心脏成纤维细胞释放的IL-6在阿霉素致SD乳鼠心肌细胞损伤中的作用研究

目的:探讨阿霉素/多柔比星(doxorubicin,DOX)刺激后,SD乳鼠心脏组织中白细胞介素6(inter‐leukin-6,IL-6)的细胞来源,并初步探讨IL-6在DOX引起SD乳鼠心肌损伤中发挥的作用及机制。方法:原代培养SD乳鼠的心脏成纤维细胞和心肌细胞,CCK-8法检测DOX对心脏成纤维细胞和心肌细胞的毒性;ELISA检测心脏成纤维细胞和心肌细胞上清中炎症因子IL-6含量;鬼笔环肽染色观察心肌细胞骨架F-肌动蛋白的改变;Transwell小室共培养SD乳鼠成纤维细胞和心肌细胞,进行如下分组:心肌细胞对照组、DOX处理心肌细胞组、共培养细胞对照组和DOX处理共培养细胞组,Western blot检测各组心肌细胞心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠尿肽(brain natriuretic peptide,BNP)和肌球蛋白重链7(myosin heavy chain 7,MYH7)的蛋白水平;使用IL-6抗体后,进行如下分组:共培养细胞对照组、DOX处理共培养细胞组、IL-6处理共培养细胞对照组和DOX+IL-6处理共培养细胞组,Western blot检测共培养组中心肌细胞ANP和MYH7的蛋白水平。结果:(1)与对照组比较,DOX显著抑制乳鼠心脏成纤维细胞增殖,亦可导致心肌细胞损伤(P<0.01);(2)DOX刺激48 h后,心脏成纤维细胞释放IL-6显著增加(P<0.01),而心肌细胞释放IL-6与对照组相比,无显著差异(P>0.05);(3)DOX刺激的心脏成纤维细胞条件培养液作用于心肌细胞后,心肌细胞骨架蛋白肌丝排列出现紊乱、断裂;(4)DOX刺激后,共培养组心肌细胞ANP、BNP和MYH7的蛋白水平增加,与单独心肌细胞组相比,具有统计学意义(P<0.01);(5)共培养组加入IL-6抗体后,再给予DOX刺激,其ANP和MYH7的表达均显著下降(P<0.05)。结论:DOX刺激原代细胞培养的SD乳鼠心脏成纤维细胞分泌产生大量的IL-6,而后通过旁分泌引起心肌细胞骨架蛋白改变、促进心肌细胞肥大,进而导致心肌损伤。

活性维生素D_3对阿霉素肾病大鼠CD2AP的影响

目的探讨活性维生素D类似物骨化三醇对阿霉素(ADR)肾病大鼠足细胞CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响。方法随机法选取60只Sprasue-Dawley大鼠,单次尾静脉注射ADR 7.5 mg/kg复制ADR肾病模型。2周后检测24 h尿蛋白、血清总蛋白(TP)、血浆白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、血清肌酐(Scr)水平。将模型大鼠随机均分为模型组(ADR)、治疗组(ADR+Vit D_3),另取30只大鼠作为对照组。于模型复制成功后2、4、6、8和10周检测24 h尿蛋白。取大鼠肾组织,用Masson染色观察肾小球的病理损伤,透射电子显微镜观察足细胞超微结构,免疫组织化学染色和Western blotting检测CD2AP定位和表达。结果 2周后3组24 h尿蛋白、TP、ALB、Scr、TC比较,差异有统计学意义(P <0.05),提示模型复制成功。大鼠24 h尿蛋白随治疗周数延长而减少(P<0.05)。组织病理学结果显示,模型组肾组织大量纤维增生,肾小管扩张和肾间质纤维化。透射电子显微镜结果显示,模型组肾足细胞结构损伤,足突广泛融合,核畸形,脂滴聚集;治疗组较模型组有所改善。免疫组织化学染色结果显示,模型组CD2AP表达较低,活性维生素D_3治疗后阳性表达面积增加(P <0.05)。各组大鼠CD2AP表达水平比较,差异有统计学意义(P <0.05);模型组降低,治疗组随时间延长表达增强(P<0.05)。结论活性维生素D_3通过上调CD2AP表达,减轻足细胞的损伤,抑制肾组织病理纤维化增生,发挥肾保护功能,减少蛋白尿的产生。

霉酚酸酯对阿霉素肾病大鼠的保护作用及其机制研究

目的探讨霉酚酸酯(MMF)对阿霉素肾病(ADN)大鼠足细胞的保护作用,以及对肾组织micro RNAs(mi RNAs)表达的影响。方法将60只SD大鼠随机分为空白对照组(CTL组)、ADN模型组(ADN组)和MMF干预组(MMF组),ADN组和MMF组大鼠一次性尾静脉注射阿霉素6.5 mg/kg,7 d后开始灌胃给药。28 d后处死所有受试大鼠,检测24 h尿蛋白量、血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)水平,以及肾组织病理学变化和足细胞凋亡情况;并借助基因芯片技术,分析肾组织mi RNAs表达的差异性;采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测肾组织mi R-23a、mi R-300-3p、mi R-24和mi R-300-3c的表达。结果 3组大鼠不同时间点体重、尿蛋白含量比较,差异有统计学意义(P<0.05);与CTL组大鼠比较,ADN组大鼠体重减轻(P <0.05),肾组织损伤明显(P <0.05),尿蛋白、BUN、Scr水平升高(P <0.05),足细胞凋亡率较高(P <0.05);而MMF对ADN组大鼠上述变化有改善作用,但是与CTL组大鼠比较,差异有统计学意义(P <0.05)。经基因芯片筛查和q RT-PCR反应,ADN组大鼠肾组织rno-mi R-23a和rno-mi R-300-3p表达较CTL组上调(P<0.05),rno-mi R-24、rno-mi R-300-3c表达下调(P<0.05);而MMF组大鼠肾组织中rno-mi R-24、rno-mi R-300-3c表达较ADN组上调(P<0.05),rno-mi R-23a和rno-mi R-300-3p表达下调(P <0.05)。结论MMF具有抑制ADN大鼠肾组织足细胞损伤和蛋白尿生成的作用,其机制可能是对19号和6号染色体部分mi RNAs有干预作用。

阿霉素促进心脏成纤维细胞分泌IL-1β和Ⅰ型胶原蛋白的机制研究

目的:观察阿霉素/多柔比星(DOX)对心脏成纤维细胞产生炎症细胞因子和胶原蛋白的影响及其机制。方法:体外培养SD大鼠乳鼠心脏成纤维细胞,免疫荧光染色标记波形蛋白鉴定细胞;CCK-8法检测DOX对心脏成纤维细胞的毒性;annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞上清中炎症因子含量;免疫荧光标记法检测心脏成纤维细胞肌化和线粒体活性氧簇(mROS)释放的情况;Western blot法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化相关蛋白的水平。结果:(1)与对照组比较,DOX显著抑制心脏成纤维细胞增殖(P<0.05),但对细胞凋亡并没有显著影响(P>0.05);(2)DOX促进心脏成纤维细胞释放白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6(P<0.05);(3)DOX促进心脏成纤维细胞肌化,与对照组比较,DOX处理组细胞α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和转化生长因子β表达明显增加(P<0.05);(4)与对照组比较,心脏成纤维细胞在DOX的作用下,mROS、NLRP3及cleaved caspase-1水平均明显增加(P<0.05)。结论:DOX通过促进mROS释放及NLRP3炎症小体活化而促进心脏成纤维细胞分泌IL-1β和Ⅰ型胶原蛋白。