斑马鱼颅骨骨组织发育特征的研究

目的:采用两种骨组织双重染色方法研究斑马鱼颅骨骨组织的发育特征,找出适合于不同发育时期斑马鱼骨组织的染色方法。方法:将不同发育阶段的斑马鱼分为两组,分别用A、B两种方法进行染色,体视显微镜下观察染色结果并拍照。结果:不同发育阶段的斑马鱼分别经A、B染色法染色软骨都被染成蓝色,但两者在骨骼上的染色有差别,对于15d以内骨化不完全的斑马鱼适合用A染色法,15d以上的斑马鱼骨化程度加重更适合用B染色法突出骨骼特征。整体来看,斑马鱼颅骨的骨化过程存在特定的程序化特征,即不同的颅骨组织按照一定的时间顺序逐步完成骨化。结论:可利用颅骨的程序化骨化特征研究人类颅颌面畸形,积极开展口腔医学领域斑马鱼模式生物学的研究。

非肌性肌球蛋白Ⅱ-B调节斑马鱼咽弓的发育

目的探讨非肌性肌球蛋白Ⅱ(NMⅡ)家族基因在斑马鱼胚胎期咽弓的表达及其对咽弓发育的影响。方法通过斑马鱼胚胎整体原位杂交及冷冻切片技术(n=10),观察NMⅡ家族基因在斑马鱼胚胎期咽弓的表达情况。利用软骨的阿辛蓝染色方法,将野生型对照组(n=10)和blebbistatin处理组(每个浓度n=10)的斑马鱼胚胎进行比较,分析NMⅡ对斑马鱼胚胎期咽弓发育和形成的影响。结果受精后72 h(72hpf),NMⅡ-B在斑马鱼发育着的咽弓部位有特异性表达;120 hpf,NMⅡ-B在咽弓表达增加。Blebbistatin特异性抑制NMⅡ-B功能后,斑马鱼咽弓发生明显发育缺陷,部分软骨细胞出现显著形态改变;抑制咽弓形成的作用与blebbistatin浓度呈现剂量依赖效应。结论 NMⅡ-B通过影响咽弓软骨细胞从而调节斑马鱼胚胎期咽弓的发育。

应用骨骼染色评价胎鼠骨发育的3种方法

发育是一个极其复杂的过程,尤其是胚胎时期的骨发育异常经常涉及生命科学领域中的多种学科。胚胎时期骨发育异常不但引起患儿身体严重畸形及功能障碍,而且导致患儿的日常生活、学习都无法正常进行,这给家庭和社会都带来了沉重的精神和经济负担。为了提高人口素质、改善生活质量,医疗界科研人员不断探索引起胎儿骨发育异常的作用机制。随着现代科学技术的发展,用于研究胎儿骨骼发育的科研方法也随之得到改进,致使许多骨发育异常的病因、病理都得到阐明。国内外科研人员对胚胎时期导致各种骨发育异常,甚至畸形的病因,病理从结构到功能、

经防腐处理的人脑厚片的染色方法

用阿辛蓝将人脑切面的灰质染成青绿色，使灰、白质间形成明显对比，为神经解剖学的研究提供很有价值的标本。

鼻咽原发性腺样囊性癌及其与EB病毒感染的关系

目的 探讨鼻咽癌高发的广州地区鼻咽原发性腺样囊性癌的临床病理特征及其与EB病毒感染的关系。方法 对17例鼻咽原发性腺样囊性癌进行临床资料分析。除HE、阿辛蓝及过碘酸Schiff(PAS)常规染色外,采用标记链酶素卵白素生物素(LUAB)免疫组织化学法检测一系列上皮性标志物、CD21和EB病毒编码的潜伏膜蛋白(LMP)1的表达。采用原位杂交法检测EB病毒编码的小RNAs(EBER)。用巢式聚合酶链反应(PCR)法检测EB病毒DNA W片段。结果 17例鼻咽原发性腺样囊性癌患者的男女之比为7:10,年龄30～63岁,中位年龄46岁。17例中14例的肿物呈明显局部侵袭性生长,病变属T3或T4期,仅1例有同侧颈淋巴结转移。大部分肿瘤细胞呈基底细胞样,核小而深染、仅有少许胞质;细胞之间常可见伊红染色同质性或黏液样物质;16例可见筛孔状的特征性结构。鼻咽原发性腺样囊性癌均表达广谱细胞角蛋白和上皮膜抗原。9例(9/17)可见少数癌细胞呈EBER阳性,采用巢式PCR法同时检测到这9例活检组织192bp的EB病毒W片段阳性带,EBER阳性癌细胞的病例中,5例的癌细胞表达LMP1;其中3例的肿瘤间质中又可见少数EBER阳性的浸润性淋巴细胞。所有17例的癌细胞,包括EBER阳性的癌细胞均不表达CD21。结论 鼻咽原发性腺样囊性癌患者以女性为多见。肿瘤生长呈明显的侵袭性。

鸡胚颅面部软硬骨骼双重染色的实验研究

目的探讨清晰双重染色鸡胚颅面部骨和软骨利于观察鉴别其形态的方法。方法应用茜素红和阿辛蓝对孵化38期的鸡胚作双重染色。染色前将鸡胚头部去脑揭皮处理,应用4%磷酸盐缓冲中性多聚甲醛固定液,调整酸性染色液的酸度和染色时间,应用1%氢氧化钾和75%乙醇混合液中和残余酸液以减少骨的脱钙,甘油梯度透明,提高骨和软骨的染色效果。结果阿辛蓝将鸡胚颅面部软骨染成蓝色,茜素红将硬骨染成红色,肌肉组织呈透明状,可清楚观察鸡胚颅面部骨骼的形态。结论经过优化的茜素红和阿辛蓝双重染色技术,使鸡胚颅面部骨和软骨分别清晰染色有利于鉴别观察其形态,为以鸡胚作为动物模型进行颅面部发育畸形研究奠定基础。

改良Hale胶体铁组合染色可较好地显示肺组织新型隐球菌

隐球菌在自然界分布广泛，在医学微生物学中的命名为新型隐球菌，由于新型隐球菌为酵母型真菌，外覆一层由多糖组成的厚荚膜，一般染色法难以使其清晰着色，难以观察到该菌的整体结构，所以被称为隐球菌。肺隐球菌病是一种少见的由新型隐球菌感染引起的肺部真菌病。其临床及影像学表现缺乏特异性，易误诊为普通肺炎、肺结核及肺部肿瘤等。利用相关染料和化学试剂等可显示新型隐球菌在组织中的存在和分布情况，临床实践中常用的染色法有阿辛蓝染色法、过碘酸．雪夫（PAS）染色法、六胺银染色法等。我们经过改良Hale胶体铁法和丽春红苦味酸液组合染色，能够较好地显示人体肺组织中新型隐球菌，使菌体荚膜与细胞核和胶原纤维的着色对比明显，更好地辅助肺隐球菌病的病理诊断。