阿霉素预处理联合GNPs-siPD-L1通过激活抗肿瘤免疫反应抑制肺癌进展

目的 探讨包含程序性细胞死亡蛋白配体(PD-L)1小干扰RNA(siRNA)的金纳米粒(GNPs-siPD-L1)联合阿霉素预处理通过激活抗肿瘤免疫-反应抑制肺癌进展。方法 通过透射电镜观测GNPs-siPD-L1的外观形态;利用Western印迹检测肺癌细胞中的PD-L1表达;使用流式细胞术检测肺癌细胞对GNPs-siPD-L1的摄取能力;通过小鼠移植瘤模型验证GNPs-siPD-L1的体内抑瘤能力;免疫组化法检测肿瘤组织中T细胞的浸润情况;流式细胞术及TUNEL染色检测肿瘤组织中细胞凋亡情况。结果 构建的GNPs-siPD-L1粒径均一,且可以明显增加肺癌细胞对PD-L1 siRNA的摄取(P<0.001),明显降低PD-L1表达(P<0.05);GNPs-siPD-L1联合阿霉素预处理可以明显抑制肺癌细胞在小鼠体内生长(P<0.001);同时,GNPs-siPD-L1联合阿霉素预处理还可以显著增加肿瘤组织中T细胞浸润(P<0.001),明显增加肿瘤组织中的细胞凋亡(P<0.001)。结论 低剂量阿霉素预处理联合GNPs-siPD-L1可以激发抗肿瘤免疫反应,抑制小鼠肺癌进展。

姜黄素通过调控SIRT3/SOD2信号通路对阿霉素引起心肌细胞毒性的减轻作用

目的:探讨姜黄素改善阿霉素(DOX)诱导的心肌H9c2细胞毒性的作用,并阐明其作用机制。方法:采用DOX处理H9c2细胞建立心肌细胞毒性模型。将H9c2细胞分为正常组、DOX组、DOX+姜黄素组和DOX+姜黄素+沉默信息调节蛋白3(SIRT3)抑制剂3-TYP+DOX组(DOX+姜黄素+3-TYP组)。24 h后观察各组细胞形态表现,CCK-8法检测各组细胞活性,TUNEL染色检测各组细胞凋亡率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞中过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平,2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测各组细胞中活性氧(ROS)水平,Western blotting法检测各组细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶2(NOX2)、NADPH氧化酶4(NOX4)、SIRT3、乙酰化超氧化物歧化酶2(Ac-SOD2)和超氧化物歧化酶2(SOD2)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,DOX组H9c2细胞肿胀,细胞活性降低(P<0.05),细胞中CAT和SOD活性降低(P<0.05),MDA和ROS水平升高(P<0.05),NOX2和NOX4蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值和SIRT3蛋白表达水平降低(P<0.05),SOD和Ac-SOD2蛋白表达水平升高(P<0.05);与DOX组比较,DOX+姜黄素组H9c2细胞形态改善,细胞活性升高(P<0.05),细胞中CAT和SOD活性升高(P<0.05),MDA和ROS水平降低(P<0.05),NOX2和NOX4蛋白表达水平降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值和SIRT3蛋白表达水平升高(P<0.05),SOD2和AcSOD2蛋白表达水平降低(P<0.05);与DOX+姜黄素组比较,DOX+姜黄素+3-TYP组细胞肿胀,细胞密度和细胞活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中CAT和SOD活性降低(P<0.05),MDA水平和ROS水平明显升高(P<0.05),NOX2和NOX 4蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值和SIRT3蛋白表达水平降低(P<0.05),SOD2和Ac-SOD2蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:姜黄素通过激活SIRT3/SOD2信号抑制氧化应激和细胞凋亡,改善细胞活性,减轻DOX引起的心肌H9c2细胞毒性。

CMIP促进人结直肠癌对阿霉素耐药性的机制研究

目的探讨CMIP对人结直肠癌阿霉素耐药性的影响。方法收集淮北市人民医院2021年1月—2022年12月60例结直肠癌患者的癌组织标本和癌旁正常组织标本,免疫组化检测CMIP在结直肠癌组织中的表达,分析CMIP与结直肠癌临床病理特征的相关性。采用CCK8实验检测人结直肠癌HCT116、HT29细胞株的细胞增殖活力,并采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力。运用catRAPID omics v2.0网站预测CMIP的潜在互作靶点,通过Metascape网站对CMIP的靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。结果CMIP在结直肠癌组织中呈高表达,CMIP表达与结直肠癌临床病理特征存在相关性。过表达/敲低CMIP可促进/抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移,过表达/敲低CMIP可促进/抵抗结直肠癌阿霉素耐药。通过catRAPID omics v2.0数据库共发现205个CMIP相关mRNA,GO和KEGG分析结果显示,CMIP可能通过多种生物学过程和信号通路介导结直肠癌阿霉素耐药。结论CMIP可促进结直肠癌的发展和阿霉素耐药,具体作用机制还需进一步研究。

NVP-BEZ235逆转伯基特淋巴瘤RAJI细胞阿霉素耐药的研究

目的:研究NVP-BEZ23对耐阿霉素细胞株RAJI/DOX的逆转耐药作用。方法:利用浓度梯度法诱导耐阿霉素细胞株RAJI/DOX;Western blot测定各组细胞Pgp、p-AKT、p-mTOR蛋白水平;MTT法检测细胞抑制率,SPSS软件测定IC50。结果:成功诱导出耐阿霉素细胞株RAJI/DOX。耐阿霉素细胞株RAJI/DOX中Pgp、p-AKT、p-mTOR蛋白水平高于亲本细胞RAJI。NVP-BEZ235可引起耐阿霉素细胞株RAJI/DOX中p-AKT、p-mTOR蛋白水平下降。NVP-BEZ235能够抑制耐阿霉素细胞株RAJI/DOX增殖,与阿霉素具有协同作用。结论:PI3K/AKT/mTOR通道在耐阿霉素伯基特淋巴瘤细胞中进一步活化;NVP-BEZ235通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通道活化,能够与阿霉素协同抑制伯基特淋巴瘤耐药细胞,逆转伯基特淋巴瘤耐药细胞对阿霉素的耐药性。

六味地黄汤对阿霉素肾病小鼠尿蛋白及肾小球p-p38 MAPK、α-actinin-4、synaptopodin的影响

目的探讨六味地黄汤对阿霉素肾病(adriamycin nephropaghy,ADRN)小鼠尿蛋白的干预作用及可能机制。方法30只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机选取5只为空白组,余下小鼠以单次尾静脉注射阿霉素(0.01 g·kg^(-1))复制ADRN模型,2周后将造模成功的小鼠随机分为模型组、贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组,每组5只。空白组、模型组予等体积注射用水灌胃,贝那普利组予0.0013 g·kg^(-1)贝那普利灌胃,低、中、高剂量六味地黄汤组分别予9.75、19.5、39 g·kg^(-1)六味地黄汤灌胃,每日1次,连续8周。自动生化仪检测小鼠24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐、血清钾;HE染色法、电镜观察小鼠肾脏病理改变及足突形态;免疫组织化学法、Western bolt检测小鼠肾脏磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)、α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)、突触孔蛋白(synaptopodin)的表达;RT-PCR检测小鼠肾脏α-actinin-4、synaptopodin mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、24 h尿量、血清白蛋白降低,24 h尿蛋白定量升高(P<0.05);肾小球系膜细胞增生,部分系膜区扩大、肾小管蛋白管型,间质可见炎性细胞浸润,足突广泛融合;α-actinin-4蛋白及mRNA、p-p38 MAPK蛋白表达升高(P<0.05),synaptopodin蛋白及mRNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,各干预组病理改变及足突融合均得到不同程度改善,贝那普利组及中、高剂量六味地黄汤组24 h尿蛋白定量减少,高剂量六味地黄汤组p-p38 MAPK蛋白表达降低(P<0.05),低、中、高剂量六味地黄汤组synaptopodin蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组组间比较,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论六味地黄汤可能通过抑制p38 MAPK通路活化和上调α-actinin-4、synaptopodin蛋白及mRNA表达,改善肾脏病理及足突融合,减轻足细胞损伤,减少ADRN小鼠尿蛋白。

五苓散与麻黄五苓散对阿霉素肾病大鼠肾功能保护效应的比较研究

目的观察并比较五苓散与麻黄五苓散对阿霉素肾病(adriamycin nephropathy,AN)模型大鼠的干预效应,并研究其作用机制。方法50只SD大鼠随机分成5组,即空白对照组、模型组、贝那普利组、五苓散组、麻黄五苓散组。除空白对照组外,所有大鼠采用尾静脉注射盐酸阿霉素方法复制大鼠肾病模型。各给药组分别灌胃相应药物,给药期间监测大鼠每周体质量;5周后检测24 h尿量和尿蛋白;检测血清中肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿酸(serum uric acid,SUA)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量;Western blot检测肾组织中肾病蛋白(nephrin)、足突蛋白(podocin)表达水平;HE染色观察大鼠肾组织病理变化。结果与空白对照组比较,模型组大鼠平均体质量显著下降(P<0.01),尿量减少(P<0.05),24 h尿蛋白显著增加(P<0.01),SCr、SUA及BUN水平均显著升高(P<0.01),HE染色显示肾组织细胞形态不规则,胞核变形,染色质边集,nephrin、podocin蛋白表达显著下降(P<0.01)。与模型组比较,麻黄五苓散组大鼠平均体质量增加(P<0.01),尿量增加(P<0.05),24 h尿蛋白含量明显降低(P<0.05),SUA和BUN水平显著下降(P<0.01),大鼠肾组织微观病理损伤明显减轻,nephrin、podocin蛋白表达显著升高(P<0.01)。与五苓散组比较,麻黄五苓散组大鼠尿量显著增加(P<0.01),24 h尿蛋白含量明显减少(P<0.05),nephrin蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论麻黄五苓散可有效抑制阿霉素肾病大鼠肾组织损伤,降低尿蛋白,改善肾功能。与五苓散比较,麻黄五苓散具有更明显的利尿和抑制尿蛋白作用。

基于FGF2表达探讨红景天苷对阿霉素诱导的心脏毒性的保护作用及对NLRP3炎症小体的影响

目的探讨红景天苷对阿霉素诱导的心脏毒性的保护作用及分子机制。方法①将18只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、红景天苷组,每组6只。对照组不做处理;模型组和红景天苷组分别于实验第1天、第2天、第4天尾静脉注射阿霉素6 mg/kg,红景天苷组在实验第1天时于阿霉素注射前腹腔注射红景天苷8 mg/kg。分别于实验第1天、第7天和第14天称量小鼠体重,超声心动图测定左心室射血分数(LVEF)。实验第14天,处死小鼠后称心脏和左心室质量,测量胫骨长度,计算心脏质量/胫骨长度比值和左心室质量/胫骨长度比值,硫代巴比妥酸法测定心肌组织匀浆(总)、心肌组织线粒体部分、心肌组织细胞质部分中丙二醛(MDA)相对含量,DHE荧光探针法测定心肌组织匀浆(总)中活性氧(ROS)含量,Western blot法检测心肌组织中白细胞介素-1β前体(Pro-IL-1β)、IL-1β、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)前体(Pro-Caspase-1)、Caspase-1 p20蛋白表达情况。②取大鼠H9c2心肌细胞,实验设空白组(细胞不做处理)、阿霉素组(加入0.5μmol/L阿霉素处理48 h)、阿霉素+红景天苷组(加入0.5μmol/L阿霉素和10μg/mL红景天苷处理48 h)、阿霉素+红景天苷+FGF2抗体组(加入0.5μmol/L阿霉素+10μg/mL红景天苷+0.1μg/mL FGF2抗体处理48 h),CCK-8测定细胞活力,Western blot法测定细胞中FGF2蛋白表达情况。结果①实验第1天、第7天和第14天,3组小鼠体重比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。实验第7天,模型组和红景天苷组小鼠LVEF均明显低于对照组(P均<0.05),模型组和红景天苷组比较差异无统计学意义(P>0.05);造模第14天,模型组小鼠LVEF、心脏质量/胫骨长度比值和左心室质量/胫骨长度比值均明显低于对照组(P均<0.05),红景天苷组均明显高于模型组(P均<0.05)。实验第14天,模型组小鼠心肌组织(总)MDA相对含量、心肌细胞线粒体部分MDA相对含量、心肌组织中ROS含量和心肌组织中IL-1β、NLRP3、Caspase-1 p20蛋白相对表达量均明显高于对照组(P均<0.05),红景天苷组上述各指标均明显低于模型组(P均<0.05);模型组小鼠心肌组织中Pro-Caspase-1蛋白相对表达量明显低于对照组(P<0.05),红景天苷组明显高于模型组(P<0.05);各组间心肌细胞胞质部分MDA相对含量和心肌组织中Pro-IL-1β相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。②阿霉素组细胞活力OD值和细胞中FGF2蛋白相对表达量均明显低于空白组(P均<0.05);阿霉素+红景天苷组细胞活力OD值明显高于阿霉素组和阿霉素+红景天苷+FGF2抗体组(P均<0.05);阿霉素+红景天苷组和阿霉素+红景天苷+FGF2抗体组细胞中FGF2蛋白相对表达量均明显高于阿霉素组(P均<0.05),阿霉素+红景天苷组和阿霉素+红景天苷+FGF2抗体组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论红景天苷可通过上调FGF2的表达抑制NLRP3炎症小体激活,减轻阿霉素诱导的心脏毒性。

基于斑马鱼模型研究康达心口服液对阿霉素心脏毒性的预防和作用机制

目的基于斑马鱼模型探究复方中药康达心口服液对阿霉素(doxorubicin,DOX)所致心脏毒性的预防及作用机制。方法将实验对象分为空白对照组、阿霉素造模组、康达心低浓度组、康达心中浓度组和康达心高浓度组。设计阿霉素和康达心浓度梯度,筛选出35μg/mL的阿霉素作为诱导浓度,5.9325×10^(-2)μg/mL、11.875×10^(-2)μg/mL和23.75×10^(-2)μg/mL的康达心分别作为低浓度、中浓度和高浓度治疗浓度。显微镜观察斑马鱼的畸形和心率等情况;TUNEL荧光观察心脏细胞的凋亡情况;Q-PCR和Western blot检测心脏发育相关基因及蛋白(SOX9b、GATA4、NKX2.5)的表达和凋亡相关基因及蛋白(P53、Caspase-9、bcl2、Bax、TNF-α)的表达。结果与空白对照组比较,阿霉素造模组和康达心低浓度组斑马鱼心率显著下降(P<0.05),而康达心中浓度组和高浓度组斑马鱼心率显著升高(P<0.05);荧光染色显示,与空白对照组比较,阿霉素造模组心脏细胞凋亡升高(P<0.05),不同浓度康达心共处理组心脏细胞凋亡显著降低(P<0.05);Q-PCR和Western blot检测显示,与空白对照组比较,阿霉素造模组心脏发育相关基因及蛋白表达、凋亡相关基因表达显著下降(P<0.05);与阿霉素造模组比较,不同浓度康达心处理组使心脏发育相关基因及蛋白表达、凋亡相关基因表达升高(P<0.05)。结论康达心口服液对阿霉素诱导的心脏毒性具有显著的预防作用,对心肌具有保护作用,也为其临床应用提供了科学依据。

miR-494在阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制研究

目的探讨miR-494在阿霉素(DOX)诱导大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制。方法将大鼠H9C2细胞分为4组:对照组、DOX组、DOX+阴性对照(NC)模拟物组、DOX+miR-494模拟物组;除对照组,其余3组均采用5μmol/L DOX与细胞共孵育法构建心肌细胞损伤模型;后两组分别进行NC模拟物、miR-494模拟物转染。采用细胞计数试剂盒8法检测细胞活力,实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-494、磷酸酶和张力蛋白同系物(PTEN)m RNA表达水平,原位末端转移酶标记染色法检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、PTEN、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-494与PTEN的相互作用。结果与对照组比较,DOX组H9C2细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平以及LDH、CK-MB含量均明显升高(均P<0.01),而细胞活力、Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(均P<0.01);与DOX+NC模拟物组比较,DOX+miR-494模拟物组H9C2细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平以及LDH、CK-MB含量均明显降低(均P<0.01),而细胞活力、Bcl-2蛋白表达水平均明显升高(均P<0.01)。PTEN与miR-494存在结合位点;PTEN-WT的荧光素酶活性被miR-494模拟物明显抑制(P=0.010),而PTEN-MUT的荧光素酶活性不受miR-494模拟物影响(P=0.707)。与对照组比较,DOX组H9C2细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均明显降低(均P<0.01);与DOX+NC模拟物组比较,DOX+miR-494模拟物组H9C2细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均明显升高(均P<0.01)。结论miR-494可能通过靶向抑制PTEN表达来调控PI3K/Akt信号通路,以改善DOX诱导的心肌细胞损伤。

重楼皂苷Ⅰ凝结HepG2细胞膜胆固醇增加阿霉素敏感性的研究

目的 探究重楼皂苷Ⅰ凝结细胞膜胆固醇影响肿瘤细胞对化疗药物敏感性的作用。方法 采用不同摩尔比的重楼皂苷Ⅰ与胆固醇进行体外结合实验,并培养HepG2细胞,给予不同浓度重楼皂苷Ⅰ,检测细胞内总胆固醇含量、FilipinⅢ标记细胞内胆固醇,透射电镜观察细胞膜形态学变化,免疫荧光染色标记细胞膜脂筏及ABCA1,Western bolt法检测ABCA1蛋白表达,并通过激光共聚焦与细胞流式仪检测阿霉素的吸收作用。最后,通过CCK-8实验明确重楼皂苷Ⅰ对阿霉素的增敏作用。结果 重楼皂苷Ⅰ在体外可与胆固醇结合形成凝胶固态物;可降低HepG2细胞总胆固醇含量,改变细胞膜形态,降低细胞膜脂筏含量并抑制外排蛋白ABCA1表达,从而增加化疗药物阿霉素吸收提高敏感性。结论 重楼皂苷Ⅰ可凝结细胞膜胆固醇,改变细胞膜通透性使化疗药物吸收和敏感性增加。

乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADR外泌体传递tTG参与MCF-7细胞耐药的研究

目的:研究乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADR通过外泌体传递tTG参与敏感细胞MCF-7耐药的过程。方法:本实验首先培养MCF-7、MCF-7/ADR细胞,然后检测MCF-7、MCF-7/ADR细胞中外泌体的含量,并将外泌体提取后备用。MCF-7/ADR细胞外泌体(EXO/ADR)与MCF-7细胞共培养建立MCF-7的外泌体耐药细胞(MCF-7+EXO/ADR)。使用Western blot法检测MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR细胞中的tTG蛋白的表达水平,使用流式细胞术分别检测敏感细胞株外泌体(EXO/S)、耐药细胞株外泌体(EXO/ADR)中tTG的表达水平。使用CCK-8法分别检测MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR细胞对阿霉素的敏感性情况。结果:实验结果显示,在EXO/S、EXO/ADR中均可以表达CD63、TSG101,但是较低表达Calnexin。经过流式细胞术检测发现,EXO/S、EXO/ADR中的tTG表达水平分别为(18.3±3.63)%、(46.07±8.31)%,二者tTG的表达有明显差异。经过Western blot检测MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR细胞中tTG的表达情况,我们发现MCF-7+EXO/ADR细胞的tTG表达水平较MCF-7细胞升高。MCF-7、MCF-7/ADR和MCF-7+EXO/ADR细胞对阿霉素的IC50分别为(1.91±0.18)μg/mL、(82.11±3.51)μg/mL、(6.16±1.15)μg/mL。结论:MCF-7/ADR细胞可能经分泌外泌体来传递tTG参与MCF-7细胞对阿霉素耐药的过程。

舒血宁注射液抑制线粒体过度分裂和凋亡减轻阿霉素诱导的心脏毒性的机制研究

目的:探讨舒血宁注射液对阿霉素诱导的心脏毒性的影响及可能机制。方法:48只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为空白组、阿霉素组、舒血宁注射液低剂量组、舒血宁注射液高剂量组,每组12只。空白组腹腔注射生理盐水;阿霉素组腹腔注射阿霉素2 mg/kg;舒血宁注射液低剂量组腹腔注射阿霉素2 mg/kg,同时腹腔注射1 mL/kg的舒血宁注射液;舒血宁注射液高剂量组腹腔注射阿霉素2 mg/kg,同时腹腔注射2 mL/kg的舒血宁注射液。每日干预1次,连续干预7 d,建立心脏损伤模型。检测各组大鼠血流动力学指标,观察大鼠心肌组织的病理形态学变化,检测血清肌钙蛋白T(cTnT)含量及大鼠心肌组织B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)、Phospho-动力蛋白相关蛋白-1(Drp1)和视神经萎缩相关蛋白1(OPA1)的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,阿霉素组大鼠心脏左室压力上升最大速率(+dp/dt_(max))和左室压力下降最大速率(-dp/dt_(max))绝对值降低(P<0.01),部分心肌纤维断裂、排列紊乱,血清cTnT增加(P<0.01),cleaved Caspase-3、Bax、p-Drp1蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2、OPA1蛋白表达降低(P<0.01)。与阿霉素组比较,经舒血宁注射液干预后,大鼠心脏功能和结构明显改善(P<0.01),血清cTnT水平降低(P<0.01),cleaved Caspase-3、Bax、p-Drp1表达减少(P<0.05或P<0.01),Bcl-2、OPA1表达增加(P<0.05或P<0.01)。结论:舒血宁注射液可能通过抑制线粒体过度分裂和细胞凋亡减轻阿霉素诱导的心脏毒性。

纳米氧化铈在阿霉素诱导心脏毒性中的作用及其对P53基因表达的影响

目的研究纳米氧化铈在阿霉素心脏毒性损伤中的作用及其对P53基因表达的影响,探讨纳米氧化铈对阿霉素心脏毒性损伤的作用机制。方法培养H9C2心肌细胞,随机分为5组:对照组、模型组(1μmol/L阿霉素)、纳米氧化铈组(10μg/ml纳米氧化铈)、实验组(1μmol/L阿霉素+10μg/ml纳米氧化铈)、阳性对照组(1μmol/L阿霉素+10μmol/L右丙亚胺)。建立阿霉素心脏毒性损伤模型,CCK-8法检测心肌细胞的存活率;生化法检测心肌细胞内乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量;流式细胞仪检测心肌细胞内活性氧(reactive oxygen,ROS)水平及细胞凋亡率;Western blot检测心肌细胞中Bax、Bcl-2及P53蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组的细胞存活率下降,细胞LDH、MDA含量上升,细胞内ROS水平和凋亡率增加,Bax和P53蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量下降,且Bcl-2/Bax比值下降(均P<0.001);与模型组相比,实验组细胞存活率上升,细胞LDH、MDA含量下降,细胞ROS含量和凋亡率下降,Bax和P53蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量升高,且Bcl-2/Bax比值升高(均P<0.001)。结论纳米氧化铈能有效预防阿霉素诱导的心脏毒性损伤,其作用可能与下调P53基因的表达,抑制细胞凋亡相关。

三白草酮通过铁死亡相关通路改善化疗药物阿霉素诱导的心肌细胞损伤

目的探讨三白草酮(sauchinone,Sau)对化疗药物阿霉素(doxorubicin,Dox)诱导的心肌细胞损伤的改善作用及铁死亡相关机制。方法选用心肌细胞系H9c2细胞,首先对Sau的细胞毒性进行分析,然后检测Sau对Dox细胞毒性的影响,并用SIRT1抑制剂分析SIRT1/Nrf2信号通路在Sau影响Dox心肌细胞毒性中的作用。以CCK-8细胞活性检测,乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、丙二醛(MDA)及4-羟基壬烯醛(4-HNE)活性或水平的试剂盒检测,细胞内Fe^(2+)水平的FerroOrange染色和Fe^(2+)水平检测试剂盒检测,线粒体膜电位JC-1染色,SIRT/Nrf2信号通路蛋白和谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)水平的Western blot检测等评估心肌细胞损伤程度和Sau作用机制。结果在Sau浓度为0~10μmol/L时,H9c2细胞活性不变;Sau以剂量依赖性改善Dox诱导的H9c2细胞活力降低;Sau对H9c2细胞线粒体膜电位水平、Fe^(2+)浓度、脂质过氧化物水平、SIRT/Nrf2信号通路蛋白GPX4水平无明显影响;Dox诱导H9c2细胞线粒体膜电位降低、Fe^(2+)和脂质过氧化物水平升高、SIRT1/Nrf2信号通路活性与GPX4水平显著降低,Sau对Dox诱导的上述毒性具有明显抑制作用,该抑制作用可被SIRT1/Nrf2信号通路抑制剂阻断。结论Sau可通过激活SIRT1/Nrf2信号通路降低Dox诱导的心肌细胞铁死亡,以发挥其保护作用。

禾肾丸通过调控ANGPTL3治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿及血脂代谢紊乱的实验研究

目的:探讨禾肾丸通过调控血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿及血脂代谢紊乱的作用机制。方法:50只雄性SD大鼠随机分为5组,每组10只,空白组:不作特殊处理,仅予以每日清晨蒸馏水灌胃;模型组:造模成功后每日清晨蒸馏水灌胃;禾肾丸组:造模成功后每日清晨以禾肾丸灌胃;对照组:造模成功后每日清晨以泼尼松灌胃;联合用药组:造模成功后每日清晨以泼尼松、禾肾丸灌胃,各组均灌胃8周。密切观察各组大鼠造模及研究期间各种行为学改变,检测和比较各组大鼠造模前1 d及造模后第2、4、6、8周末24 h尿蛋白水平,同时检测和比较各组大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等血脂指标及血清ANGPTL3表达水平。分析各组大鼠血清ANGPTL3表达水平与血脂指标及造模后第8周末24 h尿蛋白水平的相关性。结果:禾肾丸组、对照组及联合用药组大鼠造模后第8周各种行为学改变均优于模型组;各组大鼠造模前1 d 24 h尿蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05),造模后第2、4周模型组、禾肾丸组、对照组及联合用药组大鼠24 h尿蛋白水平均明显高于空白组(P<0.05),而组间比较差异无统计学意义(P>0.05),造模后第6、8周禾肾丸组、对照组大鼠24 h尿蛋白水平明显高于联合用药组和低于模型组(P<0.05),而禾肾丸组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);模型组、禾肾丸组、对照组及联合用药组大鼠TC、TG、LDL-C等血脂指标及血清ANGPTL3表达水平均明显高于空白组(P<0.05),而HDL均明显低于空白组(P<0.05),且禾肾丸组、对照组大鼠TC、TG、LDL-C及ANGPTL3均低于模型组和高于联合用药组(P<0.05),HDL-C均高于模型组和低于联合用药组(P<0.05),而禾肾丸组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);各组大鼠血清ANGPTL3表达水平与TC、TG、LDL-C及24 h尿蛋白均呈正相关关系(P<0.05~P<0.01),而与HDL-C呈负相关关系(P<0.05~P<0.01)。结论:禾肾丸可能通过调控ANGPTL3而起到治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿及血脂代谢紊乱的作用。

阿霉素对SD大鼠肠道真菌的影响

目的探究阿霉素处理后SD大鼠肠道真菌的改变。方法14只SD大鼠随机分为对照组和阿霉素组,阿霉素组采用阿霉素(7.5 mg/kg)单次尾静脉注射,6周后收集大鼠粪便进行ITS2测序及生物信息学分析,比较两组大鼠肠道真菌丰度及多样性变化,并进行差异菌属的鉴定。结果ITS2测序结果显示阿霉素组大鼠肠道真菌的丰度和多样性与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),Beta多样性差异有统计学意义(P<0.05)。在肠道真菌门水平,子囊菌门、unclassified-Fungi、unclassified、担子菌门、黏液菌门、蜕皮菌门占主导地位;在科水平,以白粉菌科、unclassified-Fungi、unclassified、孢菌科、曲霉科等为优势微生物;在属水平相对丰度由高到低依次为白粉病菌属、unclassified-Fungi、unclassified、链格孢属、曲霉属等。LEfSe结果显示阿霉素处理后,在属水平,unclassified-Fungi、丝衣霉属、链格孢菌属、金孢子菌属等13种真菌相对丰度显著减少,而木霉菌属、隐球菌属、毛霉属和白粉病菌属丰度显著增高。结论SD大鼠经阿霉素处理后,肠道真菌的菌群结构发生显著改变,不同分类水平下部分真菌的相对丰度存在明显变化。

利多卡因通过抑制NETs改善阿霉素引起的心脏毒性

目的通过动物实验验证利多卡因抑制中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)减轻阿霉素引起的心脏毒性。方法将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、阿霉素组(DOX组)和利多卡因+阿霉素组(LIDO+DOX组),每组10只。对照组单次腹腔注射生理盐水1 mL/100 g;DOX组单次腹腔注射阿霉素15 mg/kg;LIDO+DOX组尾静脉注射利多卡因6 mg/kg,30 min后腹腔注射阿霉素15 mg/kg。于第10天,取小鼠血清检测各组小鼠磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血浆NETs标志物游离DNA(cf-DNA)、瓜氨酸组蛋白3(CitH3)、髓过氧化物酶-DNA(MPO-DNA)的水平;采用免疫荧光法检测各组小鼠心脏组织NETs相关标记物中CitH3、髓过氧化物酶(MPO)的表达量。结果DOX组小鼠血清CK、CK-MB水平明显高于对照组和LIDO+DOX组小鼠(P<0.05)。ELISA检测结果显示,DOX组与LIDO+DOX组小鼠血浆MPO-DNA、CitH3和cf-DNA水平明显高于对照组(P<0.05),但LIDO+DOX组小鼠血浆MPO-DNA、CitH3和cf-DNA水平明显低于DOX组(P<0.05)。免疫荧光法检测结果发现,DOX组小鼠心肌组织中MPO和CitH3表达量明显高于对照组和LIDO+DOX组(P<0.05)。结论利多卡因可能是通过抑制NETs的表达来缓解阿霉素引起的心脏毒性。

载阿霉素纳米粒温敏凝胶的制备及评价

目的 对制备出可用于肝动脉化疗栓塞(TACE)的载阿霉素纳米粒温敏凝胶(DOX-NPs-Gel)复合体系的相关特性进行评价。方法 以乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体,采用复乳法制备载阿霉素纳米粒(DOX-NPs),考察其外观、粒径、PDI和Zeta电位,经冷冻干燥得DOX-NPs冻干粉,将其分散于壳聚糖(CS)/β-甘油磷酸(β-GP)温敏凝胶(Gel),制得DOX-NPs-Gel;采用倒瓶法考察Gel、DOX-Gel、空白-NPs-Gel及DOX-NPs-Gel在37℃下的胶凝化时间及胶凝温度;扫描电镜观察微观结构;通过兔耳中动脉栓塞实验考察了空白-NPs-Gel的栓塞性能;通过在皮下注射空白-NPs-Gel于不同时间脱颈死小鼠,剥离出空白-NPs-Gel,测量其大小及质量,评价其吸收特性;采用动态膜透析法考察DOX、DOX-NPs、DOX-Gel的体外释放;采用无膜溶出法考察DOX-NPs-Gel的体外释放。结果 制备出的DOX-NPs形态规则,粒径为(186.68±5.99)nm,多分散系数(PDI)为(0.17±0.01),Zeta电位为(-23.33±1.54)mV,包封率和载药量分别为(77.10±4.46)%和(2.64±0.19)%;DOX-NPs-Gel 37℃下胶凝化时间为(165±15)s,胶凝化温度为(34.67±0.47)℃,冻干后其微观结构为整齐紧密的多孔结构;该复合体系可顺利通过微导管注射,可栓塞兔耳中动脉,且在皮下可被缓慢吸收;体外释放结果显示,第7天时DOX-NPs-Gel中DOX和DOX-NPs的释放率分别为(6.15±0.19)%和(47.25±5.11)%。结论 本研究制备的DOX-NPs-Gel在体温下可快速胶凝、可栓塞血管和皮下吸收,能够缓慢释放DOX-NPs。

葛根素通过AMPK/ASMase激活自噬减轻阿霉素诱导的心肌细胞毒性

目的探讨葛根素减轻阿霉素诱导的心肌细胞毒性的机制。方法将对数生长期的细胞分为正常对照组、模型组、阳性对照卡托普利组(1 mmol·L^(-1))及葛根素低(20 mmol·L^(-1))、中(40 mmol·L^(-1))、高(80 mmol·L^(-1))剂量组。除正常对照组外每组加入阿霉素5 mmol·L^(-1)共同孵育。通过CCK-8法和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞活力,ROS探针检测ROS产生水平;HBAD-mcherry-EGFP-LC3腺病毒转染检测自噬流;Western Blot法检测Beclin-1、LC3、p62、p-AMPKα、AMPKα蛋白表达水平;溶酶体探针检测溶酶体功能;免疫荧光检测酸性鞘磷脂酶(ASMase)和溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)相对荧光强度和共定位程度;分子对接分析预测葛根素与ASMase的结合能力。基因富集分析揭示差异表达基因。结果与正常对照组比较,模型组细胞活力降低(P<0.01),LDH和ROS的释放水平升高(P<0.05,P<0.01),自噬小体数量增加(P<0.01)而自噬溶酶体数量减少(P<0.05),Beclin-1蛋白表达及LC3-II/LC3-I比值下降(P<0.01),p62蛋白表达升高(P<0.01),溶酶体荧光强度降低(P<0.01),ASMase的荧光强度升高(P<0.01),ASMase与LAMP1的免疫荧光共定位现象增加(P<0.01),p-AMPKα/AMPKα蛋白表达比值下降(P<0.05)。与模型组比较,葛根素高剂量组细胞活力回升(P<0.05),葛根素中、高剂量组LDH水平呈现下降趋势(P<0.05),葛根素低、中、高剂量组ROS水平呈现下降趋势(P<0.01),葛根素高剂量组自噬小体数量减少(P<0.01),葛根素低、中、高剂量组自噬溶酶体数量增多(P<0.05,P<0.01),葛根素高剂量组Beclin-1蛋白表达比值上升(P<0.05),LC3-II/LC3-I蛋白表达比值上升,p62蛋白表达下降(P<0.01),葛根素低、中、高剂量组溶酶体荧光强度升高(P<0.05,P<0.01),葛根素中、高剂量组ASMase荧光强度降低(P<0.05),ASMase与LAMP1的免疫荧光共定位现象减少(P<0.01),p-AMPKα/AMPKα蛋白表达比值上升(P<0.01)。葛根素与ASMase分子对接分析结合能是-8.6 kcal·mol^(-1)。基因富集分析显示阿霉素诱导的心脏毒性模型差异基因与细胞凋亡、自噬和溶酶体功能有关。结论葛根素可以通过AMPK/ASMase调控自噬,恢复自噬通量,减轻阿霉素诱导的心肌细胞毒性,保护心肌细胞。

阿霉素心脏毒性的中药防治用药分析及证素实证研究

目的基于阿霉素心脏毒性中药防治用药分析,在动物实验上进行阿霉素心脏毒性证素验证,为临床中药防治、警戒阿霉素心脏毒性提供参考。方法检索中国知网、万方数据、维普网中自建库起至2024年3月1日中药防治阿霉素心脏毒性相关文献,分析其用药规律,并以阿霉素每3 d腹腔注射3.5 mg·kg^(-1)建立阿霉素心脏毒性大鼠模型,观察其证素表现。结果在阿霉素心脏毒性中药防治用药分析中共纳入104味中药,高频药物有黄芪、甘草、麦冬、人参、附子、丹参等。药物功效以补虚为主,活血化瘀为辅,佐以利湿化浊、清热药等。证素实证研究中,阿霉素心脏毒性大鼠较正常组大鼠出现了毛色污秽、掉毛、便溏、瘀血、精神萎靡、倦怠、舌色暗淡表现,血清中抗利尿激素、醛固酮、抗凝血酶Ⅲ含量显著下降,D-二聚体含量显著上升,体现了“虚”“瘀”“湿”的病机特点。结论防范阿霉素心脏毒性发生可从补虚扶正、活血化瘀、利湿化浊入手,为阿霉素心脏毒性的防治提供了方向。