细胞转染Rib53-Fluc—tk后的反式剪接产物条带大小为520bp，测序结果正确；pCDNA3．1-CEA及Rib53-Fluc-tk共转人胚。肾细胞293T，可探测到生物发光信号。131I—FIAU的标记率为（64．02±4．79）％（n=3），放化纯为（95．96±1．07）％（n=3），标记产物在人血清中24h的稳定性高。293T单独转染Rib53-Fluc-tk，细胞摄取率仅为（0．31±0．01）％（n=4）；293T共转染pCDNA3．1-CEA、Rib53-Fluc-tk质粒，细胞摄取率增加至（1．40±0．06）％（n=4），F=1007．29，t=136．34，P〈0．01。结论成功构建了I型内含子核酶为核心介导的靶向CEA的双报告基因系统，并对CEAmRNA进行了生物发光以及细胞摄取的检测，为改善传统报告基因显像的特异性奠定了体外实验的基础。