不同间隔时间电针对佐剂性关节炎大鼠炎症局部前阿黑皮素和前脑啡肽原mRNA表达的影响

目的:观察不同间隔时间电针对佐剂性关节炎(AA)大鼠的镇痛效应,以探讨针刺镇痛的最佳间隔时间和作用机制。方法:将96只大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组再分为3 h、6 h、12 h和24 h小组,以Freund’s完全佐剂造成AA大鼠模型,电针选取悬钟和昆仑穴,分别以3 h、6 h、12 h和24 h作为治疗间隔时间,连续治疗6 d,以痛阈、炎症局部前阿黑皮素(POMC)mRNA和前脑啡肽原(PENK)mRNA表达作为观察指标。结果:间隔24 h电针能显著提高AA大鼠的痛阈;不同间隔时间电针均能促进炎症局部POMC mRNA和PENK mRNA的表达。结论:间隔24 h电针可明显提高对AA大鼠的镇痛效应;不同间隔时间电针镇痛效应与促进炎症局部阿片肽基因表达有关。

用非同位素原位杂交组化在光镜和电镜水平观察前阿黑皮素mRNA在垂体的分布

用地高辛标记反意前阿黑皮素(pro-opiomelanocortin,POMC)cRNA探针原位杂交组化在光镜和电镜水平观察了POMC mRNA在大鼠垂体的分布,并比较了碱性磷酸酶(AKP)显色系统和辣根过氧化酶(HRP)显色系统在光镜水平上的敏感性.结果:POMC mRNA广泛地分布于垂体的中间叶和前叶.中间叶全部细胞均为POMC mRNA阳性.前叶中除前叶的腹侧缘和前叶与中间叶交界处阳性细胞较少外,都有较多的POMC mRNA阳性细胞分布.AKP显色系统比HRP显色系统敏感.在电镜水平,POMC mRNA主要分布于粗面内质网,少数分泌颗粒可能呈阳性反应,胞核未见阳性反应沉淀.文内还就阳性分泌颗粒在调节细胞合成功能方面可能起的作用进行了讨论.

白芷总挥发油对疼痛模型大鼠的β-内啡肽、促肾上腺皮质激素、一氧化氮及前阿黑皮素的影响

目的 :探讨白芷总挥发油 (essentialoilofRadixAngelicaeDahuricae ,EOAD)对甲醛所致的伤害性疼痛模型大鼠的β 内啡肽、促肾上腺皮质激素 (ACTH)、一氧化氮 (NO)及前阿黑皮素 (Proopiomelanocortin ,POMC)的影响。方法 :分别采用放射免疫法测定 β 内啡肽、ACTH ,化学法测定NO的含量 ;并用原位杂交方法研究EOAD对前阿黑皮素信使核糖核酸 (POMCmRNA)基因表达的影响。结果 :EOAD能显著升高甲醛所致的伤害性疼痛模型大鼠下丘脑的 β 内啡肽、NO含量 ;使下丘脑、脑干POMCmRNA表达阳性细胞数大幅度增加 ;而对血中的ACTH没有影响。结论 :EOAD可能通过增加中枢POMCmRNA表达阳性细胞数和内源性镇痛物质含量 ,激活内源性镇痛机制而镇痛 ,其作用部位可能在中枢。

大鼠排卵前促性腺激素释放激素释放过程中下丘脑前阿黑皮素基因表达和雌激素受体的水平

在大鼠动情前期促黄体生成激素峰形成前后测定了血清雌、孕激素水平变化、下丘脑正中隆起促黄体生成激素释放激素含量及弓状核区雌、孕激素受体密度改变和弓状核前阿黑皮素ｍＲＮＡ水平变化。结果表明：动情前期１４小时时血清雌激素水平开始升高（Ｐ＜００５），于１６小时时达高峰。此时弓状核雌激素受体密度降低（Ｐ＜００５），孕激素受体密度增加（Ｐ＜００５），前阿黑皮素ｍＲＮＡ水平减少（Ｐ＜００５）。前阿黑皮素ｍＲＮＡ水平与血清雌激素及正中隆起的促性腺激素释放激素水平呈负相关（Ｐ值分别小于００１及００５），与弓状核雌激素受体密度变化呈正相关（Ｐ＜００１）。提示弓状核的前阿黑皮素ｍＲＮＡ水平在此过程中可能受雌激素及其受体调控，下丘脑β内啡肽合成减少可能参与了排卵前促性腺激素释放激素／促黄体生成激素峰的形成。

侧脑室注射Leptin对大鼠下丘脑前阿黑皮素mRNA表达的影响

给体重 180～ 2 0 0 g的雌性 SD大鼠侧脑室中注射重组瘦素 (L eptin) 1μg,采用 RT- PCR测定了其下丘脑前阿黑皮素 (POMC) m RNA和 L eptin受体 (OB- R) m RNA的表达水平。结果表明 ,注射重组 L eptin后 ,OB- R基因和 POMC基因表达量均上升 ,与生理盐水注射组、空白对照组相比差异显著 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。由此认为 ,L eptin在大鼠下丘脑

慢性束缚应激模型大鼠相关脑区前阿黑皮素基因表达的变化及中药复方的影响

目的 观察慢性束缚应激模型大鼠相关脑区 (下丘脑、垂体、海马、皮层 )前阿黑皮素 (POMC)mRNA含量变化以及中药逍遥散的影响。方法 用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和图像分析方法测定相关脑区POMCmRNA含量变化。结果 2 1d模型组较正常对照组POMC 1基因表达在四个脑区都显著下调且差异有统计学意义 ,疏肝药组较 2 1d模型组POMC 1基因表达在下丘脑和皮层显著下调 (P <0 0 1 ) ,在海马上调且差异有显著性 (P <0 0 5)。 2 1d模型组较正常对照组POMC 2基因表达在皮层区上调且差异有统计学意义 ,疏肝药组较 2 1d模型组POMC 2基因表达在皮层下调 (P <0 0 5)。结论 疏肝药组对慢性束缚应激中枢神经肽POMC的调节靶点在下丘脑、垂体、海马和皮层 ,充分证实疏肝药组对于POMC的调节靶点在下丘脑、边缘系统及皮层中枢等 ,推测疏肝药组同时有多靶点、双向调节 。

β-内啡肽中枢分泌及阿黑皮素神经肽释放的调控研究进展

β-内啡肽是阿黑皮素神经元以及主要位于垂体中叶的细胞裂解前体分子β-促脂解素产生的神经肽。β-内啡肽的作用涉及人体的许多行为和生理功能,并与许多疾病的发生和发展密切相关。本文综述β-内啡肽中枢分泌及阿黑皮素神经肽释放的调控研究进展。

电针对皮下肿瘤致痛大鼠的镇痛效应及对腰段脊髓背角前强啡肽原和前阿黑皮素原mRNA表达的干预

[目的]观察电针对皮下肿瘤致痛大鼠的镇痛效应及电针对癌痛大鼠腰段脊髓背角阿片肽前体m RNA表达的干预,初步探讨电针抗癌性痛的中枢阿片机制。[方法]雌性SD大鼠完全随机分为假手术组、手术组、电针治疗组和假电针治疗组,后3组以大鼠右侧足跖掌面皮下注射Walker256乳腺癌细胞悬液100μl(1×107cells/ml)建立大鼠皮下肿瘤癌痛模型,假手术组在同部位注入等量灭菌PBS。造模后1d电针治疗组介入电针治疗,连续治疗7d,而假电针组仅针刺破皮,连接电针仪但不通电。动态观察各组大鼠造模前(基础)、造模后1d、2d、4d、6d和8d甩尾潜伏期(Tail Flick latency,TFL)的变化。采用荧光定量PCR法检测腰段脊髓背角前强啡呔原(prodynorphin,PDYN)和阿黑皮素(pro-opiomelanocortin,POMC)m RNA的相对表达量。[结果]造模前各组大鼠TFL无统计学差异(P>0.05);造模后1d手术组、电针治疗组、假电针组大鼠TFL明显低于假手术组(P<0.01);电针治疗1、3、5、7次后即刻,电针治疗组大鼠TFL均显著高于手术组和假电针治疗组(P<0.05或P<0.01),且与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后各时间点,假电针组大鼠TFL始终显著低于假手术组(P<0.01),且与手术组大鼠比较差异无统计学意义(P>0.05)。与其余3组相比,电针治疗组大鼠患侧腰段脊髓背角PDYN m RNA表达呈上调趋势,但无统计学差异(P>0.05),POMC m RNA表达无显著差异(P>0.05)。[结论]电针对癌性痛有良好的即时镇痛效应,其机制可能与患侧脊髓背角PDYN m RNA及POMC m RNA表达量无关。

小鼠脑干交感运动前区前阿黑皮素能神经传入投射的实验研究

目的:研究脑干交感运动前区的前阿黑皮素能神经纤维的分布及其传入投射。方法:以免疫组化法检测前阿黑皮素能神经纤维在脑干交感运动前区的分布;将霍乱毒素B微量注入小鼠脑干交感运动前区进行逆行追踪。结果:α-MSH(α-melanocyte-stimulating hormone)能神经终末密集分布于交感运动前区内,同时则未见AgRP(agouti-related protein)能神经终末,显示交感运动前区仅接受前阿黑皮素(POMC)能神经的单向调节。逆行追踪实验显示脑干交感运动前区的POMC能纤维投射来自于下丘脑弓状核/视交叉后区,而非孤束核尾侧部;统计结果表明下丘脑弓状核/视交叉后区向脑干交感运动前区的神经投射中有近一半为POMC能投射。结论:小鼠下丘脑的POMC能神经元可直接投射到脑干交感运动前区,该神经通路在能量平衡的调节中可能发挥重要的作用。

热应激对大鼠中枢神经肽Y及阿黑皮素基因表达的影响

目的探讨不同时间的热应激对大鼠中枢HPA轴及外周血中热应激相关因子水平的影响。方法 36只雄性SD大鼠随机分为3组:对照组(24℃)、高温短时间组(38℃,1h)、高温中等时间组(38℃,6h)。经2周热暴露后,取大鼠脾脏、胸腺、垂体、下丘脑计算器官相对质量;酶联免疫吸附法测定血浆中皮质醇(Cor)、肾上腺素(EPI)及热休克蛋白70(HSP70)含量;实时荧光定量PCR测定下丘脑神经肽Y(NPY)及垂体阿黑皮素(POMC)的基因表达。结果高温中等时间组的垂体相对质量低于对照组,而下丘脑高于对照组(P均<0.05);两种高温组的Cor及EPI含量均高于对照组,高温中等时间组的HSP70含量高于对照组及高温短时间组(P均<0.05);两种高温组的NPY基因表达水平均高于对照组(P均<0.05),高温中等时间组的POMC基因表达水平高于对照组(P<0.05)。结论热应激可提高大鼠中枢神经肽Y及阿黑皮素的基因表达水平,与机体对外界环境变化的适应性反应有关。

针刀松解法对第3腰椎横突综合征大鼠下丘脑前阿黑皮素mRNA、前脑啡肽原mRNA表达的影响

目的:探讨针刀松解法治疗第3腰椎横突综合征的部分中枢镇痛机制。方法:SD雄性大鼠24只,随机分为正常组、模型组、针刀组及电针组。采用左侧第3腰椎横突尖部埋置明胶海绵法建立第3腰椎横突综合征模型,针刀组和电针组分别给予针刀松解和电针左侧"肾俞""腰阳关"治疗。应用原位杂交方法检测大鼠下丘脑前阿黑皮素(POMC)mRNA、前脑啡肽原(PPE)mRNA阳性细胞的表达。结果:造模后大鼠下丘脑POMC mRNA、PPE mRNA的阳性细胞表达较正常组增多(P<0.01),针刀组和电针组大鼠下丘脑POMC mRNA、PPE mRNA阳性细胞表达较模型组进一步增多(P<0.01)。结论:针刀松解法与电针可能通过促进下丘脑POMC mRNA、PPE mRNA的表达,参与其镇痛过程。

母鼠高脂饮食与运动干预对雄性子代胰岛素敏感性及下丘脑弓状核的影响

背景:肥胖母体的子代,有些代谢基因在某些环境影响下处于“沉默”状态,这些“沉默”的基因可能因后天环境的影响又被“唤醒”,继而引起代谢调控紊乱。目的:雄性子代在不同饮食结构的情况下,探索母鼠长期高脂和运动干预的代谢遗传效应。方法:3周龄雌性C57BL/6小鼠70只,随机分成高脂安静组与高脂运动组,干预16周后自然分娩。2组在4周哺乳期结束后,各随机抽取子代雄性小鼠16只,共32只分为4组:高脂安静-高脂组、高脂运动-高脂组、高脂安静-普食组、高脂运动-普食组,分别给予6周高脂喂养或普食喂养。子代在第10周进行葡萄糖耐量试验与胰岛素耐量试验,随后进行体成分分析及取材。肝脏蛋白免疫印迹测定p-Akt水平;下丘脑弓状核免疫荧光分析神经肽Y和阿黑皮素的表达情况。结果与结论:①在高脂饮食模式下,与高脂安静组相比,高脂运动组子代小鼠的糖代谢能力、体质量、体成分等都有显著性改善(P<0.05);②在普食饮食模式下,与高脂安静组相比,高脂运动组子代小鼠下丘脑弓状核的神经肽Y表达量显著下降(P<0.05),阿黑皮素表达显著上调(P<0.05),肝脏Akt(Ser473)磷酸化蛋白表达在胰岛素(-)的情况下无显著性差异,但在胰岛素(+)的情况下组间差异有显著性意义(P<0.05);③结果说明,子代在高脂模式下,母体长期运动获得的代谢保护效应可能会随着子代高脂暴露时间的延长而逐渐弱化;子代在普食模式下,母代长期的运动可以改善雄性子代能量代谢的中枢调控和胰岛素的敏感性。

芍药苷对UVB诱导的小鼠色素沉着的改善与调控机制研究

为探讨芍药苷对皮肤色素沉着的改善作用及调控机制,采用UVB反复诱导方法建立C57小鼠皮肤色素沉着模型,评价芍药苷抑制皮肤色素沉着的作用及对酪氨酸酶(TYR)、小眼畸形相关转录因子(MITF)、转运蛋白RAB27A (RAB27A)、前阿黑皮素(POMC)、碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)、干细胞因子(SCF)、白介素-1α(IL-1α)的表达水平的调控作用,同时利用分子对接法分析芍药苷与靶点之间的结合活性。结果表明:外用芍药苷降低了UVB诱导的C57小鼠的经皮失水率,皮肤组织切片中的表皮厚度和黑色素含量显著降低,皮肤组织中色素沉着相关的TYR、MITF、RAB27A蛋白的表达均极显著降低(P<0.01),黑色素细胞受体结合的旁分泌因子POMC、SCF、FGF2和炎症因子IL-1α的蛋白表达均极显著降低(P<0.01);分子对接结果显示,芍药苷对角质细胞分泌的POMC和SCF有极高的结合活性(活性总分值>7)。表明芍药苷可通过抑制旁分泌因子来抑制黑色素合成,发挥抑制皮肤色素沉着的作用。

不同间隔时间电针对炎症痛大鼠下丘脑阿片肽基因表达的影响

目的：观察累加电针对炎症痛大鼠模型不同间隔时间的镇痛效果，从而探讨针刺镇痛的最佳治疗间隔时间。方法：96只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和电针组，以佐剂性关节炎大鼠作为炎症痛模型。分别以3、6、12、24h作为电针治疗间隔时间。选用“昆仑”和“悬钟”穴，电针频率15～100Hz，疏密波，电压2～4V，留针20min。连续治疗6d后观测大鼠疼痛级别、痛阈、下丘脑前阿黑皮素和前脑啡肽原mRNA的表达。结果：电针组的疼痛级别明显低于模型组（P〈0．05），24h电针组的痛阈高于模型组（P〈0．01），各电针组下丘脑前阿黑皮素和前脑啡肽原mRNA表达的细胞数均明显高于模型组。在不同间隔时间电针治疗中，以间隔24h治疗更能明显降低炎症痛大鼠的疼痛级别并提高其痛阈，促进下丘脑前阿黑皮素和前脑啡肽原mRNA表达（P〈0．05或0．01）。结论：电针对炎症痛大鼠模型具有非常明显的镇痛作用，间隔24h重复治疗可显著提高其镇痛效果。

电针后不同时间佐剂性关节炎大鼠炎症局部阿片肽基因表达的变化

目的:从时效关系角度观察电针对佐剂性关节炎(AA)大鼠镇痛后效应随时间延续的变化规律,并探讨电针镇痛后效应的产生机制。方法:以Freunds完全佐剂造成AA大鼠模型,在电针治疗后1h、3h、6h、12h、24h和48h观测大鼠痛阈、炎症局部前阿黑皮素(POMC)和前脑啡肽(PENK)mRNA的表达。结果:电针治疗后1h、3h、6h、12h,大鼠的痛阈提高,炎症局部的POMC和PENKmRNA的表达增强。结论:电针对AA大鼠镇痛有明显的后效应,可延续12h以上,且后效应的产生与大鼠炎症局部的POMC和PENKmRNA表达增强有关。

仿真针刺对AA大鼠炎症局部β-内啡肽及POMC基因表达的影响

目的:从内源性阿片肽系统探索仿真针刺对佐剂性关节炎(AA)大鼠镇痛后效应的外周机制。方法:以AA大鼠为炎症疼痛模型,观察仿真针刺对外周内源性β-内啡肽(β-EP)系统的影响。结果:一次针刺治疗后,大鼠痛阈提高,β-EP含量及前阿黑皮素(POMC)基因转录水平升高,作用持续72h。结论:针刺镇痛后效应与炎症局部β-EP含量及POMC基因转录水平升高有关。

益气止血中药复方对脾不统血证大鼠脑组织POMC mRNA表达的影响

目的,观察益气止血中药对脾不统血证模型大鼠前阿黑皮素(POMC)基因表达的影响。方法:以原位杂交结合图像分析的方法检测大脑皮层、海马、下丘脑前阿黑皮素信使核糖核酸(POMC mRNA)的积分光密度和面积。结果:脾不统血证模型大鼠脑组织POMC mRNA的积分光密度和面积均较正常显著增强,益气止血中药复方对各部位POMC的基因表达均有下调作用。结论:益气止血中药复方对各部位POMC的基因表达均有较好的调节作用,表现出单纯用药的协同作用,且其作用也略强于阳性对照药归脾丸。

脑室内注射瘦素对大鼠迷走复合体瘦素受体表达的影响

目的探讨脑室内注射瘦素后大鼠迷走复合体瘦素受体(Ob-R)表达的变化。方法将SD大鼠24只随机分为对照组和瘦素干预1 h组(A组)、3 h组(B组)、5 h组(C组),每组6只。给药前1周行侧脑室置管,置管1周后无麻醉状态下对照组侧脑室注射生理盐水,A、B、C组侧脑室注射瘦素,剂量均为3.5μg/μL。实验结束后取脑组织,用HE染色进行迷走复合体定位,用免疫组化方法测定Ob-R在迷走复合体的表达。结果 A、B、C组Ob-R阳性细胞数分别为(12.49±1.66)、(12.54±2.16)、(12.89±1.86)个,对照组阳性细胞数为(5.66±1.04)个;A、B、C组Ob-R阳性细胞光密度积分分别为(28.41±3.60)、(26.18±6.17)、(24.56±4.14)分,对照组为(16.02±2.06)分;与对照组比较,A、B、C组Ob-R阳性细胞数、阳性细胞光密度积分增多(P均<0.05)。A、B、C三组间Ob-R阳性细胞数、阳性细胞光密度积分比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论瘦素中枢干预后可刺激迷走复合体上Ob-R的表达上调,瘦素刺激时间与Ob-R水平无关。

神经肽研究中若干问题的讨论

神经肽是一种具有生物活性并能参与神经信息传递的肽类物质,同一种神经肽按其分布不同可起递质、调质或激素样作用。近十多年来,神经生物学领域中最重要的进展之一是对神经肽的研究,并由此引伸出一系列新概念、新理论。虽然人们在这一领域中进行了十分热烈的研究。

针刀松解法对第三腰椎横突综合征模型大鼠脊髓背角POMCmRNA、PPEmRNA阳性细胞表达的影响

目的:观察针刀松解法对第三腰椎(L3)横突综合征大鼠脊髓背角前阿黑皮素(POMC)、前脑啡肽原(PPE)mRNA表达的影响,探讨其中枢镇痛机制。方法:选用SD雄性大鼠,随机分为4组:正常组、模型组、电针组、针刀组,后3组文献方法建立左侧L3横突综合征的动物模型,针刀组和电针组分别给予针刀松解和电针干预。造模28d后取材,应用mRNA原位杂交方法检测大鼠脊髓背角POMC mRNA、PPE mRNA阳性细胞的表达。结果:造模后,模型组大鼠脊髓背角POMC、PPE mRNA的阳性细胞表达较正常组显著增多,阳性强度显著增高(P<0.05,P<0.01),针刀组和电针组大鼠脊髓背角POMC mRNA、PPE mRNA阳性细胞表达较模型组显著减少,阳性强度显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:针刀松解法或电针可能通过调解脊髓背角POMC mRNA、PPE mRNA的表达,参与镇痛过程。