三七注射液对阿霉素肾纤维化大鼠TGF-β_1/P38MAPK信号通路的影响

目的观察三七注射液对阿霉素肾纤维化大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和P38 MAPK的影响。方法 120只Sprasue-Dawley大鼠随机分为5组:正常组(n=24)、假手术组(n=24)、模型组(n=24)、三七注射液组(n=24)和三七总皂苷组(n=24),12周后处死大鼠。免疫组化和Western blot观察大鼠肾组织TGF-β1和P38 MAPK蛋白的表达。结果正常组和假手术组大鼠肾小管可见极少量的TGF-β1和P38 MAPK阳性蛋白表达;而模型组大鼠肾组织TGF-β1和P38 MAPK阳性蛋白表达上调,与假手术组相比较,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组相比较,三七注射液组和三七总皂苷组大鼠肾组织,TGF-β1和P38 MAPK蛋白表达明显下调,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论三七注射液的肾保护作用可能与下调TGF-β1和P38 MAPK水平,抑制TGF-β1/P38 MAPK信号通路活化有关。

三七注射液对阿霉素肾纤维化大鼠ILK、MMP-7及肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察三七注射液对阿霉素肾纤维化大鼠肾组织整合素连接酶(ILK)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、E-钙黏素(E-Cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响。方法 120只SD大鼠随机分为5组:正常组(n=24)、假手术组(n=24)、模型组(n=24)、三七注射液组(n=24)和三七总皂苷组(n=24),12周后处死大鼠。观察肾功能、24 h尿蛋白定量、肾脏病理改变,免疫组织化学法和Western blotting观察大鼠肾组织ILK、MMP-7、E-Cadherin和α-SMA蛋白的表达。结果假手术组大鼠肾组织结构正常,模型组大鼠出现肾间质纤维化,三七注射液组和三七总皂苷组大鼠小管间质病变减轻。模型组大鼠血清BUN和Scr水平、24 h尿蛋白定量、肾小管间质病理评分增高,肾组织ILK、MMP-7、α-SMA蛋白表达上调,E-Cadherin下调,与假手术组相比较,差异均有统计学意义(P<0.01);而三七注射液组和三七总皂苷组大鼠BUN和Scr水平、24 h尿蛋白定量、肾小管间质病理评分、肾组织ILK、MMP-7、α-SMA蛋白下降,E-Cadherin上调,与模型组相比较,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05);三七注射液组和三七总皂苷组相比较,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论三七注射液的肾保护作用可能与下调ILK、MMP-7水平,抑制肾小管上皮细胞转分化有关。

三七注射液对阿霉素诱导的肾纤维化大鼠FcγRⅡa(CD32a)蛋白及C反应蛋白的影响

目的探究三七注射液对于经阿霉素诱导的肾脏发生纤维化病变的大鼠FcγRⅡa(CD32a)蛋白与C反应蛋白(C-reaction protein,CRP)的影响。方法选取144只Sprasue-Dawley(SD)大鼠,并将其随机分成4组:正常组、模型组、假手术组以及三七注射液组,每组36只。选取给药后第4、8、12周分别处死4个处理组中12只大鼠。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各处理组中大鼠CRP的血清含量,以及采用免疫印迹试验(Western Blot)进行FcγRIIa蛋白定量分析,间接免疫荧光染色技术共聚焦显微镜下观察大鼠肾小管上皮细胞表面FcγRⅡa蛋白荧光表达。结果(1)与假手术组比较,模型组大鼠各时间点血清CRP的水平均增高(P<0.01);而与模型组相同时间点比较,三七注射液组大鼠各时间点血清CRP的水平均较低(P<0.01,P<0.05)。(2)与假手术组对比,模型组FcγRⅡa蛋白表达的水平随时间的推移下调(P<0.01),并且从第4周~第12周呈逐渐下降趋势。三七组FcγRⅡa蛋白表达较正常组和假手术组下调(P<0.01),三七组FcγRIIa蛋白表达水平较模型组高(P<0.05或P<0.01)。(3)假手术组FcγRⅡa蛋白绿色荧光表达很强,模型组随着造模时间的延长FcγRⅡa蛋白绿色荧光表达减弱,经过三七组治疗以后FcγRⅡa蛋白绿色荧光表达明显增强。结论三七注射液可能通过干预阿霉素诱导的肾纤维化大鼠FcγRⅡa蛋白与CRP相互作用,从而阻断CRP介导的炎症反应,发挥抗肾纤维化作用。

三七注射液对阿霉素诱导的肾纤维化大鼠补体–炎症受体系统的影响

目的观察三七注射液对阿霉素诱导的肾纤维化大鼠血清补体C3a、C5a和肾组织Toll样受体(TLR)1、TLR2的影响。方法将144只SD大鼠随机分为4组:正常组(n=36)、假手术组(n=36)、模型组(n=36)和三七注射液组(n=36),每组在给药后第4周、8周、12周三个时间点各处死大鼠12只。Western blot检测肾组织中TLR1、TLR2蛋白的表达,ELISA法检测血清C3a、C5a的含量。结果与假手术组对比,模型组大鼠BUN和Scr、血清C3a和C5a、肾组织TLR1、TLR2蛋白表达的水平在各时间点均升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组组对比,三七注射液组大鼠BUN和Scr、血清C3a和C5a、肾组织TLR1、TLR2蛋白表达的水平在各时间点均下降,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论三七注射液可能通过下调TLR1、TLR2蛋白表达的水平,同时降低C3a、C5a的水平,调节补体–炎症受体系统,从而发挥抗肾纤维化作用。

戊型肝炎病毒高通量中和效价评价模型的建立

广泛有效的体外感染模型的缺乏限制了抗戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)抗体及血清定量化中和效价的评估,从而阻碍了对HEV相关抗体应答及免疫机制的深入研究。本研究首先通过在HEV低效复制细胞系HepG2肝癌细胞株上进行了HEV感染细胞后的连续监测,直到第13d到达病毒载量的检测下限,验证了该细胞系建立感染模型的可行性,进一步采用96孔多通道平行感染、核酸提取及实时荧光定量PCR对五株抗HEV的鼠源单克隆抗体及四位戊肝疫苗接种者的接种前、后血清样本进行了细胞中和试验。结果显示应用该模型能够实现对不同中和能力的单抗及接种疫苗前后的血清进行中和效价的定量化评估。表明本研究已成功建立了HEV体外高通量中和评价模型,同时也显示出该模型在HEV疫苗及抗体应答表位研究中所具有的潜在价值。