阿纳其根醇提物对冈田酸诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的研究阿纳其根醇提物对冈田酸(OA)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法制备OA诱导的PC12细胞损伤模型。倒置显微镜观察PC12细胞形态的变化;MTT比色法测定阿纳其根醇提物对PC12细胞存活率的影响;流式细胞仪检测阿纳其根醇提物对PC12细胞凋亡和细胞周期的变化。结果与正常组相比,20 nmol/L OA作用PC12细胞24 h,细胞活力显著下降(P<0.01),细胞凋亡率上升(P<0.01),细胞分裂周期阻滞(P<0.01)。与OA损伤组相比,阿纳其根质量浓度在0.5~5.0 mg/m L范围内可呈浓度依赖性地恢复OA诱导的PC12细胞损伤,明显提高模型细胞的存活率(P<0.01),降低细胞凋亡比率(P<0.05),增高细胞在S期和G2/M期的细胞比率(P<0.01),促进细胞的增殖和生长。结论阿纳其根醇提物对OA诱导PC12细胞具有明显保护作用,能有效促进细胞存活率、抑制细胞凋亡、减轻细胞周期阻滞现象。

维吾尔族药阿纳其根中绿原酸的含量测定

目的:建立测定维吾尔族药阿纳其根中绿原酸含量的高效液相色谱法(HPLC)。方法:色谱柱为Agilent 5 TC-C_(18)柱(5μm,4.6 mm×150 mm),以乙腈-0.4%磷酸水(13∶87,V/V)为流动相,流速为0.8 m L·min^(-1),紫外检测波长为327nm。结果:绿原酸在质量为0.0484 mg^0.968 mg范围内呈良好线性关系,回归方程:Y=2296316.8X-1369.4(r=0.9999),平均回收率为100.20%,RSD=2.75%。结论:该方法简便、灵敏、重现性好,可用于阿纳其根中绿原酸的含量测定。

高通量测序分析阿纳其根醇提取物对咳嗽变异性哮喘大鼠肠道菌群的影响

目的研究阿纳其根醇提取物(EEAP)对咳嗽变异性哮喘大鼠肠道菌群的影响。方法采用卵清蛋白-费氏完全佐剂将6~8周龄雄性SD大鼠建立咳嗽变异性哮喘(Cough variant asthma,CVA)模型,随机分为3组,CVA模型组(等体积的生理盐水)、EEAP组(EEAP,640 mg/kg)、阳性药组(醋酸泼尼松,250 mg/kg),每组8只;取8只未造模的SD大鼠作为对照组(等体积的生理盐水)。EEAP和阳性药组大鼠给予药物连续干预,其余各组给予生理盐水,30 d后收集各组大鼠粪便。采用高通量测序技术分析各组大鼠肠道菌群,基于扩增子序列变异(Amplicon sequence variation,ASV)进行Alpha和Beta多样性分析EEAP对肠道细菌属水平的影响。结果高通量测序得到4771个ASV,Alpha多样性分析发现4组大鼠肠道菌群chao1、dominance、observed、pielou、shannon和simpson指标无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,CVA组大鼠肠道中Prevotellaceae_Ga6A1_group丰度明显升高,而Prevotella、Prevotellaceae_NK3B31_group和Prevotellaceae_UCG_001丰度明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与CVA组相比,EEAP组和阳性药组大鼠肠道中Prevotella和Prevotellaceae_NK3B31_group丰度明显升高,而Prevotellaceae_Ga6A1_group丰度明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论EEAP对CVA的改善作用可能与调节肠道菌群结构有关,其机制需进一步研究。

阿纳其根脂肪酸成分分析及其对蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B抑制作用研究

利用三种不同溶剂(正己烷、乙醚、氯仿)经索氏提取法提取阿纳其根中的油脂成分,经甲酯化后,用气相色谱质谱法(GC-MS)对脂肪酸组成进行了分析和鉴定。试验结果显示,正己烷提取油脂中共鉴定出了8种脂肪酸,其中亚油酸为36.341%、棕榈酸为34.268%、油酸为19.656%;乙醚提取油脂中共鉴定出了12种脂肪酸。其中亚油酸为34.102%、棕榈酸为32.916%、油酸为20.000%、亚麻酸为5.329%;氯仿提取油脂中共鉴定出了5种脂肪酸。其中亚油酸为42.427%、棕榈酸为40.952%、油酸为11.250%。对阿纳其根脂肪酸进行蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)的抑制作用研究,结果表明脂肪酸对PTP1B有较强的抑制作用,其IC50分别为5.27±0.40、4.71±0.08、7.01±1.98μg/m L。该研究为深入研究阿纳其根的药理作用提供了科学依据。

阿纳其根总黄酮提取工艺及其对Tau蛋白过度磷酸化的研究

目的:优选阿纳其根总黄酮提取工艺条件及探讨其对Tau蛋白过度磷酸化的影响。方法:以单因素试验考察乙醇浓度、提取温度、提取次数、提取时间和液料比5个因素对阿纳其根总黄酮得率的影响,采用响应面法优化乙醇提取阿纳其根总黄酮的工艺条件。以冈田酸损伤PC12细胞作为研究模型,考察阿纳其根总黄酮对细胞存活率和Tau蛋白磷酸化位点的磷酸化水平的影响。结果:阿纳其根总黄酮提取的最佳工艺条件为:提取温度90℃、乙醇浓度65%、提取时间60 min、液料比12∶1(mL/g),此时总黄酮得率为(11.66±0.12)mg/g。阿纳其根能够明显提高模型细胞的存活率,降低Tau蛋白磷酸化位点的磷酸化程度。结论:优化的阿纳其根总黄酮提取工艺能够提高总黄酮得率,方法简便,阿纳其根总黄酮具有保护神经细胞和抑制Tau蛋白过度磷酸化作用。

阿纳其根醇提物对D-半乳糖致衰老小鼠抗衰老作用的血清核磁共振代谢组学研究

目的利用核磁共振代谢组学方法研究阿纳其根提取物对D-半乳糖致衰老小鼠抗衰老作用机制。方法选取3月龄的昆明小鼠60只并将其随机分为正常组、模型组、阳性对照组和阿纳其根95%醇提物低、中、高剂量给药组,正常组以外的小鼠每天1次皮下注射D-半乳糖100mg/kg,同时对阿纳其根低、中、高剂量给药组分别灌胃相应浓度的阿纳其根95%醇提物(0.15、0.3、0.6g/kg),对阳性对照组灌胃盐酸多奈哌齐(0.92 mg/kg),模型组灌胃等体积的生理盐水,连续给药45 d,第45 d末次给药1 h后利用Morris水迷宫实验观察小鼠学习和记忆能力并收集各组小鼠血清,用1H-核磁共振氢谱法(hydrogen-nuclear magnetic resonance,1H-NMR)测定核磁共振氢谱,采用偏最小二乘回归分析法(partial least squares-discriminant analysis, PLS-DA)和正交偏最小二乘法判别分析法(orthogonalpartialleastsquares-discriminantanalysis,OPLS-DA)分析研究每组小鼠血清中代谢产物差异。结果行为学检测结果显示与模型组小鼠比较,阳性对照组和阿纳其根醇提物不同剂量组的逃避潜伏期逐渐缩短,差异有统计学意义(P<0.01);各组小鼠的空间探索实验显示与模型组相比,阿纳其根95%醇提物各剂量组小鼠经过有效区次数显著增加(P<0.05);且各组血清多种代谢物有显著性差异(P<0.05)。结论 D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠的糖代谢代谢、氨基酸代谢发生紊乱,而阿纳其根醇提物对其紊乱有一定的改善作用从而发挥抗衰老作用。

阿纳其根化学成分和药理研究进展

阿纳其根为维药常用药材,目前发现阿纳其根中主要含有脂肪酸、N-烷基酰胺类化合物、哌啶类生物碱等化学成分。其药理研究主要集中在治疗白癜风、抗炎、抗肿瘤等作用上。通过文献检索,对近年来阿纳其根的化学成分和主要药理作用的研究进展进行归纳,以期为阿纳其根的研究开发和利用提供参考。

阿纳其根醇提物对衰老小鼠认知障碍改善作用

目的:研究阿纳其根醇提物对D-半乳糖联合三氯化铝(AlCl_(3))致痴呆小鼠模型学习记忆及抗氧化作用的影响。方法:采用腹腔注射D-半乳糖联合灌胃AlCl_(3)建立痴呆模型。采用跳台试验测试小鼠学习记忆能力;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清、海马组织和大脑皮层中脂褐素和活性氧(ROS)的含量;采用比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果:跳台试验中,与模型组比,阿纳其根醇提物各剂量组潜伏期延长,错误次数有降低趋势;在生化指标检测中,阿纳其根醇提物各剂量组可减少小鼠海马组织中脂褐素、ROS含量,提高海马组织和大脑皮层中SOD活性。结论:阿纳其根醇提物能够改善D-半乳糖联合AlCl_(3)致痴呆小鼠模型学习记忆障碍,其作用机制可能与其提高体内抗氧化能力,减少脑组织之中脂褐素的堆积有关。

外敷维药阿纳其根散联合口服中药方治疗关节炎的疗效

目的:观察外敷维药阿纳其根散联合口服中药方在关节炎治疗中的应用效果。方法:选取2019年1月—2021年1月我院收治的102例关节炎患者作为研究对象,以奇数、偶数随机抽样的方式,抽取到奇数的为对照组(口服中药方,51例),抽取到偶数的为观察组(外敷维药阿纳其根散联合口服中药方,51例)。结果:治疗前,两组疼痛情况差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组疼痛情况差异有统计学意义(P<0.05)。两组组内治疗后与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后症状改善时间的对比差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗效果差异有统计学意义(P<0.05)。结论:外敷维药阿纳其根散联合口服中药方治疗关节炎,可缓解疼痛,缩短症状改善时间。

维药阿纳其根抗肿瘤活性部位筛选及其化学成分的分离鉴定

为探寻阿纳其根的生物活性成分,对其抗肿瘤活性部位化学成分进行了研究。结果表明,主要抗肿瘤活性部位为二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位。从阿纳其根的二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位共分离得到10个单体成分,其中,包括7个N-烷基酰胺类生物碱、1个香豆素和2个黄酮苷。分别为十四-2E,4E,8E-三烯酸-4-羟基苯乙胺(1)、十-2E,4E-二烯酸异丁基胺(2)、十一-2E,4E-二烯-8,10二炔酸苯乙胺(3)、十四-2E,4E-二烯酸-4-羟基苯乙胺(4)、十四-2E,4E-二烯-8,10-二炔-异丁基胺(5)、十-2E,4E-二烯酸苯乙胺(6)、十二-2E,4E-二烯酸苯乙胺(7)、异莨菪亭(8)、槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、异鼠李素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)。活性部位分离得到的化合物1为1个新的化合物,化合物2~4,化合物8~10为首次从该植物中分离得到。

阿纳其根提取物抗抑郁作用及其机制研究

目的研究阿纳其(罗马除虫菊Anacyclus pyrethrum)根提取物对慢性抑郁模型和药物诱发抑郁模型的影响。方法采用慢性温和不可预知应激(CUMS)刺激的方式制备外源性大鼠抑郁模型,通过糖水偏好度、旷场实验、强迫游泳实验、悬尾实验考察大鼠行为学变化;利用Elisa法检测大鼠血清皮质酮的量与海马中5-羟色胺(5-HT)和多巴胺(DA)的量。采用药物诱导方式制备内源性小鼠抑郁模型,分别采用利血平拮抗实验、5-羟色氨酸(5-HTP)诱导甩头实验和育亨宾毒性实验建立内源性小鼠抑郁模型,通过观察小鼠眼睑下垂动物数、运动不能动物数、甩头次数和死亡率,研究阿纳其根提取物抗抑郁作用。结果慢性抑郁模型中,阿纳其根提取物可明显提高CUMS抑郁模型大鼠糖水偏好度、旷场实验中水平穿格次数和直立次数,显著降低强迫游泳和悬尾实验中大鼠的不动时间,同时抑制大鼠血清中皮质酮水平,促进大鼠海马中5-HT和DA水平的升高。药物诱发抑郁模型中,阿纳其根提取物能够减少利血平诱导小鼠的眼睑下垂动物数和运动不能动物数,显著提高5-HTP诱导小鼠的甩头次数,但对育亨宾诱导致死小鼠数量没有影响。结论阿纳其根提取物对慢性抑郁大鼠和药物诱导的抑郁小鼠有一定的抗抑郁作用,其作用机制可能与降低皮质酮和促进5-HT神经功能有关。

HPLC法测定阿纳其根中2个N-烷基类成分的含量

目的:建立采用高效液相色谱同时测定维吾尔药阿纳其根中2个N-烷基类成分含量的方法,为制定阿纳其根质量标准提供依据。方法:采用LC-20A型高效液相色谱仪,Agilent TC-C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇-水(70:30)为流动相,流速0.8 mL·min^(-1),检测波长243 nm,柱温25℃。结果:十-2E,4E-二烯酸-4-羟基苯乙胺和十二-2E,4E-二烯酸-4-羟基苯乙胺质量浓度分别在30.6~122.4 mg·L^(-1)和17.2~68.8 mg·L^(-1)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率(n=6)分别为99.90%(RSD=1.60%)和100.4%(RSD=0.85%);3批阿纳其根药材中两者含量范围分别为0.046%~0.054%和0.035%~0.039%(n=3)。结论:经方法学验证,该方法可为阿纳其根药材质量控制提供一定的参考。

N-烷基酰胺类衍生物的质谱裂解机制研究

以阿纳其根中的N-烷基类化合物(NAAs)为先导化合物,以对羟基苯乙胺和系列脂肪酸为原料,HATU为缩合剂,合成了N-烷基酰胺酯类(A)、N-烷基酰胺类(B)两类共20种新化合物,并用UPLC-Q-TOF-MS技术获取裂解数据,探讨其质谱裂解规律。在ESI^+模式下,这20种化合物均易形成[M+H]^+准分子离子。A类化合物首先发生羰基α断裂,即C—O键断裂,再发生N-位α裂解,分别形成4-羟基苯乙胺离子[M+H]^+(m/z 138.0912)和4-羟基苯乙基离子(m/z 121.0630);B类化合物仅发生N-位α裂解。通过多巴速率氧化法评价了NAAs衍生物的体外酪氨酸激活活性,结果表明,该类化合物具有较好的激活体外酪氨酸酶活性,其中H-2优于阳性对照药8-MOP。该研究可为NAAs类化合物的结构分析及开发应用提供参考依据。