NVP-BEZ235逆转伯基特淋巴瘤RAJI细胞阿霉素耐药的研究

目的:研究NVP-BEZ23对耐阿霉素细胞株RAJI/DOX的逆转耐药作用。方法:利用浓度梯度法诱导耐阿霉素细胞株RAJI/DOX;Western blot测定各组细胞Pgp、p-AKT、p-mTOR蛋白水平;MTT法检测细胞抑制率,SPSS软件测定IC50。结果:成功诱导出耐阿霉素细胞株RAJI/DOX。耐阿霉素细胞株RAJI/DOX中Pgp、p-AKT、p-mTOR蛋白水平高于亲本细胞RAJI。NVP-BEZ235可引起耐阿霉素细胞株RAJI/DOX中p-AKT、p-mTOR蛋白水平下降。NVP-BEZ235能够抑制耐阿霉素细胞株RAJI/DOX增殖,与阿霉素具有协同作用。结论:PI3K/AKT/mTOR通道在耐阿霉素伯基特淋巴瘤细胞中进一步活化;NVP-BEZ235通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通道活化,能够与阿霉素协同抑制伯基特淋巴瘤耐药细胞,逆转伯基特淋巴瘤耐药细胞对阿霉素的耐药性。

GSTP1通过调控STAT3信号通路促进乳腺癌细胞增殖与阿霉素耐药

目的 探讨谷胱甘肽S-转移酶P1(GSTP1)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与阿霉素耐药性的影响及其作用机制。方法 Western blotting检测野生型乳腺癌细胞MCF-7和阿霉素耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR中的GSTP1表达量,通过在MCF-7细胞中转染Flag-GSTP1质粒过表达GSTP1,在MCF-7/ADR细胞中转染GSTP1敲低慢病毒(shGSTP1)干扰GSTP1表达;平板克隆形成实验、CCK-8法和流式细胞术检测转染后乳腺癌细胞的增殖能力、阿霉素耐药性及凋亡水平的变化。Western blotting检测GSTP1表达水平的变化对STAT3通路激活的影响。结果 GSTP1在MCF-7细胞中表达量极低,且显著低于MCF-7/ADR细胞系。GSTP1过表达的MCF-7/ADR细胞克隆形成数量显著多于野生型MCF-7细胞(P<0.05)。过表达GSTP1显著提升了MCF-7细胞的增殖能力,而在MCF-7/ADR细胞系干扰GSTP1表达水平后显著抑制了细胞增殖能力(P<0.05)。CCK-8结果显示,在0.1、1、10、50μmol/ml不同浓度的阿霉素处理下,GSTP1表达水平与MCF-7细胞对阿霉素的耐药性呈正相关(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,GSTP1过表达组(Flag-GSTP1)和对照组(Flag)的凋亡率分别为(11.41±1.16)%和(21.1±1.72)%,GSTP1过表达显著抑制了阿霉素诱导的细胞凋亡(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,GSTP1的过表达激活了STAT3信号通路,同时在MCF-7/ADR细胞系中抑制STAT3显著降低了GSTP1的表达水平(P<0.05)。结论 GSTP1通过上调STAT3表达调节乳腺癌细胞MCF-7的增殖能力和对阿霉素的耐药性。

SIX2在骨肉瘤组织中表达及其对细胞血管生成与阿霉素耐药逆转的影响

目的 探究SIX2在骨肉瘤组织中表达及其对细胞血管生成与阿霉素耐药逆转的影响。方法 收集2019年3月—2021年12月我院行骨肉瘤手术切除的105例患者的组织标本,免疫组化检测骨肉瘤组织中SIX2表达和微血管密度(MVD)计数;检测骨肉瘤组织中SIX2 mRNA表达水平。将人骨肉瘤细胞系MG-63分为MG-63组、si-NC A组、si-SIX2 A组,将通过阿霉素耐药得到的骨肉瘤阿霉素耐药细胞株MG-63/R分为MG-63/R组、si-NC B组和si-SIX2 B组。分别用MTT法、克隆实验、流式细胞术及Transwell法检测细胞耐药性、细胞增殖、细胞凋亡和细胞侵袭。结果 在骨肉瘤组织中,SIX2阳性表达会随着MVD值升高而增加(P<0.05)。骨肉瘤组织中SIX2阳性表达与TNM分期、软组织浸润和淋巴结远处转移相关(P>0.05)。与MG-63组相比,si-SIX A组细胞的血管形成能力明显降低(P<0.05);与MG-63/R组相比,si-SIX2 B组细胞IC50、细胞克隆数和细胞侵袭能力均显著降低,细胞凋亡能力明显增加,细胞耐药指数逆转倍数为2.51倍(P<0.05)。结论 SIX2在骨肉瘤组织中呈高表达,且随着SIX2表达的升高肿瘤血管生成能力也增加;抑制SIX2表达可有效抑制骨肉瘤组织的生成,逆转骨肉瘤细胞阿霉素耐药。

lncRNA FOXC2-AS1逆转骨肉瘤细胞对阿霉素耐药性的影响

目的探讨沉默长链非编码RNA FOXC2-AS1(lncRNA FOXC2-AS1)对人骨肉瘤细胞阿霉素(ADM)耐药性的影响及可能作用机制。方法采用ADM长期浓度梯度递增法体外建立ADM耐药细胞株MG-63/ADR,利用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测MG-63和MG-63/ADR细胞中FOXC2-AS1的表达水平,采用阴性对照序列和si-FOXC2-AS1序列转染MG-63/ADR细胞作为si-NC组和si-FOXC2-AS1组,另设空白对照组。MTT实验和平板克隆形成实验检测各组细胞对ADM的敏感性,并计算半数抑制浓度(IC50)。Western blotting法检测各组细胞中Notch-1及下游靶因子Hes-1、Hey-1、Hey-2蛋白水平。结果体外成功建立MG-63/ADR耐药细胞株,1、5、25、125、625、3125、15 625 ng/ml ADM对MG-63/ADR细胞的增殖抑制率分别为(5.90±0.48)%、(9.86±0.85)%、(16.75±2.21)%、(29.84±2.98)%、(50.45±4.96)%、(54.82±5.33)%和(57.69±5.76)%,明显低于MG-63细胞。ADM对MG-63和MG-63/ADR的IC50分别为106.55 ng/ml和685.47 ng/ml。MG-63/ADR耐药指数为6.43。si-FOXC2-AS1组FOXC2-AS1的相对表达量为0.44±0.12,低于空白对照组(1.43±0.22)和si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。1、5、25、125、625、3125和15 625 ng/ml ADM对si-FOXC2-AS1组MG-63/ADR细胞的增殖抑制率分别为(6.36±0.40)%、(13.41±1.05)%、(32.45±2.69)%、(49.73±4.14)%、(64.82±4.67)%、(77.56±5.79)%和(79.50±5.62)%,明显高于空白对照组。转染si-FOXC2-AS1后MG-63/ADR细胞对ADM的敏感性增加了4.25倍。si-FOXC2-AS1组经ADM(100 ng/ml)作用96 h后,MG-63/ADR细胞克隆形成率为(27.64±7.28)%,低于空白对照组的(76.07±17.91)%和si-NC组的(69.83±15.71)%,差异有统计学意义(P<0.05)。si-FOXC2-AS1组MG-63/ADR细胞中Notch-1及其下游分子Hes-1、Hey-1、Hey-2蛋白的表达水平分别为0.67±0.15、0.52±0.10、0.45±0.12和0.38±0.11,均低于空白对照组和si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论沉默lncRNA FOXC2-AS1表达通过抑制Notch-1信号通路的活化,进而增加MG-63/ADR细胞对ADM的敏感性。

基于网络药理学技术探讨化痰散结方对阿霉素耐药乳腺癌PI3K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白的影响

目的：基于网络药理学建立多柔比星/阿霉素耐药相关的蛋白质相互作用网络并通体外实验研究探究化痰散结方逆转耐药的相关分子学机制。方法：筛选pubmed中人类OMMIM遗传数据库的乳腺癌多柔比星/阿霉素耐药相关基因,应用STRING软件进行文本挖掘并建立蛋白质相互作用网络;将互作数据读入Cytoscape3.4.0,分别应用插件JEPETTO 1.3.1和MCODE1.4.2实现拓扑分析和聚类分析;使用Cytoscape中的插件Clusterviz进一步挖掘网络中可能包含的分子复合物;将所得复合物导入DAVID,富集其中的分子复合物通路。针采用MTT法、Western Blot法对细胞及关键通路进行体外实验研究,进而观察化痰散结方对MCF-7/ADR细胞增殖及相关信号通路表达的影响。结果：乳腺癌多柔比星/阿霉素耐药蛋白质网络是一个多基因构成的网络并且由多信号通路协同发挥调节作用,并非简单由单基因或信号通路调控;在所得相互作用网络中,PI3K-Akt-mTOR很可能作为＂关键节点＂发挥调控作用;化痰散结方含药血清能够抑制MCF-7/ADR细胞的增值,其内在分子学机制可能与抑制PI3K-Akt-mTOR通路的表达有关。结论：化痰散结方能够逆转人乳腺癌多柔比星/阿霉素耐药,其耐药相关蛋白质相互作用网络复杂,其中PI3K-Akt-mTOR很可能是其中的关键调控点,而化痰散结方抑制MCF-7/ADR细胞增殖的作用机制之一是抑制PI3K-Akt-mTOR通路的表达。

MiR-186-5p通过靶向调控RAB2A在乳腺癌细胞阿霉素耐药性中的逆转作用机制

目的探讨miRNA-186-5p在乳腺癌细胞阿霉素耐药性逆转作用中的分子机制。方法采用阿霉素诱导人乳腺癌细胞系MCF-7,建立阿霉素耐药性细胞株,命名为MCF-7/ADR;采用双荧光素酶实验检测miR-186-5p与RAB2A的靶向结合情况;采用qRT-PCR和Western blot分别检测细胞中miR-186-5p、RAB2A mRNA的表达及RAB2A蛋白的表达情况;特异性上调MCF-7/ADR中的miR-186-5p,下调MCF-7中的miR-186-5p后,采用CCK-8和Western blot分别检测乳腺癌细胞增殖情况以及RAB2A蛋白的表达;采用Western blot和CCK-8分别检测共转染后,细胞增殖情况的变化及PI3K/Akt信号通路的激活情况。结果双荧光素酶实验结果显示,RAB2A是miR-186-5p的直接靶点;qRT-PCR结果显示,在MCF-7/ADR细胞中miR-186-5p mRNA表达明显下调,而RAB2A mRNA表达没有明显变化,RAB2A的蛋白表达明显上调。特异性上调MCF-7/ADR中的miR-186-5p,其增殖能力明显下降,RAB2A蛋白的表达明显下调;下调MCF-7中的miR-186-5p,其增殖能力明显增加,RAB2A蛋白的表达明显上调。Western blot和CCK-8结果显示,过表达miR-186-5p使PI3K/Akt信号通路表达明显减弱,且上调RAB2A逆转了上调miR-186-5p所致的增殖能力的减弱。结论 miR-186-5p通过靶向调控RAB2A,经PI3K/Akt信号通路调控乳腺癌细胞的阿霉素耐药和增殖。

基于Notch 1/NF-κB/STAT3通路探讨塞来昔布逆转NK/T细胞淋巴瘤细胞阿霉素耐药的作用机制

目的:观察塞来昔布(celecoxib)对淋巴瘤细胞SNK6阿霉素(adriamycin)耐药性的逆转及作用机制。方法:不同浓度的塞来昔布(10、20、40、60、80、100μmol/L)作用于SNK6和SNK6/ADR细胞,噻唑蓝比色法(MTT)检测塞来昔布对SNK6及SNK6/ADR细胞的生长抑制率,筛选塞来昔布对SNK6/ADR的低毒浓度,计算半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)值;采用低毒浓度塞来昔布联合不同浓度的阿霉素处理SNK6/ADR后,测得阿霉素联合塞来昔布后的IC50,并计算逆转倍数;选择低毒浓度塞来昔布联合阿霉素处理SNK6/ADR细胞后,应用流式细胞术测细胞凋亡情况;药物蓄积实验检测罗丹明123蓄积情况;用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测Notch 1、核转录因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、信号转导子和转录激活子(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)mRNA表达水平;用蛋白质印迹法(Western blot)检测Notch 1、NF-κB、STAT3、P-gp蛋白表达水平。结果:不同浓度塞来昔布可明显抑制SNK6、SNK6/ADR细胞的增殖,且其抑制作用随着塞来昔布浓度的增大而增加。塞来昔布对SNK6细胞的IC50为(57.54±6.89)μg/mL,对SNK6/ADR细胞的IC50为(43.39±4.38)μg/mL,阿霉素对SNK6/ADR细胞的IC50为(7.34±0.56)μg/mL,与10μmol/L塞来昔布联合作用后,阿霉素对SNK6/ADR细胞的IC50为(3.51±0.25)μg/mL(P<0.01),逆转倍数为2.09;阿霉素与10μmol/L塞来昔布联合作用后,与阿霉素组比较,SNK6/ADR细胞凋亡率显著增加(P<0.01);细胞内罗丹明123的蓄积量显著增加(P<0.01);SNK6/ADR细胞内P-gp蛋白表达显著降低(P<0.01);SNK6/ADR细胞内Notch 1、NF-κB、STAT3 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:塞来昔布可诱导NK/T细胞淋巴瘤细胞凋亡及逆转其阿霉素耐药,其可能是通过调节Notch 1/NF-κB/STAT3信号通路来实现的。

解毒胶囊干预乳腺癌阿霉素耐药PTEN-PI3K/AKT信号通路的进展及机制

该文对解毒胶囊治疗乳腺癌的机制进行了研究,主要从阿霉素耐药PTEN-PI3K/AKT信号通路进行分析探讨,综述了解毒胶囊对乳腺癌阿霉素耐药的近况以及研究进展,说明了解毒胶囊干预乳腺癌阿霉素耐药具有很好的发展前景。

胡椒碱对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM细胞的逆转作用

目的探讨胡椒碱对人乳腺癌阿霉素(ADM)耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转作用及其机制。方法采用CCK-8法观察胡椒碱联合阿霉素(ADM)对乳腺癌耐药株MCF-7/ADM细胞生长增殖的影响;应用免疫印迹技术(Western-blot)测定胡椒碱联合ADM对MCF-7/ADM细胞表面P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。结果 60,80,100μmol/L胡椒碱试验组细胞耐药逆转倍数分别为1.62,2.08,3.78倍,差异有统计学意义(P<0.05)。胡椒碱能显著抑制MCF-7/ADM细胞膜P-gp蛋白的表达,其作用随浓度的增加而增强。结论胡椒碱与ADM共同作用于MCF-7/ADM细胞,可使细胞对ADM的敏感性增强。胡椒碱具有部分逆转MCF-7/ADM细胞耐药的作用,其逆转作用机制可能与通过下调P-gp的表达有关。

miR-490-3p逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素耐药性的影响

目的探讨miR-490-3p在阿霉素（ADM）耐药乳腺癌细胞系MCF-7/ADM中的表达情况及其对MCF-7/ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法以野生型人乳腺癌细胞系MCF-7及其耐药型细胞系MCF-7/ADM为研究对象,用实时荧光定量PCR（q PCR）比较两种细胞中miR-490-3p的表达水平,将miR-490-3p的过表达载体pc DNA3.1（＋）-miR-490-3p瞬时转染至MCF-7/ADM细胞（过表达组）后采用q PCR检测转染效果,同时设pc DNA3.1（-）空载体对照组和空白对照组;采用MTT法测定转染pc DNA3.1（＋）-miR-490-3p对各组MCF-7/ADM细胞增殖能力的影响,测定ADM对MCF-7/ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度（IC50）及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化;分别于瞬时转染48 h后用Annexin V/FITC流式细胞术检测各组MCF-7/ADM细胞的凋亡率,Western blotting检测耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）,乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达,荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度,流式细胞仪检测P-gp活性。结果MCF-7/ADM细胞中miR-490-3p的表达水平为0.24±0.07,显著低于野生型MCF-7细胞的1.02±0.03（P〈0.05）;过表达组瞬时转染24~96 h的miR-490-3p水平持续升高,均高于空载体对照组和空白对照组（P〈0.05）;过表达组的增殖抑制率随转染时间的延长而增加,转染24、48、72和96 h的增殖抑制率依次为（17.52±1.87）%、（31.67±2.79）%、（45.09±1.88）%和（61.82±2.52）%,高于空载体对照组（P〈0.05）;ADM对过表达组的IC50值为（11.27±2.34）μg/ml,低于空白对照组的和空载体对照组（P〈0.05）,且过表达组相对于空白对照组和空载体对照组的逆转倍数分别为3.35倍和3.39倍;与其余两组相比,过表达组的MCF-7/ADM细胞早、晚期凋亡率和细胞内药物浓度均升高,P-gp、BCRP和MRP1表达及P-gp活性均降低,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论上调miR-490-3p可逆转MCF-7/ADM细胞对ADM的耐药性,可能通过降低耐药蛋白表达及抑制P-gp活性有关,且升高其水平可抑制细胞增殖并诱导凋亡。

hnRNP K调控细胞自噬参与急性髓系白血病阿霉素耐药研究

目的:探索核内不均一的核糖核蛋白K(hnRNP K)调控细胞自噬参与急性髓系白血病耐药机制,为白血病治疗提供新的分子标志物。方法:应用荧光定量PCR技术,分别从临床标本及细胞株水平验证hnRNP K与髓系白血病耐药的关系;利用RNA干扰技术调节hnRNP K的表达水平,Western blot方法检测细胞自噬相关蛋白LC3I/Ⅱ表达变化,并进一步检测hnRNP K调控前后细胞对化疗药物(阿霉素)的敏感性。结果:在骨髓未缓解及复发的原代细胞及耐药细胞株中,hnRNP K的表达水平明显增高,而细胞自噬相关蛋白LC3I/Ⅱ表达水平也明显升高,将hnRNP K的表达水平降低后,LC3I/Ⅱ蛋白水平亦降低,而细胞对于阿霉素的敏感性可以恢复。结论:hnRNP K可能通过调控细胞自噬参与急性髓系白血病阿霉素耐药的形成。

二氢杨梅素对K562/A02细胞阿霉素耐药性的逆转作用

目的:探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对人慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02细胞对阿霉素(adriamycia,ADM)耐药的逆转作用及可能机制。方法:用DMY(5、10、20、40、60、80和100 mg/L)和ADM((0.05-100 mg/L)处理K562和K562/A02细胞48 h,采用MTT法检测细胞活力及DMY对K562/A02细胞ADM耐药的逆转效应,流式细胞术检测细胞内阿霉素的相对浓度,Western blot检测耐药相关基因的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance related protein 1,MRP1)、谷胱甘肽转移酶π(glutathione transferaseπ,GSTπ)和BCL-2蛋白表达。结果:DM Y能抑制K562和K562/A02细胞的增殖且呈剂量依赖效应(r1=0.37,r2=0.38),IC_(50)分别为71.23±6.51和72.88±5.49 mg/L。5、10和20 mg/L为DMY的低细胞毒性剂量。DMY(5、10和20 mg/L)增敏K562细胞和K562/A02细胞对ADM耐药性且呈剂量依赖效应(r1=-0.62,r2=-0.71),耐药逆转倍数介于1.38-28.59之间。DM Y(5,10和20 mg/L)增加K562/A02细胞内ADM的浓度也呈剂量依赖效应(r=0.34)。与对照组比较,DMY(5,10和20 mg/L)均显著降低了K562/A02细胞中Pgp、M RP1、GSTπ和BCL-2蛋白表达,呈剂量依赖性(r1=-0.41,r2=-0.37,r3=-0.58,r4=-0.46)。与ADM组比较,DM Y(5,10和20 mg/L)+ADM组P-gp、M RP1、GSTπ和BCL-2蛋白表达均显著降低(r1=-0.55,r2=-0.41,r3=-0.38,r4=-0.44)。结论:DM Y可以逆转K562/A02细胞对ADM的耐药性,其作用机制可能与下调耐药相关基因P-gp、MRP1、GSTπ和BCL-2的表达有关。

雷公藤红素对阿霉素耐药乳腺癌细胞生长的抑制作用研究

目的研究雷公藤红素对人阿霉素耐药MCF-7/ADR乳腺癌细胞生长的作用。方法采用MTT试验检测MCF-7/ADR细胞对阿霉素的耐药情况以及雷公藤红素对MCF-7/ADR细胞生长的影响;采用Annexin VFITC/PI双染试验分析雷公藤红素对MCF-7/ADR耐药细胞凋亡的诱导作用;应用流式细胞周期分析检测雷公藤红素对MCF-7/ADR耐药细胞周期的影响。结果 MCF-7/ADR细胞对阿霉素耐药指数达14.54;而雷公藤红素能有效抑制阿霉素耐药细胞MCF-7/ADR的生长,并呈现浓度依赖性,作用48 h的IC50是1.04μmol/L,MCF-7/ADR对雷公藤红素的耐药指数仅为0.87。2μmol/L雷公藤红素作用8 h后,Annexin V-FITC染色阳性的MCF-7/ADR细胞比例较对照显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在1μmol/L雷公藤红素作用24 h后,G1期细胞比例由对照(59.22±3.78)%升高至(77.44±4.21)%,而S期细胞比例由对照(37.51±2.91)%降至(19.65±2.25)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论雷公藤红素能激活MCF-7/ADR细胞凋亡的发生,并诱导MCF-7/ADR发生G1/S细胞周期阻滞,从而对阿霉素耐药MCF-7/ADR细胞的生长发挥高效抑制作用。

Salinomycin对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/DOX的增殖抑制作用及机制

目的本研究旨在探讨Salinomycin对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/DOX增殖和凋亡的影响及可能作用机制。方法 MTS实验检测Salinomycin对MCF-7/DOX细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI染色检测Salinomycin对MCF-7/DOX耐药细胞凋亡的影响;DCFH-DA染色检测Salinomycin对MCF-7/DOX耐药细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生的影响;JC-1法测定细胞线粒体膜电位;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、caspase-3和caspase-9的表达变化。结果 Salinomycin能明显抑制MCF-7/DOX耐药细胞增殖,且具有浓度依赖性;流式分析发现Salinomycin能够诱导MCF-7/DOX细胞凋亡,增加细胞内ROS水平,降低细胞线粒体膜电位;与对照组相比较,Salinomycin处理明显抑制BCL-2的表达,上调BAX、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白表达;抗氧化剂N-acetylcysteine(NAC)则逆转上述作用。结论 Salinomycin能够诱导MCF-7/DOX细胞凋亡,其机制可能与Salinomycin诱导ROS的产生,激活线粒体凋亡途径有关。

JNJ-7706621对阿霉素耐药乳腺癌细胞生长的抑制作用研究

目的研究JNJ-7706621对人阿霉素耐药MCF-7/ADR乳腺癌细胞生长的作用。方法采用MTT试验检测JNJ-7706621对MCF-7/ADR耐药细胞生长的影响;采用TUNEL染色试验分析JNJ-7706621对MCF-7/ADR耐药细胞凋亡的激活作用;Caspase酶活性检测分析JNJ-7706621处理后,MCF-7/ADR细胞中Caspase-8、Caspase-9活化程度;应用流式细胞周期分析检测JNJ-7706621对MCF-7/ADR耐药细胞周期的影响。结果 JNJ-7706621能有效抑制阿霉素耐药细胞MCF-7/ADR的生长,并呈现明显的浓度依赖性,作用48 h的IC50仅为0.83μmol/L。2μmol/L JNJ-7706621作用24 h后,TUNEL染色阳性的MCF-7/ADR细胞比率较对照组显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);MCF-7/ADR细胞中Caspase-8、-9酶活性均显著升高,差异亦具有统计学意义(P<0.05)。在1μmol/L JNJ-7706621作用24 h后,G2/M期细胞比率由对照(7.1±1.3)%升高至(23.8±3.1)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 JNJ-7706621能同时激活内外源性凋亡途径,诱导MCF-7/ADR细胞凋亡的发生,并将MCF-7/ADR细胞周期阻滞在G2/M期,从而对阿霉素耐药MCF-7/ADR细胞的生长发挥有效抑制作用。

抑制自噬对乳腺癌阿霉素耐药的逆转作用

目的探讨自噬在乳腺癌阿霉素耐药过程中发挥的作用。方法采用大剂量阿霉素间歇诱导MCF-7细胞;应用MTT法检测阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM的耐药指数;通过qRT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光法检测自噬表达;选用自噬抑制剂3-Methyladenine(3-MA)抑制细胞自噬,并检测MCF-7/ADM细胞株耐药性的逆转情况。结果乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM成功建立,MCF-7/ADM细胞对ADM有明显的耐药性,阿霉素抑制MCF-7和MCF-7/ADM细胞存活的IC50值分别为1.0 971μg/ml和175.8 921μg/ml,耐药倍数为160(P<0.01),且MCF-7/ADM细胞自噬表达升高,加入3-MA的实验组细胞耐药逆转倍数为1.16,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抑制自噬可部分逆转MCF-7/ADM细胞耐药。

枸橼相互作用的丝氨酸/苏氨酸激酶基因调控阿霉素耐药人肝癌细胞系SK-Hep1耐药性的机制

目的探讨枸橼相互作用的丝氨酸/苏氨酸激酶(CIT)对阿霉素(ADM)耐药肝癌细胞耐药性的调控作用及其机制。方法用脂质体将乱序无意义阴性序列(si-NC)、CIT小干扰RNA(si-CIT)转染至耐药细胞;Realtime PCR和Western blotting检测CIT基因、连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、B细胞淋巴瘤蛋白2(Bcl-2)、Bcl-2相关X基因(Bax)、细胞色素C(Cyt C)、磷酸酶基因诱导的假定激酶1(PINK1)、常染色体隐性遗传性青少年帕金森综合征致病基因(Parkin)和自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅰ/Ⅱ(LC3-Ⅰ/Ⅱ)的表达;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、流式细胞术和荧光探针(JC-10)染色法检测细胞的抑制率、凋亡和线粒体膜电位。结果耐药细胞中CIT基因表达高于正常细胞,敲减CIT可增强其对ADM的敏感性。敲减CIT促进耐药细胞凋亡和线粒体自噬能力,抑制细胞线粒体膜电位,并上调细胞Bax、PINK1、Parkin和LC3-Ⅰ/Ⅱ及胞质中Cyt C,下调细胞中Bcl-2和线粒体中Cyt C。结论CIT基因可通过线粒体途径的凋亡和自噬调节阿霉素耐药肝癌细胞的耐药性。

雷公藤甲素对人骨肉瘤细胞阿霉素耐药株的逆转作用及机制研究

目的:探讨雷公藤甲素(TPL)体外给药对人骨肉瘤细胞阿霉素(ADR)耐药株(U2OS/ADR)多药耐药(MDR)的逆转作用及可能机制。方法:使用人骨肉瘤细胞株U2OS,利用浓度递增法建立耐药骨肉瘤细胞U2OS/ADR模型。设置空白组、对照组、TPL组和维拉帕米阳性对照组(VER组)。CCK-8法测定TPL处理对U2OS/ADR细胞增殖和ADR敏感性的影响。以罗丹明123(Rh123)作为内标,采用流式细胞术评估细胞P-糖蛋白(P-gp)外排作用。实时定量PCR(qRT-PCR)检测TPL对MDR1基因转录的影响。Western blot检测TPL对磷酸化磷酸肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、MDR1和肺耐药相关蛋白(LRP)表达的影响。结果:与对照组相比,TPL组使ADR对U2OS/ADR细胞生长的抑制作用提高(P<0.05)。TPL组Rh123阳性信号计数高于对照组(P<0.001)。与对照组相比,TPL组MDR1、LRP、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平及MDR1基因mRNA水平下降(均P<0.05)。结论:TPL具有抑制U2OS/ADR细胞生长、提高U2OS对ADR敏感性的作用,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路活化、下调U2OS/ADR细胞MDR1和LRP基因表达、抑制P-gp对细胞毒物质的外排有关。

沉默ARHGDIB对乳腺癌细胞阿霉素耐药的影响

目的探讨沉默ARHGDIB对乳腺癌细胞阿霉素耐药的影响。方法应用MTT法检测阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR细胞活力以及耐药指数。采用qRT-PCR和Western blot法检测MCF-7和MCF-7/ADR细胞中ARHGDIB的表达。选用siRNA沉默ARHGDIB的表达,并检测MCF-7/ADR细胞株对化疗药物阿霉素的敏感性。结果阿霉素抑制MCF-7和MCF-7/ADR细胞存活的IC 50分别是32.35 μmol/L和1 533.33 μmol/L,耐药指数是47(P <0.01)。在乳腺癌的阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR中ARHGDIB的mRNA水平和蛋白水平均升高(P <0.01)。沉默ARHGDIB可导致MCF-7/ADR细胞阿霉素耐药性的降低(P <0.01)。结论沉默ARHGDIB可增强乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性,部分逆转乳腺癌细胞的耐药性。

线粒体转移引起肿瘤细胞阿霉素耐药的机制研究

目的探讨肿瘤细胞与成纤维细胞之间是否存在线粒体转移现象,研究发生线粒体转移后对肿瘤细胞抗药性的影响。方法分别采用荧光蛋白标记肿瘤细胞和成纤维细胞线粒体。采用激光共聚焦显微镜观察细胞和线粒体的形态。采用流式细胞仪分析并分选双阳性细胞群体。采用MTT法检测阿霉素对细胞的增殖抑制作用。结果成功构建HCT-15/GFP细胞和NIH3T3/mito-RFP细胞。从两种细胞共培养体系中,分选出GFP+/RFP+双阳性细胞,比率为3.32%±0.58%。HCT-15/GFP+/RFP+对阿霉素的敏感性较HCT-15/GFP显著下降,化疗抗性提高了3.18倍。结论成纤维细胞中的线粒体能向肿瘤细胞进行转移。发生线粒体转移的肿瘤细胞对阿霉素出现了耐药现象。这为阿霉素耐药提出了新的作用机制。