新疆阿魏多糖和药桑多糖及其硫酸化产物体外抗新城疫病毒作用研究

为研究新疆阿魏多糖、药桑多糖及其硫酸化产物体外抗新城疫病毒(NDV)作用,用MTT测定各多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,选择安全浓度范围内的5种浓度的各多糖与NDV用3种不同的加药方式(先加多塘、后加多塘、多糖和病毒混合后同时加入)加入到CEF中,用MTT法测定各多糖对NDV感染CEF能力的影响。结果表明,各多糖均有一定的抗NDV作用,其中先加病毒后加多糖组抗病毒效果最好,各多糖中药桑多糖的硫酸化修饰物(sMP2.5)抗NDV作用最强,病毒抑制率达到87.69%,具有较好的研发前景。

阿魏菇多糖的抗氧化功能及其对果蝇寿命的影响

目的:研究了阿魏菇多糖抗氧化延缓衰老作用。方法:按多糖剂量不同,将试验动物分组;分别进行果蝇生存实验和小鼠抗氧化实验。测定指标包括:果蝇组死亡率,小鼠组的丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物岐化物等的含量或活性。结果:发现果蝇在较高和高剂量组中平均寿命和最高寿命都显著高于对照(p<0.05);在对老年小鼠作用的实验中,阿魏菇多糖(PNMP)各剂量组小鼠红细胞SOD活力均高于老龄对照组,其中,中剂量组明显升高(p<0.05)。各阿魏菇多糖组血清中MDA含量低于老年对照组,其中中剂量组显著降低(p<0.05)。各剂量组脑中的MDA、LPF均有不同程度的下降,PNMP对H2O2诱导小鼠红细胞溶血有明显抑制作用。结论:阿魏菇多糖具有明显的抗氧化延缓衰老作用。

阿魏菇多糖对荷瘤小鼠肿瘤坏死因子-α和干扰素-γ的影响

目的研究阿魏菇多糖对荷瘤小鼠肿瘤生长及细胞因子的影响,初步探讨其对机体免疫功能的作用。方法建立昆明小鼠宫颈癌U14移植瘤动物模型,随机分为模型对照组,顺铂阳性对照组,阿魏菇多糖组及阿魏菇多糖+顺铂组。分别给予不同的药物干预10天后,检测抑瘤率,采用ELISA法检测阿魏菇多糖对荷瘤小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与干扰素-γ(IFN-γ)水平的影响。结果阿魏菇多糖对小鼠宫颈癌U14移植瘤有抑制作用,抑瘤率达39%,并能提高荷瘤小鼠的脾指数及血清中细胞因子TNF-α和IFN-γ的水平。结论阿魏菇多糖具有体内抗肿瘤活性,其机制可能与增强机体的免疫功能有关。

阿魏侧耳多糖抗癌作用机理研究

目的:阿魏侧耳(阿魏菇)多糖(Pleurotus ferulae polysaccharide,PFP)抗宫颈癌作用的机理研究。方法:MTT法、中性红比色法和Griess法。结果:灌胃给药500 mg.kg-1的阿魏菇多糖可抑制小鼠宫颈癌U14移植瘤的生长,抑瘤率达到39%,临床抗宫颈癌药顺铂的抑瘤率为46.5%,阿魏菇多糖与顺铂共同作用时,抑瘤率达到65.1%;但是在体外实验中,不同浓度阿魏菇多糖分别作用于人宫颈癌HeLa和人乳腺癌MCF-7细胞不同时间后,却不能抑制两种细胞的生长;在5μg.mL-1的脂多糖刺激下,阿魏菇多糖不能促进脾淋巴细胞的增殖;不同浓度的阿魏菇多糖作用于腹腔巨噬细胞24 h,能使腹腔巨噬细胞的吞噬能力显著增强,并且呈现明显的剂量依赖性,与此同时阿魏菇多糖也促进了腹腔巨噬细胞的增殖,但是却不能刺激腹腔巨噬细胞释放NO。结论:阿魏菇的抗宫颈癌机制可能是通过促进小鼠机体免疫功能而实现的。

阿魏菇多糖对荷瘤小鼠机体免疫功能的影响研究

目的:从免疫学角度探讨阿魏菇多糖抑制肿瘤的作用机理。方法:建立昆明小鼠宫颈癌U14移植瘤动物模型,随机分为模型对照组,顺铂作为阳性对照组,阿魏菇多糖组,阿魏菇多糖+顺铂组4组。分别给予不同的药物干预10天后,检测抑瘤率,同时观察阿魏菇多糖对小鼠免疫器官的影响;鸡红细胞半体内法观察阿魏菇多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;MTT法测定阿魏菇多糖对小鼠脾脏中NK细胞影响;淋巴细胞转化实验检测阿魏菇多糖对小鼠脾脏T、B淋巴细胞的影响。结果:阿魏菇多糖对小鼠宫颈癌U14移植瘤有抑制作用,抑瘤率达39%,可明显促进荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,提高脾中NK细胞的免疫活性,增加脾指数,提高脾脏T、B淋巴细胞转化率,与顺铂联用时可提高顺铂对荷瘤鼠免疫功能的抑制。结论:阿魏菇多糖可通过提高小鼠机体免疫功能,抑制小鼠宫颈癌U14移植瘤的增殖。

超声波法提取阿魏菇多糖的工艺

研究超声波辅助提取阿魏菇多糖的方法,通过单因素和正交试验考察并确定阿魏菇多糖的最佳提取工艺。通过试验最终确定阿魏菇多糖的最佳提取工艺为:超声功率160 W、超声时间70 min、液料比30∶1(g/mL)、提取温度60℃。在该条件下,阿魏菇多糖得率为11.08%。

阿魏菇多糖高产菌的离子束和激光复合诱变育种

目的:诱变筛选阿魏菇多糖高产菌,探索食用菌的离子束和激光复合诱变育种方法。方法:尝试用阿魏菇菌丝单细胞为靶材,以离子束注入和激光辐照为复合诱变手段,采用营养缺陷型筛选办法定性初筛,摇瓶发酵定量复筛。结果:通过离子束注入诱变,获得了2株菌丝体多糖产量分别达到551.80mg/L和659.46mg/L、较1号出发菌株提高了46.5%和75.2%的多糖高产菌PFPH-1和PFPH-2;在此基础上,以激光辐照为复合诱变手段,获得了1株菌丝体多糖产量达到762.50 mg/L、较出发菌株PFPH-2提高了15.63%的多糖高产菌PFPH-3。结论:离子束和激光复合诱变育种方法在改良阿魏菇多糖高产性状方面诱变功效显著。

阿魏菇多糖联合顺铂对小鼠宫颈癌U14细胞的凋亡诱导作用

目的:观察阿魏菇多糖(polysaccharides from Pleurotus ferulae,PFP)、顺铂(DDP)及两者联合对小鼠宫颈癌细胞株U14移植瘤的抑制作用及凋亡诱导作用,并初步探讨阿魏菇多糖的抗肿瘤作用机制。方法:建立昆明小鼠U14宫颈癌模型,并随机分为四组:模型对照组、PFP组、DDP组、PFP+DDP组,治疗10天后检测各组瘤重及抑瘤率,采用TUNEL法检测各组瘤组织凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果:模型组小鼠体内瘤体积、瘤重明显高于各干预组(P<0.01),PFP+DDP组小鼠体内瘤重和瘤体积分别为[(0.40±0.61)g,(197.84±11.99)mm3]低于DDP组[(0.61±0.26)g,(211.46±14.58)mm3];PFP组、DDP组、PFP+DDP组瘤组织凋亡指数均高于模型对照组,其中以PFP+DDP组最明显。结论:PFP联合DDP比两药单独应用抑制肿瘤生长及诱导肿瘤细胞凋亡的作用更强,二者具有协同抗癌作用。PFP可以增强DDP的药物敏感性,其作用机制可能是通过诱导宫颈癌细胞凋亡而实现的。

阿魏菇多糖的分离纯化与结构分析

通过对新疆阿魏菇多糖进行提纯及分析,了解其基本理化性质,在理论上为深入探究阿魏菇多糖的结构以及构效活性奠定了基础。阿魏菇的热水提取液经乙醇沉淀、去蛋白、逆向流水透析、DEAE-Cellulose和SephadexG-100柱层析得纯品阿魏菇多糖。薄层色谱分析表明阿魏菇总多糖是由半乳糖,葡萄糖,果糖,甘露糖组成。以红外和电泳为基础,分析了阿魏菇多糖组分的结构,表明其是一种较纯的多糖,原子力显微镜分析表明阿魏菇多糖分子具有高度分枝结构。

阿魏菇多糖对整体荷瘤小鼠肿瘤和免疫作用的实验研究

目的:研究阿魏菇多糖的抗肿瘤作用和免疫作用。方法:采用H22荷瘤小鼠,考察阿魏菇多糖对H22荷瘤小鼠瘤重和抑瘤率的影响,并考察阿魏菇多糖对二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响。结果:阿魏菇多糖可以提高H22荷瘤小鼠的抑瘤率,增加荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数,并显著增强DNFB诱导的小鼠DTH的作用。结论:阿魏菇多糖对H22肉瘤具有较强的抑制作用,并显著增加荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数。阿魏菇多糖能显著增强DNFB诱导的小鼠DTH的作用。

阿魏菇多糖对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

目的考察阿魏菇多糖(pleurotus ferulae polysaccharide,PFP)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法制备CCl4小鼠急性肝损伤模型,采用阿魏菇多糖(125、250和500 mg·kg-1)灌胃给药,利用试剂盒检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性,检测肝组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活力。HE染色观察肝组织病理学变化。结果阿魏菇多糖能够降低模型小鼠血清AST和ALT含量,增强肝组织SOD和GSH活力,降低肝组织MDA水平,显著改善肝组织结构,减少肝细胞坏死。结论阿魏菇多糖对CCl4致小鼠急性肝损伤有一定的保护作用。

阿魏菇多糖的相对分子质量及单糖组成的测定

测定了阿魏菇多糖(Pleurotus ferulae Lenzi polysaccharide,PFLP)的相对分子质量和单糖组成,在理论上为深入探究PFLP的结构以及构效活性奠定了基础。PFLP利用离子交换柱层析(DEAE-52Cellulose)和凝胶柱层析(Sephadex G-100)进行初步和进一步分离纯化,紫外、冻融、电泳实验对其进行纯度鉴定。利用Sephadex G-100柱层析法测定相对分子质量,气相色谱分析其单糖组成。经过分离纯化、纯度鉴定后得到两种纯PFLP组分,分别命名为PFLP1、PFLP2,其相对分子质量分别为5 582、7 963。PFLP1由鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比为1︰1.66︰19.6︰3.98;PFLP2由鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比为1︰0.40︰0.66︰6.76︰4.27。

阿魏菇多糖聚酰胺层析脱色工艺及其抑菌活性

[目的]探讨阿魏菇多糖的聚酰胺层析脱色工艺及其抑菌活性。[方法]以新疆阿魏菇为原料,采用水浴浸提法提取阿魏菇多糖,以蛋白脱除率、多糖保留率和脱色率为指标,探讨聚酰胺用量、去离子水用量以及洗脱速度对阿魏菇多糖脱色的影响,并研究阿魏菇多糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉和酿酒酵母的抑菌活性。[结果]聚酰胺层析法为阿魏菇多糖最佳的脱蛋白方法,其脱色最佳工艺条件为:聚酰胺用量为60 g(粗多糖的3000倍),聚酰胺柱用1.5倍柱体积的去离子水以1.5 ml/min的流速进行洗脱,在此工艺条件下,蛋白质脱除率达到93.6%。阿魏菇多糖对黑曲霉和酿酒酵母没有抑菌活性,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有一定的抑菌作用,最小抑菌浓度分别为3.125、6.250和3.125 mg/ml,且抑菌活性与多糖质量浓度呈正相关关系。[结论]聚酰胺层析工艺可用于阿魏菇多糖的脱色。

阿魏侧耳多糖酶水解制备工艺研究

目的:采用蛋白酶水解法提取制备阿魏侧耳多糖。方法:采用硫酸-苯酚显色测定多糖的含量,采用UV法测定蛋白质的含量。研究不同蛋白酶在不同条件下对阿魏侧耳多糖提取率和除蛋白效果的影响。结果:最佳酶底比为8mg·g-1,温度60℃,最适pH值为6.0,最佳酶解时间为90min。结论:采用蛋白酶水解法可以制得纯度很高的阿魏侧耳多糖。

阿魏菇多糖对小鼠U_(14)宫颈癌抑制作用的研究

目的观察阿魏菇多糖(PFP)对小鼠宫颈癌细胞株U14移植瘤的抑制作用及其与顺铂(DDP)联合用药的效果,并初步探讨PEP的抗肿瘤作用机制。方法建立昆明小鼠U14宫颈癌模型,并随机分为模型对照组、DDP组、PFP组、PFP+DDP组,分别给予不同药物干预10 d后检测各组小鼠的瘤质量和抑瘤率,采用免疫组化法检测各组肿瘤组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平,TUNEL法检测各组瘤组织细胞凋亡指数(AI)。结果模型对照组小鼠体内瘤质量明显高于各干预组(P<0.01),PFP+DDP组小鼠体内瘤质量低于DDP组;各实验组瘤组织细胞AI均高于模型对照组,且PFP+DDP组的AI最高。PFP、DDP、PFP+DDP均可降低宫颈癌U14组织内Bcl-2蛋白的表达水平,并升高Bax蛋白表达水平,且PFP+DDP组的作用优于单药组。结论 PEP对小鼠宫颈癌U14细胞株移植瘤具有明显抑制作用,且与DDP联合用药效果更显著,其机制可能与下调Bcl-2蛋白及上调Bax蛋白的表达有关。

阿魏菇子实体多糖的结构及其抗氧化活性研究

以从阿魏菇子实体中分离纯化得到的多糖-阿魏菇多糖(Pleurotus ferulae Lenzi polysaccharides,PFLPs)作为研究对象,对其化学结构、链构象以及抗氧化活性进行了研究。实验结果表明,PFLPs含有鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖五种单糖,摩尔比为1∶1.26∶0.85∶12.40∶4.31,并且糖链内具有β-D-葡聚糖结构。链构象分析表明PFLPs是一种具有三股螺旋结构的多糖。体外抗氧化活性实验表明,PFLPs具有较高的DPPH自由基、ABTS^+自由基和羟自由基清除活性,适度的超氧阴离子自由基清除活性,还原力活性的和Fe2+的螯合活性。结果表明,PFLPs是一种很有潜力的天然抗氧化剂。

阿魏菇多糖超声微波辅助提取及其抗氧化活性

以阿魏菇作为原料,水作为提取溶剂,通过响应面优化超声-微波协同辅助提取阿魏菇多糖工艺,并和传统水浴浸提法进行比较,采用清除DPPH·、·OH和O_2^-·模型对其体外抗氧化活性进行评价。结果表明:超声-微波辅助提取阿魏菇多糖的最佳的工艺条件为:料液比1∶50(g/m L),提取时间10 min,微波功率60 W。与传统水浴浸提法相比,超声-微波辅助提取缩短了提取时间,阿魏菇多糖的得率由2.23%增加到5.6%。超声-微波协同辅助提取对阿魏菇多糖的结构基本没有影响。阿魏菇多糖具有较强的清除DPPH·、·OH和O_2^-·的能力,并与质量浓度呈一定正相关关系,当阿魏菇多糖质量浓度达到5 mg/m L时,对DPPH·、·OH和O_2^-·的清除率分别达到67%、59%和63%,但弱于VC的抗氧化活性。

阿魏菇多糖佐剂增强犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗的免疫不育效果

目的研究阿魏菇多糖(PFP)作为佐剂增强犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗(pc DNA3-CZP3)的免疫不育效果。方法将pc DNA3-CZP3单独或分别与铝佐剂、PFP联用,肌肉注射免疫小鼠3次,采用ELISA测定免疫小鼠抗血清特异性抗体滴度;流式细胞术检测树突状细胞(DC)的成熟和T淋巴细胞增殖;合笼计算窝仔数检测免疫不育效果。综合评价PFP和铝佐剂对CZP3 DNA疫苗免疫效果的影响。结果联用铝佐剂和PFP的pc DNA3-CZP3与单独免疫pc DNA3-CZP3的疫苗组相比,均能提高受免小鼠抗血清特异性抗体水平。PFP作为佐剂能够显著性的增强DC表面成熟标志物CD86+和MHCⅡ+的基因表达水平,促进T细胞增殖,并且显著降低小鼠的生育率和窝仔数。结论 PFP能够提高免疫小鼠的抗体水平,促进DC成熟和增强T淋巴细胞增殖,增强CZP3 DNA疫苗免疫小鼠的不育效果。

两种多糖对γ辐射诱导的鼠肝线粒体伤害的抑制

试验研究了阿魏菇多糖(Pleurotusferulaepolysaccharide,PFP)和枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharide,LBP)对γ辐射产生的自由基所造成的鼠肝线粒体细胞膜伤害的抗氧化抑制效果。结果表明:剂量范围75～900Gy的γ辐射诱发脂氧化,产物包括硫代巴比妥酸反应物(TBARS)和过氧化脂(LPO);在450Gy的辐射剂量下,50μg/ml或10μg/ml的阿魏菇多糖和枸杞多糖都能有效抑制脂过氧化反应和蛋白质氧化反应;阿魏菇多糖主要表现在对脂过氧化反应,如TBARS形成的抑制,而枸杞多糖主要表现在对蛋白质氧化的抑制;两种多糖都能部分地阻止蛋白硫醇的减少和超氧化物歧化酶(SOD)的钝化;两种多糖对γ辐射产生的自由基所造成的鼠肝线粒体细胞膜伤害具有良好的抗氧化抑制效果。