别嘌醇下调尿酸介导的大鼠血管平滑肌细胞赖安酰氧化酶的表达

目的研究别嘌醇对尿酸介导的大鼠血管平滑肌细胞赖安酰氧化酶(LOX)和磷酸化p-38(P-p38)表达的影响。方法大鼠血管平滑肌细胞分为三组:空白对照组;尿酸组(尿酸40 mg/L干预48 h);别嘌醇组(尿酸40 mg/L及别嘌醇0.3 mmol/L干预48 h)。共聚焦显微镜观察细胞内活性氧情况。提取大鼠血管平滑肌细胞RNA和蛋白,实时荧光定量PCR和Western Blot测定LOX、p-38及P-p38mRNA和蛋白表达。结果尿酸组血管平滑肌细胞增殖量、细胞内活性氧、LOX及P-p38的mRNA和蛋白水平明显高于对照组;别嘌醇组血管平滑肌细胞增殖量、细胞内活性氧、LOX及P-p38的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。结论别嘌醇可抑制尿酸介导的大鼠血管平滑肌细胞LOX和P-p38表达。

机械应力调控血管平滑肌细胞的凋亡

背景:随着生物力学的发展,其在心血管疾病中的研究也日益广泛,通过研究血管的力学特性可以有效地揭示动脉粥样硬化、再狭窄等心血管疾病的发病机制,开发心血管疾病治疗的新思路和新方法。目的:综述机械应力刺激对血管平滑肌细胞凋亡的研究现状,寻找临床治疗潜在靶分子和信号通路,以期改善临床动脉粥样硬化及再狭窄等心血管疾病的临床治疗效果。方法:检索1992年1月至2023年5月在中国知网、PubMed及ScienceDirect数据库收录的文献。中文检索词为“血管平滑肌细胞,机械应力,剪切力,牵张力,凋亡”;英文检索词为“vascular smooth muscle cell,mechanical stress,shear stress,stretch stress,apoptosis”,最终纳入63篇文献进行综述分析。结果与结论:①血管平滑肌细胞的生理性和病理性凋亡都是为了适应血管力学变化而发生的适应性重构。不同部位的平滑肌细胞承受不同的力学刺激,其发病机制也不同。②低剪切力、生理剪切力和高剪切力可通过直接与平滑肌细胞表面分子、受体及蛋白等作用调控凋亡信号分子和抑制增殖实现对血管平滑肌细胞凋亡的调控,该部分未对促进增殖的研究进行综述。③低牵张力、生理牵张力和高牵张力可导致平滑肌细胞凋亡,但仍存在争议。平滑肌表面存在多种力学感受分子(如整合素及受体络氨酸激酶等)可以将力学信号转导为细胞内的化学信号(如Hippo通路),启动平滑肌细胞的凋亡信号,调控平滑肌细胞的凋亡。④总之,不同力学刺激通过多种信号分子,启动多个信号通路共同作用,调控平滑肌细胞的凋亡,例如剪切力主要通过刺激分泌前列腺素、转化生长因子等影响Fas/FasL、Akt通路;而牵张力主要通过Yes相关蛋白等调控YAP通路和Notch通路等。这些分子在不同的作用时间,或不同作用强度下可能发挥相反的双向作用,比如,小鼠血管平滑肌细胞受到10%生理牵张1 h时,其增殖增加;然而,人的血管平滑肌细胞牵张12 h后可以减少其增殖。临床可以通过寻找其关键作用时间点干扰力学转导关键分子,达到预防和治疗临床心血管疾病的目的。

miR-22-3p靶向GSDMD抑制同型半胱氨酸诱导的平滑肌细胞焦亡

目的探讨miR-22-3p对同型半胱氨酸(Hcy)诱导血管平滑肌细胞焦亡的影响。方法体外培养人血管平滑肌细胞(VSMC),分为Control组(0μmol/L Hcy)与Hcy组(100μmol/L Hcy),Western blot检测细胞中pro Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD、NLRP3表达水平,qRT-PCR检测miR-22-3p表达情况;ELISA检测上清中IL-1β、IL-18的浓度。转染miR-22-3p对照(miR-22-3p-NC)、miR-22-3p的模拟物(miR-22-3p-mimic)及抑制物(miR-22-3p-inhibitor)后观察Hcy诱导下VSMC的变化。结果与Control组相比,Hcy组VSMC中pro Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD、NLRP3表达水平增加(P<0.05),IL-1β、IL-18浓度更高(P<0.01),miR-22-3p相对表达水平低(P<0.01);转染miR-22-3p-mimic后,VSMC中pro Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD、NLRP3表达水平显著降低(P<0.01),IL-1β、IL-18浓度降低(P<0.01);转染miR-22-3p-inhibitor后VSMC中pro Caspase-1、GSDMD、N-GSDMD、NLRP3表达水平显著增加(P<0.01),IL-1β、IL-18浓度升高(P<0.05)。结论miR-22-3p可抑制Hcy诱导的VSMC焦亡。

Hcy促血管平滑肌细胞增殖迁移相关的miRNAs筛选研究

目的明确同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对人源血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖迁移的影响以及分析Hcy干预下VSMC增殖迁移相关差异miRNAs,为探讨Hcy促VSMC增殖迁移的分子机制提供依据。方法体外培养VSMC,分为Control组和100μmol·L^(-1) Hcy组。采用CCK-8法测量VSMC的增殖活性;采用划痕实验分析VSMC在0 h和48 h的迁移情况。高通量测序分析各组VSMC中差异化表达的miRNAs,采用miRanda和TargetScan软件进行靶基因预测,使用BLAST软件将预测靶基因序列与GO和KEGG数据库比对,分析靶基因的功能,获得与VSMC增殖和迁移相关的靶基因信息。通过RT-qPCR对其中表达上调的miRNAs进行验证。结果Hcy干预能增加VSMC的增殖活力(P<0.01),且VSMC的划痕面积减少(P<0.01)。两组细胞共检测到576个miRNAs,其中已知miRNAs 404个,新预测miRNAs 172个。与Control组相比,Hcy组存在88个差异表达的miRNAs,其中表达上调的20个,表达下调的68个。与VSMC增殖和迁移相关的miRNAs有20个,表达上调的包括miRNA39、miRNA206和miRNA212-5p,表达下调的包括miRNA35等17个。RT-qPCR结果显示,Hcy组miRNA212-5p的表达上调(P<0.05)。结论Hcy致VSMC增殖迁移过程中存在差异表达的miRNAs,miRNA212-5p可能参与了Hcy对VSMC的作用。

组织工程血管构建过程中平滑肌细胞增殖变化及代谢模式

背景:将种子细胞接种于三维支架材料上然后在生物反应器中进行三维培养是一种常见的体外组织工程培养手段,但是生物工程血管构建过程中的细胞增殖变化及代谢模式尚不清楚。目的:探究利用体外生物反应器进行生物血管组织构建过程中细胞耗氧等代谢变化及其原因。方法:以自主搭建的血管生物反应器系统为平台,牛血管壁平滑肌细胞为种子细胞,常规CO_(2)培养箱提供培养过程的外部气体环境。将种子细胞接种于管状多孔隙的聚乙醇酸支架材料上进行三维培养,全过程包括1周的静置期和7周脉动张应力刺激加载期。搭建一套非侵入式监测体系,采用光学溶解氧贴片法监测反应器中培养液溶解氧变化,并通过定期取样测定葡萄糖消耗量及乳酸生成量。采用CCK-8检测平滑肌细胞在聚乙醇酸三维支架材料上增殖情况,通过烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的氧化态与还原态比值(NAD^(+)/NADH)了解培养早期阶段细胞增殖与代谢状况,采用RT-qPCR、Western blot方法检测增殖相关基因(Ki67)及糖酵解相关基因(GLUT-1、LDHA)的表达。结果与结论:(1)从细胞加注到静置期结束(第1周)培养液的溶解氧水平为(4.314±0.380)mg/L,张应力刺激加载后(后7周)溶解氧水平逐步稳定在(1.960±0.866)mg/L,两者有明显变化(P<0.05);(2)细胞培养液中乳酸生成量与葡萄糖消耗量的比值Y_(L/G)在加注细胞后快速升高,第5天最高值高于1,随后缓慢下降至0.5(静置期Y_(L/G)均值为0.89,加压期均值为0.57,P<0.05);(3)CCK-8检测显示A_(450)值在细胞加注之后逐渐增大,第5天达到最高值3.17,之后缓慢下降;同时发现Ki67 mRNA在培养第3天上调最显著,之后下降,Ki67蛋白在第3-5天的相对表达量较高;(4)细胞加注后第5-7天NAD~+/NADH明显升高,糖酵解相关基因(GLUT-1、LDHA)表达上调同步改变,前5 d相对表达量较高;(5)结果提示:利用血管生物反应器构建组织工程血管早期,平滑肌细胞以增殖为主并呈现一种低耗氧的代谢特征,在脉动张应力刺激阶段呈现耗氧较高的代谢特征。

Takeda G蛋白偶联受体5在血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用

目的探讨Takeda G蛋白偶联受体5(Takeda G protein-coupled receptor 5,TGR5)在小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和迁移中的作用及机制。方法用血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF-BB)诱导VSMCs增殖、迁移,以INT-777特异性激活TGR5,CCK-8试剂盒及增殖细胞核抗原(Ki-67)免疫荧光染色用于检测细胞增殖能力,划痕试验用于检测细胞迁移能力。Western blot检测TGR5蛋白水平变化。为探究TGR5在血管内膜增生中的作用,将40只雄性野生型C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、内膜损伤组、假手术+UDCA(熊去氧胆酸,TGR5激动剂)组及内膜损伤+UDCA组,每组10只。造模完成后按组分别予以口服普通维持饲料及含0.5%UDCA的普通维持饲料,持续21 d后分别取材,HE染色观察颈动脉内膜增生程度,Ki-67免疫荧光染色观察颈动脉内膜血管平滑肌增殖变化。结果特异性激活TGR5明显降低VSMCs增殖活力及Ki-67阳性细胞率,同时使VSMCs划痕愈合速度减慢。特异性激活TGR5使细胞内UCP2表达增加、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平降低。过氧化氢恢复细胞内ROS水平后,TGR5抑制VSMCs增殖迁移的作用被削弱。激活TGR5能减轻颈动脉损伤后内膜增生。结论TGR5可能通过UCP2改善细胞内氧化应激,从而抑制小鼠VSMCs的增殖和迁移。

透明质酸功能修饰聚乳酸取向超细纤维促进血管平滑肌细胞的迁移

基于稳定射流同轴电纺丝法(SJCES),选用透明质酸(HA)对电纺左旋聚乳酸(PLLA)取向超细纤维进行表面功能修饰得到壳-芯结构的取向纤维(HA-PLLA),以提高血管平滑肌细胞(vSMCs)在纤维表面的黏附和迁移能力。首先在无血清饥饿处理条件下观察HA促进vSMCs迁移的功效;然后采用扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、红外光谱仪(FT-IR)、X-射线衍射仪(XRD)和万能材料测试仪等对纤维形貌、壳-芯结构和力学性能进行表征;最后通过改良版“伤口”愈合实验检测HA-PLLA取向纤维诱导vSMCs迁移的功效。结果表明:HA具有显著促进vSMCs迁移的作用;SJCES法可成功制备HA-PLLA壳-芯取向纤维;HA修饰可显著提高PLLA取向纤维的细胞相容性,并增强其定向引导vSMCs迁移的能力,从而证实了HAPLLA取向纤维促进vSMCs迁移的有效性。

阿魏酸对血管内皮细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响

目的研究单体阿魏酸对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移的影响,并探讨相关机制。方法体外培养VSMCs,在血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导条件下,用单体阿魏酸进行干预,划痕实验、侵袭实验检测对VSMCs迁移的影响;PT-PCR检测对基质金属蛋白酶(matrix metal loproleinase,MMP)-2、MMP-9mRNA表达的影响;Western blot法检测对金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)-1、TIMP-2蛋白表达的影响。结果 (1)在VEGF诱导条件下,阿魏酸102、103ng/mL可抑制VSMCs的迁移;(2)阿魏酸102、103ng/mL可下调VEGF诱导的VSMCs MMP-9mRNA的表达;(3)阿魏酸102、103ng/mL均可上调VEGF诱导的VSMCs TIMP-2蛋白的表达。结论阿魏酸102、103ng/mL均可抑制VEGF诱导的VSMCs迁移,阿魏酸可通过抑制VEGF诱导的VSMCs MMP-9的表达,促进VEGF诱导的VSMCs TIMP-2的表达起到抑制VEGF诱导的VSMCs迁移的作用。

阿魏酸钠对血小板源生长因子和内皮素1诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响

为探讨阿魏酸钠对血小板源生长因子二聚体和内皮素 1诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响 ,采用组织块外生法体外培养血管平滑肌细胞 ,采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验 ,荧光染料Fura 2 /AM法测定细胞内游离钙离子浓度。结果发现 ,血小板源生长因子二聚体和内皮素 1均可诱导血管平滑肌细胞迁移 ,作用峰值浓度分别为 10 μg/L和 10 - 7mol/L。阿魏酸钠 (10 - 7～ 10 - 3mol/L)呈浓度依赖性抑制上述物质诱导的细胞迁移 ,10 - 3mol/L阿魏酸钠对血小板源生长因子二聚体和内皮素 1诱导的细胞迁移的抑制率分别为 85 .0 4 %和 81.92 %。血小板源生长因子二聚体和内皮素 1促进细胞内游离钙离子浓度升高 (P <0 .0 5 ) ,作用峰值浓度分别为 10μg/L和 10 - 8mol/L。阿魏酸钠明显抑制该作用 ,峰抑制率分别为 80 .14 %和 76 .6 9%。以上提示 ,阿魏酸钠可能通过抑制细胞内游离钙离子浓度的升高来抑制上述物质诱导的血管平滑肌细胞迁移。

阿魏酸对兔主动脉血管平滑肌细胞骨架F-actin的作用

目的:观察阿魏酸对兔血管平滑肌细胞骨架F-actin的作用。方法:兔血管平滑肌细胞用含20%灭活胎牛血清的高糖DMEM培养,在阿魏酸作用24h后,用鬼笔环肽标记细胞骨架蛋白F-actin后,用流式细胞仪检测荧光强度,用激光共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白的变化。结果:阿魏酸作用24h后,流式细胞检测结果显示,细胞骨架蛋白F-actin荧光强度明显减弱,与对照组比较,有显著性差异。激光共聚焦显微镜观察可见细胞形态明显变长,荧光减弱,与对照组比较,荧光密度减弱。结论:阿魏酸对兔血管平滑肌骨架蛋白F-actin的形成有抑制作用。

阿魏酸、绿原酸对血管平滑肌细胞黏附的影响

目的:研究单体阿魏酸、绿原酸对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)黏附的影响,并探讨相关机制。方法:体外培养VSMCs,用单体阿魏酸、绿原酸进行干预,检测其对VSMCs与基质的黏附、VSMCs之间的黏附的影响;PT-PCR检测对基质金属蛋白酶(matrix metal loproleinase,MMP)MMP-2、MMP-9 m RNA表达的影响。结果:(1)阿魏酸(102ng/m L、103ng/m L)、绿原酸(102ng/m L、103ng/m L)对VSMCs与基质的黏附无影响;(2)阿魏酸(102ng/m L、103ng/m L)促进了VSMC之间的黏附;(3)阿魏酸(102ng/m L、103ng/m L)可下调VSMCs MMP-9 m RNA的表达。结论:阿魏酸可促进VSMC之间的黏附,这种作用是通过抑制VSMCs MMP-9 m RNA的表达实现的。

阿魏酸钠抑制内皮素-1介导高血压病血管平滑肌细胞增殖的研究

目的 研究阿魏酸钠(SF)对高血压病患者血管平滑肌细胞(VSMC)在体外培养条件下内皮索-1(ET-1)介导增殖的影响。方法 采用体外培养的VSMC,选用3-8代VSMC分为:ET-1组;SF组;ET-1与SF组。在ET-1组中加入6个不同浓度的SF(0,20,40,80,100,120μg/ml),培养24h后用苔酚蓝法(MTT)和氚-胸腺嘧啶 核苷(3H-TdR)掺入法测定细胞含量及其培养液中一氧化氮(NO)。结果 SF可使细胞MTT含量和3H-TdR掺 入量明显减少,ET-1可使细胞MTT含量和3H-TdR掺入量明显增加。同时,SF可使ET-1所致的细胞MTT 含量增加和3H-TdR掺入量增加明显减少,并随SF含量增加而NO升高。结论 SF可抑制VSMC增殖,SF抑制 ET-1诱导VSMC增殖,并呈剂量依赖型。其作用可能与通过拮抗ET-1、增高NO活性有关。

水蛭素对高同型半胱氨酸大鼠血管平滑肌细胞的影响

目的:观察水蛭素对高同型半胱氨酸(Hcy)大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)的作用机制。方法:50只SD大鼠,采用随机数字表法分为正常组、模型组和水蛭素3个不同剂量组(25、50、100 AT-U/mL),每组10只。正常组予以普通饲料喂养,模型组及水蛭素组大鼠予以普通饲料及DL-蛋氨酸灌胃,造模21周,测血脂4项、血清Hcy,水蛭素组皮下注射水蛭素,2周后测血脂和Hcy,取胸主动脉组织。采用苏木精-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色观察胸主动脉组织病理变化及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶3(Caspase3)表达;实时荧光定量(RT-qPCR)检测Bcl-2、Bax和Caspase3的mRNA表达。结果:水蛭素各剂量组三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量显著降低(P<0.01),水蛭素高剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量显著升高(P<0.01);水蛭素各剂量组主动脉内膜增厚、VSMC增生减轻;水蛭素高、中剂量组胸主动脉组织Caspase3、Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白的表达减少,水蛭素各剂量组Caspase3、Bax的mRNA不同程度降低,Bcl-2的mRNA表达显著降低(P<0.01),水蛭素高剂量组对胸主动脉组织Caspase3、Bcl-2、Bax的mRNA的调控最佳。结论:水蛭素可能通过调节脂质、促进Hcy诱导下异常增殖的VSMC凋亡,延缓动脉粥样硬化进展,而且可以通过Caspase3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路有效促进高Hcy诱导的异常增殖的VSMC凋亡,为动脉粥样硬化的早期防治提供了新方向。

川芎有效成分阿魏酸对心血管的保护作用机制

阿魏酸(Ferulic acid,FA)是川芎的有效成分。研究发现,FA对心血管疾病具有很好的保护作用。在心脏,FA可以通过对抗氧化应激、调节自噬、抑制炎症和铁死亡等途径,减轻心肌缺血/再灌注(Ischemia/reperfusion,I/R)损伤。FA还可以减轻药物或环境毒素对心肌损伤。对于患有糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy,DCM)的小鼠,FA可以通过抑制炎症、上调抗氧化蛋白、改善能量代谢等途径,减轻心肌细胞损伤。此外,FA还可以通过调节肠道菌群等途径改善心功能,延缓心力衰竭进展。FA对血管的保护机制更为丰富。FA可以改善内皮依赖性血管舒张,促进血管生成,减轻辐射、炎症和高糖对血管内皮细胞损伤。此外,FA还可以抑制血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)的增殖和迁移,抑制内皮下脂质沉积。FA是一种天然抗氧化剂,它对心血管的保护机制主要是通过抗氧化实现的。结合网络药理学,FA可通过增加一氧化氮(Nitric oxide,NO)生物合成,激活细胞外信号调节激酶1/2(Extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)、缺氧诱导因子(Hypoxia inducible factor,HIF)-1α和抑制核因子κB(Nuclear factorκB,NF-κB)等信号通路,对心血管起到保护作用。FA很容易被人体吸收,又能够从尿液代谢排出,毒性低,使用比较安全。阿魏酸哌嗪分散片已经是上市的药品,一些临床实验表明,阿魏酸哌嗪分散片具有改善心血管疾病的良好功效。

L-精氨酸调节大鼠低氧性肺血管结构重建与肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的 :探讨L 精氨酸 (L arginine ,L Arg)对低氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 :将 17只Wistar大鼠随机分为对照组 (n =7)、低氧组 (n =5 )和低氧 +L Arg组 (n =5 )。对大鼠肺血管进行显微形态学观测。通过末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法 (TUNEL)检测肺动脉平滑肌细胞凋亡 ,并以免疫组织化学方法研究肺动脉平滑肌细胞Fas表达。结果 :低氧 2周后出现大鼠肺血管结构重建。同时 ,肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显低于对照组 (P均 <0 .0 5 ) ,平滑肌细胞Fas表达明显降低。然而 ,L Arg缓解了低氧性肺血管结构重建的形成。低氧 +L Arg组大鼠肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显高于低氧组 (P均 <0 .0 5 )。L Arg使低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞Fas表达明显增强。 结论 :L Arg通过使肺动脉平滑肌细胞Fas表达上调 ,促进肺动脉平滑肌细胞的凋亡 。

芥子酸对高糖诱导下大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨芥子酸对高糖诱导下大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和凋亡的影响及机制。方法:将培养的A7r5细胞随机分组处理,MTT法检测细胞活力,Brd U法检测细胞DNA合成,流式细胞术检测细胞周期进程和细胞凋亡,ELISA检测细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成,Western blot检测cyclin D1、P21和P27等蛋白的表达,以及蛋白激酶C(PKC)和P38的磷酸化水平。结果:与正常组比较,高糖组细胞活力显著升高,DNA合成加快,细胞周期加快,P21和P27表达降低,cyclin D1表达增加,ROS水平增加,细胞凋亡率降低,p-PKC和p-P38蛋白水平增加(P<0.05)。而芥子酸(0.1、1和10μmol/L)处理引起细胞增殖活性降低,DNA合成减弱,细胞周期受阻,P21和P27表达增加,cyclin D1表达降低,ROS水平降低,细胞凋亡率升高,p-PKC和p-P38蛋白水平降低,且呈一定浓度依赖性(P<0.05)。P38抑制剂SB203580和PKC抑制剂chelerythrine均显著抑制高糖诱导的PKC/P38活化和细胞活力(P<0.05)。结论:芥子酸可通过抑制PKC/P38激活降低高糖诱导的VSMCs增殖,并促进细胞凋亡。

同型半胱氨酸促进大鼠血管平滑肌细胞增殖和表型转化

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化和增殖的影响,以期为Hcy作为动脉粥样硬化(AS)独立危验因子的分子机制提供证据。方法:体外培养大鼠血管平滑肌细胞,用不同浓度的Hcy作用于细胞24h后:(1)MTT法测定细胞的增殖率;(2)流式细胞术检测细胞周期;(3)半定量RT-PCR法检测平滑肌22α(SM22α)mRNA的表达;(4)透射电镜观察VSMCs的形态学特征,确定其表型转换特征。结果:Hcy可导致细胞增殖率增加;G0/G1期细胞逐渐减少,S期细胞逐渐增多;SM22α mRNA表达下调,Hcy浓度增至1000μmol/L时差异显著;透射电镜显示,高浓度Hcy作用后VSMCs胞浆中内质网、高尔基复合体明显增多、胞核大、染色质疏松。结论:Hcy促进VSMCs增殖的同时可促进其表型的转化。

同型半胱氨酸抑制培养的大鼠血管平滑肌细胞牛磺酸转运

为了研究同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞牛磺酸转运的影响 ,采用培养的大鼠血管平滑肌细胞和3 H标记的牛磺酸 ,并测定血管平滑肌细胞牛磺酸转运。实验发现 ,同型半胱氨酸呈浓度依赖性抑制血管平滑肌细胞转运牛磺酸 ,1 0 0 μmol L和 50 0 μmol L同型半胱氨酸组血管平滑肌细胞牛磺酸转运的最大速率 (Vmax)较对照组分别降低 31 % (P <0 .0 5)和 51 % (P <0 .0 1 ) ,但组间Km值无显著差异 ;5mmol LH2 O2 亦抑制血管平滑肌细胞牛磺酸摄入 ,Vmax较对照组降低 48% (P <0 .0 1 ) ,但Km值增加 45 % (P <0 .0 1 ) ,其转运效率 (Vmax Km)较 50 0 μmol L同型半胱氨酸组更低 (3 .72± 0 .32比 5 .33± 0 .69,P <0 .0 1 )。 2 0mmol L牛磺酸和 50 0 μmol L同型半胱氨酸同时孵育 ,血管平滑肌细胞牛磺酸转运较 50 0 μmol L同型半胱氨酸组增加 ,Vmax增加 35 % (P <0 .0 5) ,两组间Km值亦无显著差异 ,转运效率增加 40 % (P <0 .0 5)。结果提示 ,同型半胱氨酸抑制血管平滑肌细胞牛磺酸转运 ,其机制不能用同型半胱氨酸产生过氧化物来解释 。

金属硫蛋白抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的 :研究金属硫蛋白 (MT)对同型半胱氨酸 (Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖的影响及其作用机制。方法 :以 [3H] -TdR掺入法测定VSMCs增殖程度 ,免疫沉淀法测定VSMCs内丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)活性 ,[1 0 9Cd] -血红蛋白饱和法测定MT含量 ,硫代巴比妥酸法测定丙二醛 (MDA)含量 ,NADH氧化法测定乳酸脱氢酶 (LDH)漏出量。结果 :Hcy(1 0 - 6 - 1 0 - 4mmol/L)呈浓度依赖性的刺激培养大鼠VSMCs [3H] -TdR掺入 ,0 1mmol/LHcy刺激 [3H] -TdR掺入比对照组高 4 2倍 (P <0 0 1 )。Hcy亦呈浓度依赖性地激活VSMCsMAPK活性、增加细胞MDA的生成和LDH的漏出 (P均 <0 0 1 )。单独MT孵育 ,对VSMCs的上述指标均无明显影响 (P >0 0 5)。但MT(1 0 - 6 - 1 0 - 4mol/L)呈浓度依赖性抑制 1 0 0 μmol/LHcy的促增殖效应 (r=0 98,P <0 0 1 )。MT显著抑制Hcy对VSMCs的MAPK活性、MDA生成和LDH漏出的激活作用 (均P <0 0 1 )。以 0 5mmol/LZnCl2 预孵育 6h后 ,VSMCsMT含量比非诱导细胞高 5 7倍 (P <0 0 1 ) ,这种内源性MT高表达的细胞 ,显著抵抗Hcy刺激的 [3H] -TdR掺入和MAPK激活 ;抑制Hcy的促细胞MDA生成与LDH漏出效应 (均P <0 0 1 )。结论

L-苯丙氨酸与血管平滑肌细胞增殖(英文)

本文用氚标胸腺嘧啶核苷掺入DNA合成法测定自发性高血压大鼠（SHR）与正常对照鼠的培养主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）增殖，观察L-苯丙氨酸对细胞增殖、细胞生长及原癌基因c-fos、c－myc表达的影响。结果显示：（1）L-苯丙氨酸剂量依赖性地抑制血清、碱性成纤维细胞生长因子及凝血酶诱导的DNA合成；（2）L-苯丙氨酸剂量依赖性地抑制细胞对血清的增殖反应；（3）L-苯丙氨酸抑制血清诱导的c－fos、c－myc的表达；（4）L-酪氨酸，L-组氨酸及D-苯丙氨酸不能产生类似L-苯丙氨酸的抑制作用。这些资料说明L-苯丙氨酸具有直接、特异性的抗VSMC增殖作用，提示L-苯丙氨酸在SHR大鼠中的抗高血压作用可能与血管平滑肌细胞增殖受抑有关。