附子多糖与阿霉素长循环热敏脂质体的抗肿瘤作用及其机制探讨

目的:观察附子多糖(MPS)与阿霉素(ADM)长循环热敏脂质体(ALTSL)联合靶向治疗荷肝癌H22小鼠的作用,并探讨其抗肿瘤作用机制。方法:以荷瘤小鼠的瘤重为指标,观察药物的抗肿瘤活性。以荷瘤小鼠的存活天数计算生命延长率。以乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞的杀伤活性。以MTT比色法检测淋巴细胞的转化率。以流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡及p53、Fas、FasL和caspase-3的表达。用RT-PCR法测定IL-2mRNA及IL-12mRNA的表达。制作病理切片观察肿瘤、心、肝、肾脏的组织学变化,探讨抗肿瘤机制。结果:MPS+ALTSL联合治疗对肿瘤的抑制作用比单一ALTSL靶向治疗更为显著,抑瘤率达80.4%,并可显著延长荷瘤小鼠的存活时间(P<0.01)。与对照组和ADM组比较,ALTSL可使NK细胞的杀伤活性显著增加,而MPS+ALTSL则可使NK细胞的杀伤活性和淋巴细胞转化率进一步提高(P<0.01)。应用ALTSL可使脾细胞中IL-2mRNA和IL-12mRNA的表达明显增高;而MPS+ALTSL则可使他们的表达进一步增强。病理切片的结果显示,热敏脂质体配合肿瘤局部加热,可使肿瘤细胞凝固坏死。联合应用MPS,可见肿瘤组织中出现大量的淋巴细胞浸润。结论:ALTSL能提高化疗药物ADM的抗肿瘤效果,并降低其心肺毒性,保护机体的免疫功能。MPS+ALTSL能进一步诱导肿瘤细胞凋亡,激活并促进T细胞转化和NK细胞的杀伤活性,增强机体的免疫功能,发挥抗肿瘤的协同作用。

阿霉素长循环热敏脂质体的研制及其靶向治疗肿瘤作用的研究

目的:研制阿霉素脂质体(AL)、阿霉素长循环脂质体(ALCL)和阿霉素长循环热敏脂质体(ALTSL)。研究不同类型脂质体对H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用。方法:建立荷瘤小鼠模型,观察各实验组的抑瘤效果,计算抑瘤率和生命延长率;HPLC法研究静脉给药后各实验组阿霉素的药代动力学规律及组织学分布特征;制作病理切片,观察各实验组肿瘤和心脏等组织的病理变化。结果:ALCL和ALTSL对H22荷瘤小鼠肿瘤有显著的抑制作用,抑瘤率分别为57.8%和67.0%(P<0.01);尾静脉注射给药24h后,ALCL和ALTSL组荷瘤小鼠肿瘤组织和血液中的阿霉素含量明显上升,而在心、肺中的含量显著降低;ALTSL使肿瘤细胞大量坏死,而对心肌细胞无明显损伤。结论:ALCL和ALTSL均能提高化疗药阿霉素的抗肿瘤效果,降低阿霉素的心肺毒性,延长荷瘤小鼠的存活时间。

rhIL-2与阿霉素长循环热敏脂质体靶向治疗肿瘤的协同作用

目的:观察重组人白细胞介素-2(rhIL-2)与阿霉素长循环热敏脂质体(ALTSL)联合靶向治疗荷H22瘤小鼠的协同作用,并探讨其抑瘤作用的机制。方法:以荷H22瘤小鼠的瘤重为指标,评价药物的抑瘤活性。以荷H22瘤小鼠的存活天数计算生命延长率。以乳酸脱氢酶释放法测定NK细胞的杀伤活性。以MTT比色法检测淋巴细胞的转化率。以流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡及p53、Fas、FasL和caspase-3的表达。用RT PCR法测定IL-2mRNA及IL-12mRNA的表达。镜下观察荷H22瘤小鼠肿瘤、心、肝及肾脏组织的病理变化。结果:rhIL2+ALTSL的抑瘤率显著高于单用ALTSL,分别为73.5%和67.0%;ALTSL和rhIL2+ALTSL均可显著延长荷瘤小鼠的存活时间(P<0.05～P<0.01)与对照组和游离阿霉素(FADM)组相比较,ALTSL组NK细胞的杀伤活性显著增加,rhIL2+ALTSL组NK细胞的杀伤活性更高。与FADM组比较,rhIL-2+ALTSL组淋巴细胞的转化率明显提高(P<0.01)。应用ALTSL组和rhIL-2+ALTSL组均可增强脾细胞中IL-2mRNA和IL-12mRNA的表达,但后者的增强作用高于前者。病理切片检查显示,热敏脂质体配合肿瘤局部加热,使肿瘤细胞凝固坏死,联合应用rhIL-2肿瘤组织溶解,细胞破碎,可见大量的淋巴细胞浸润。结论:ALTSL能提高ADM的抑瘤效果,降低ADM心肺的毒性。

阿霉素长循环热敏脂质体联合射频热疗的药效学研究

目的考察阿霉素长循环热敏脂质体(doxorubicin long-circulating thermo-sensitive liposomes,DOX-LCTSLs)与射频(radiofrequency,RF)热疗联合对人宫颈癌He La荷瘤裸鼠的抗肿瘤效果及相关药效。方法构建人宫颈癌He La荷瘤裸鼠模型,将小鼠随机分为6组:对照组、RF热疗组、DOX组、DOX-LCTSLs组、DOX+RF组和DOX-LCTSLs+RF组。分别在给药0.5 h、4 h及12 h后检测组织中药物的含量,确定DOX在各时间段主要组织及肿瘤中的分布情况;治疗期间观察裸鼠的生活状态,隔天测量肿瘤体积变化并计算抑瘤率;治疗结束后将主要器官及肿瘤切片进行HE染色,观察各组织器官的细胞形态学变化;使用TUNEL染色法考察肿瘤组织细胞凋亡情况。结果组织分布结果表明,DOX-LCTSLs组在心脏分布明显比DOX组减少;DOX-LCTSLs+RF组抑瘤率达82.14%,与DOX组及DOX+RF组相比差异有统计学意义(P<0.05);HE组织切片表明DOX-LCTSLs对裸鼠主要脏器无明显毒性,而肿瘤组织细胞出现不规则及核溶解现象;TUNEL凋亡检测表明,经过DOX-LCTSLs+RF组尾静脉注射治疗后,肿瘤组织出现明显凋亡现象。结论 DOX-LCTSLs与其他治疗组相比,具有明显的热敏控释性、低毒性,联合RF热疗可显著增强DOX抗肿瘤活性。

盐酸表阿霉素长循环热敏脂质体对Lewis肺癌荷瘤小鼠的药效学研究

目的考察盐酸表阿霉素长循环热敏脂质体对Lewis肺癌荷瘤小鼠的药效学。方法建立小鼠皮下Lewis肺癌肿瘤模型,静脉给药,盐酸表阿霉素注射液及盐酸表阿霉素长循环非热敏脂质体作为阳性对照,氯化钠注射液为阴性对照。绘制肿瘤生长曲线,计算各组肿瘤抑制率并进行肿瘤切片组织病理学检查。结果各给药组肿瘤重量与阴性对照组肿瘤重量相比均有极显著性差异,而盐酸表阿霉素长循环热敏脂质体组与盐酸表阿霉素注射液及盐酸表阿霉素长循环非热敏脂质体组间均有显著性差异。盐酸表阿霉素长循环热敏脂质体组肿瘤抑制率为61.1%,其他两组分别为39.6%和43.1%。盐酸表阿霉素长循环热敏脂质体组肿瘤相比其他各组坏死较彻底。结论制备的盐酸表阿霉素长循环热敏脂质体具有较高的肿瘤抑制率。

盐酸表阿霉素长循环热敏脂质体大鼠药代动力学考察

建立一种快速、灵敏的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定大鼠血浆中微量的盐酸表阿霉素(EPI)浓度的方法。以盐酸柔红霉素为内标,血浆样品用甲醇沉淀蛋白后进样,采用CAPCELLPAKC18色谱柱(3.0mm×50mm,3μm),甲醇-0.1%甲酸水溶液(80∶20)为流动相,以HP1200-6410QQQLC/MS型质谱仪多重监测(MRM)扫描方式检测。大鼠尾静脉注射等剂量(12mg·kg-1)的EPI溶液、普通脂质体(EPI-LIP)及长循环热敏脂质体(EPI-LTSL),采用DASver2.0软件拟合分析并求算各组药动学参数。结果血浆中EPI的线性范围为:0.01～50μg·mL-1,定量下限为0.01μg·mL1;批内和批间精密度均小于11.9%;平均萃取回收率分别为89.3%和92.1%;3组药物在大鼠体内药代动力学行为均符合三室模型,EPI-LTSL组的t1/2α、t1/2β、t1/2γ、AUC0-∞、MRT0-∞分别是EPI溶液组及EPI-LIP组的7.5、1.3、12.6、12.9、3.7倍及1.6、1.4、12.3、2.9、2.6倍,而后两组的平均清除率(CL)约为EPI-LTSL组的13.4倍。EPI-LTSL能显著提高AUC并延长药物在大鼠体内的循环时间。

甘草次酸-长循环阿霉素脂质体的制备及其靶向性研究

目的合成甘草次酸(GA)修饰的聚乙二醇(PEG)-磷脂衍生物,制备甘草次酸-长循环阿霉素脂质体(GA-PLIP@ADM),研究其体外制剂学相关性质和小鼠体内靶向性。方法合成GA修饰的PEG-DSPE,差示扫描量热法、核磁共振氢谱和飞行质谱法表征合成产物;采用薄膜分散法制备GA-PLIP@ADM,并测定其包封率和载药量;动态光散射法测定其粒径和zeta电位,透射电镜观察外观形态;考察其稳定性;建立阿霉素体内分析方法,研究GA-PLIP@ADM的体内靶向性。结果采用合成GA修饰的PEG-磷脂衍生物制备的GA-PLIP@ADM包封率和载药量分别为(60.6±4.5)%和(4.22±0.32)%,平均粒径为(127.2±5.2)nm;外观为球形或类球形,大小均一;稳定性良好;小鼠体内靶向性研究结果表明,GA-PLIP@ADM具有明显的肝脏和肿瘤靶向性。结论甘草次酸-长循环阿霉素脂质体作为肝脏靶向和肿瘤靶向给药系统,具有广阔的应用前景。

甘草次酸介导pH敏感主动靶向长循环阿霉素脂质体的制备及其药物动力学

目的制备甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA)介导的pH敏感主动靶向长循环阿霉素(doxorubicin,DOX)脂质体(liposomes,LP)(GA-PEG2000-N=CH-DOXLP)并测定其在大鼠体内药物动力学参数。方法采用薄膜分散法制备甘草次酸介导pH敏感主动靶向长循环阿霉素脂质;采用阳离子交换树脂-微柱离心法测定脂质体的包封率和载药量;动态激光散射法测定脂质体的粒径、粒径分布和Zeta电位;透射电镜观察脂质体形态;透析法测定脂质体在不同pH条件下的体外释放;荧光分光光度法测定阿霉素血浆药物浓度,得到药-时曲线并计算药物动力学参数。结果甘草次酸介导的脂质体(GA-PEG2000-N=CH-DOXLP)和普通脂质体(DOXLP)的粒径分别为(135.5±2.6)nm和(105.6±4.0)nm;包封率分别为(53.8±5.8)%和(52.9±3.5)%,载药量质量分数分别为(2.35±0.16)%和(2.39±0.26)%;Zeta电位分别为-(5.19±0.73)mV和-(1.53±0.57)mV;GAPEG2000-N=CH-DOXLP的AUC(0-72)分别是DOXLP的2.33倍和DOX溶液的5.62倍。结论所制备的甘草次酸修饰的pH敏感主动靶向长循环脂质体制剂学性质稳定并能显著延长其在大鼠体内的循环时间。

联合包载Combretastatin A-4和阿霉素的长循环脂质体的体外体内初步研究

目的制备一种具有程序释药功能的联合包载抗肿瘤药物阿霉素(doxorubicin,DOX)和新生血管抑制剂(combretastatin A-4,CA-4)的新型长循环脂质体并进行体内药动学评价。方法以卵磷脂、胆固醇和聚乙二醇磷脂衍生物(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-polyethylene gly-col,DSPE-PEG)为载体材料,采用薄膜分散法和硫酸铵梯度法分步包载CA-4和DOX制备得到脂质体。通过单因素考察,筛选最佳处方和制备工艺,并评价其体外释放情况。采用正常大鼠考察该制剂在静脉注射后的药动学行为。结果 m(卵磷脂)∶m(胆固醇)∶m(DSPE-PEG)为85∶10∶5、m(药)∶m(脂材)为1∶20、水化脂材浓度为50 mmol.L-1时,CA-4的包封率最高(>85%),DOX的包封率也在95%以上,平均粒径小于80 nm。体外释放结果表明联合包载DOX和CA-4的脂质体在pH7.4磷酸盐介质中可以快速释放CA-4,而DOX释放相对较慢。体内药动学实验结果表明,脂质体包载可明显增加CA-4的体内循环时间,但CA-4的联用并未对DOX体内药动学行为产生明显干扰。结论联合包载CA-4和DOX的脂质体可有效地实现程序释药,并延长药物体内循环时间,将可能成为肿瘤治疗的新策略。

阿霉素长循环脂质体的理化性质及体内药动学研究

阿霉素(adriamycin,ADM)是蒽环类抗肿瘤药物,其抗瘤谱广,是目前临床上最常用的抗肿瘤药物之一.ADM主要在肝脏代谢,不能通过血脑屏障,其骨髓抑制和心脏毒性较大,长期应用可引起严重的心脏毒性和肝脏损害.严重的心脏毒性使ADM的临床应用受到一定限制,同时ADM耐药现象也较为普遍.

替加氟磁性长循环热敏脂质体的制备与质量评价

为提高替加氟的靶向性和疗效,降低其不良反应,采用反相蒸发超声法制备替加氟磁性长循环热敏脂质体,采用高效液相色谱仪等检测替加氟的包封率与药物含量,采用纳米粒径仪观察粒子粒径及粒径分布,采用振动样品磁强计检测其磁性。结果发现替加氟磁性长循环热敏脂质体平均粒径为126nm左右,具有强磁性和超顺磁性,包封率在65%左右,在42℃左右能产生突释效果。

长春新碱长循环热敏脂质体的抗肿瘤活性

目的评价长春新碱长循环热敏脂质体(VTSL)的体内外抗肿瘤活性。方法采用MTT法评价长春新碱注射液(VCR)和VTSL对sw620、PANC细胞的细胞毒作用;使用香豆素-6(Cou-6)标记脂质体,Hoechst 33258细胞染色,激光共聚焦显微镜观察HT-1080细胞对长循环热敏脂质体(TSL)摄取情况;建立荷瘤裸鼠模型(Hep G-2、MCF-7),给药后加热肿瘤部位30 min,测量裸鼠体质量和肿瘤体积,比较研究VTSL的抑瘤效果。结果脂质体组给药后72 h,sw620细胞活性均<5%,PANC细胞活性均<20%,较VCR显示出更强的细胞毒作用;Cou-6标记脂质体加热后细胞内绿色荧光增强,细胞摄取增多;同剂量下VCR和VTSL对Hep G-2、MCF-7的抑瘤率分别是50.0%和69.7%,47.8%和76.1%,治疗结束后肿瘤质量存在显著性差异。结论将长春新碱制备成为VTSL提高了细胞毒性,加热能促进脂质体与细胞膜融合;在相同治疗剂量下,VTSL比VCR抑瘤率显著提升且存在一定的剂量依赖性。结果表明将长春新碱制备为VTSL应用于实体瘤治疗,能显著提高其治疗效果,有潜力拓展该药物的临床适用范围。

紫杉醇长循环热敏脂质体对Lewis肺癌荷瘤鼠的药效学研究

目的:考察紫杉醇长循环热敏脂质体(PLTL)对Lewis肺癌荷瘤小鼠的药效学。方法:建立Lewis肺癌肿瘤模型,随机分为5组,对照组、加热组、紫杉醇注射液(PTX)组、紫杉醇热敏脂质体(PTL)组和PLTL组,局部联合热疗,观察小鼠生活状态,监测肿瘤的体积及瘤重,对肿瘤组织切片进行HE染色,观察肿瘤细胞的形态学变化,采用流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡率。结果:PTX、PTL组和PLTL组的抑廇率分别为48.87%、57.22%和78.87%,肿瘤细胞凋亡率分别为(42.7±3.8)%,(54.6±2.9)%和(69.7±5.0)%。结论 :PLTL与PTX和PTL相比,PLTL具有明显的热敏靶向性,与局部热疗相结合显著提高了紫杉醇的治疗效果。

奥沙利铂长循环热敏脂质体的制备与理化性质研究

目的采用长循环热敏脂质体作为载药载体包封抗癌药物奥沙利铂,使其具有靶向作用,增加抗癌药物的治疗作用,同时减少抗癌药物的全身毒副作用。方法采用逆相旋转蒸发法制备奥沙利铂长循环热敏脂质体,考察奥沙利铂长循环热敏脂质体的理化性质和药动学规律。结果奥沙利铂长循环热敏脂质体的制备方法的优化处方为胆固醇与磷脂比为1∶4,磷脂浓度为100 mg/mL,药脂比为1∶40,超声时间为6 min,制的奥沙利铂长循环热敏脂质体的平均包封率为50.5%。结论奥沙利铂长循环热敏脂质体的制备工艺相对简单,操作方法可行,所制备的产品均具有较好的稳定性,奥沙利铂长循环热敏脂质体具有良好的热响应性。

紫杉醇长循环热敏脂质体对Lewis肺癌移植瘤的抑制作用

目的研究紫杉醇长循环热敏脂质体(PLTL)对Lewis肺癌移植瘤的抑制作用。方法建立小鼠Lewis肺癌模型,将40只荷瘤鼠随机分为5组,空白对照组、模型对照组、紫杉醇注射液(PTX)组、紫杉醇热敏脂质体(PTL)组和PLTL组,每组8只。空白对照组和模型对照组注射0.9%氯化钠溶液,PTX组、PTL组和PLTL组,每只小鼠给药总剂量为紫杉醇20 mg·kg-1,采用0.9%氯化钠溶液稀释,每次注射0.2mL。除空白对照组外,其他组给药后5 min内立即将小鼠的肿瘤部位固定于(42±0.5)℃的恒温水浴中加热30 min。治疗期间观察移植瘤体生长情况,苏木精-伊红(HE)染色检测肿瘤组织的病理学形态改变,观察肿瘤细胞的形态学变化,采用流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡率,考察PLTL联合局部热疗对小鼠肿瘤的抑瘤作用。结果模型对照组、PTX组、PTL组和PLTL组抑瘤率分别为21.81%,48.87%,57.22%和78.87%,肿瘤细胞凋亡率分别为(20.4±4.2)%,(42.7±3.8)%,(54.6±2.9)%和(69.7±5.0)%,肿瘤组织切片HE染色发现,PLTL组肿瘤细胞凋亡与坏死数量明显增多。结论 PLTL与PTX,PTL比较,具有明显的热敏靶向性,与局部热疗相结合显著提高紫杉醇的治疗效果。

卡莫司汀长循环热敏脂质体的制备与表征

目的研究卡莫司汀长循环热敏脂质体的制备及表征。方法采用薄膜分散并超声法制备卡莫司汀长循环热敏脂质体,采用透射电镜、激光粒度分析仪检测其形态与粒径分布,采用凝胶柱层析法分离脂质体与游离药物,采用高效液相色谱法研究其含量与包封率。结果卡莫司汀长循环热敏脂质体粒径约100nm左右,包封率达97%以上。结论成功制备了卡莫司汀长循环热敏脂质体。

紫杉醇长循环热敏前体脂质体的制备与表征

目的:研究紫杉醇长循环热敏前体脂质体的制备并对其性质进行考察。方法:采用薄膜分散法制备紫杉醇长循环热敏脂质体,再用冷冻干燥技术制备紫杉醇长循环热敏前体脂质体;采用激光粒度仪考察粒径和Zeta电位;采用高效液相色谱法研究其含量与包封率;并考察脂质体的体外释药特性。结果:紫杉醇长循环热敏前体脂质体水合后形成紫杉醇长循环热敏脂质体,粒径均值为(108.6±3.6)nm,Zeta电位的均值为(-12.2±1.8)mV,包封率可达96.2%;该脂质体在相变温度42℃下药物释放达到95%以上。结论:紫杉醇长循环热敏前体脂质体的制备工艺稳定,载药量大,包封率高,具有良好的热敏性;含量及其包封率测定方法简单、快速、准确。本实验可为紫杉醇静脉注射用新制剂的开发提供研究基础。

薄膜分散法制备白藜芦醇长循环热敏前体脂质体及其表征研究

目的:对白藜芦醇长循环热敏前体脂质体制备的研究以及对其性质进行分析。方法:先用薄膜分散法制备白藜芦醇长循环热敏脂质体后,再用冷冻干燥法来制备白藜芦醇长循环热敏脂质体的前体。采用电势测定仪、HPLC等方法对该脂质体的包封率、粒径、稳定性、载药量、电位、释放度等来展开系统的检查。结果:白藜芦醇长循环热敏前体脂质体水合后形成白藜芦醇长循环热敏脂质体,粒径均值为(107.9±3.6)nm,Zeta电位的均值为(-12.2±1.6)m V,包封率可达89.4%;该脂质体在相变温度42℃下药物释放达到94%以上。结论:采用长循环热敏来制备的白藜芦醇前体脂质体含量与包封率检查方法准确、快速、简单且方法简便易行。载药量大,包封率好,工艺比较稳定。本实验可为新型白藜芦醇静脉注射用热敏脂质体的研究提供基础。

奥沙利铂长循环热敏脂质体及其药效学研究

目的制备奥沙利铂长循环热敏脂质体(oxaliplatinlong-circulating-thermosensitive liposomes,OLTL),并考察其性质及抑瘤作用。方法采用薄膜分散法制备OLTL;透析法考察OLTL在37℃和42℃下的体外释药;免疫抑制法建立荷Lewis肺癌小鼠模型,以瘤重为指标考察OLTL的抑瘤作用。结果带有蓝色乳光的OLTL粒径在100～130 nm之间,包封率大于90%;42℃条件下,OLTL释药率达90%以上;OLTL组抑瘤率为70.79%。结论 OLTL具有良好的热敏释药特性,可明显提高奥沙利铂(oxaliplatin)的抑瘤作用。

热敏长循环脂质体的研究进展

简述长循环脂质体及热敏脂质体的制备原理及国内外研究进展,将两种脂质体结合构成新型脂质体——热敏长循环脂质体,并展望新型脂质体的研究前景。