侧脑室注射瘦素对大鼠迷走复合体阿黑皮素原的影响

目的研究侧脑室注射瘦素对大鼠迷走复合体阿黑皮素原的影响,探讨瘦素是否同下丘脑弓状核一样也在迷走复合体对阿黑皮素原进行调节,从而发现瘦素在迷走复合体上发挥作用的可能路径。方法 SD大鼠36只,随机分为试验组和对照组,每组18只,试验组根据注射后处死的时间(1、3、5 h)分成3个亚组,每组6只。大鼠侧脑室留置不锈钢导管1周,自由恢复及驯养,实验动物在清醒状态下于侧脑室注射瘦素3.5μg/μl,对照组注射3.5μg/μl0.9%氯化钠溶液。苏木精-伊红染色定位迷走复合体,测定阿黑皮素原在该处的表达。结果中枢注射瘦素组大鼠侧脑室注射瘦素后1、3、5 h采用免疫组化检测迷走复合体上阿黑皮素原的表达阳性细胞计数、表达阳性细胞积分光密度与生理盐水和对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),中枢注射瘦素组1、3、5 h亚组组间迷走复合体上阿黑皮素原的表达阳性细胞计数、表达阳性细胞积分光密度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论侧脑室注射瘦素后不能引起迷走复合体上阿黑皮素原的增多。

安君宁对吗啡依赖大鼠伏隔核内前阿黑皮素原表达的影响

目的:研究安君宁对吗啡依赖雄性SD大鼠伏隔核内前阿黑皮素原表达的影响。方法:30只体重180-220g的雄性SD大鼠,设对照并建立吗啡依赖模型后随机均衡分为5组:淀粉正常对照组,吗啡戒断并安君宁治疗12d、30d组,吗啡戒断并淀粉治疗12d、30d组。吗啡依赖模型的建立采用剂量递增10日法(5mg/kg/次￣50mg/kg/次,2次/日,腹腔注射)。安君宁干预方法:灌胃1g/kg/次,2次/日;对照组灌等量的淀粉。各组大鼠按预定时间麻醉、灌注、留取脑组织。采用原位杂交技术测定伏隔核(NAs)内前阿黑皮素原(POMC)mRNA水平。结果:安君宁干预组与干预对照组相比,NAs内POMC mRNA水平显著增高(P<0.05)(吗啡戒断12、30d时,安君宁干预组NAs内POMC mRNA水平分别为0.34±0.11、0.51±0.13,干预对照组分别为0.33±0.17、0.39±0.15。(xs±)×10-2)。结论:安君宁能促进吗啡依赖大鼠伏隔核内前阿黑皮素原表达的恢复。

瘦素与前阿黑皮素原、胰岛素等因子关系的研究

瘦素是一种神经内分泌激素．具有调节诸多生理功能的作用。这些调节功能的实现主要是通过中枢神经系统和外周神经系统的作用来实现的。瘦素通过中枢神经系统的调节位点主要包括含有其受体的弓状核、腹侧正中下丘脑核、边下丘脑核和背中线下丘脑核等下丘脑位点。而下丘脑是调控机体摄食量、能量消耗和体重的中枢神经系统关键部位，除此之外，瘦素的调节与其他肥胖因子是相互联系的而不是孤立的，本文主要综述瘦素与其他肥胖因子的关系。

垂体和下丘脑阿黑皮素原基因表达的调节

近年来阿黑皮素原基因表达的调节受到广泛的研究。糖皮质激素和促肾上腺皮质激素释放激素分别抑制和促进垂体前叶阿黑皮素原基因的表达。多巴胺、γ-氨基丁酸对垂体中间叶阿黑皮素原基因表达有明显抑制作用。性激素可以调节下丘脑阿黑皮素原基因的表达,糖皮质激素、多巴胺等对下丘脑阿黑皮素原基因表达也有作用。

中华鲟阿黑皮素原cDNA序列克隆及其序列分析

通过构建中华鲟(Acipenser sinensis)垂体的SMART cDNA质粒文库,首次从文库中筛选得到阿黑皮素原(Proopiomelanocortin,POMC)cDNA全长序列,分别为阿黑皮素原A型基因(Proopiomelanocortin I,AsPOMC-A,EV824935)和阿黑皮素原B型基因(Proopiomelanocortin II,AsPOMC-B,EV825368)。其中,AsPOMC-A和AsPOMC-B分别在文库中出现128次和19次。AsPOMC-A全长1122 bp,有792 bp的开放阅读框,共编码264个氨基酸。AsPOMC-B全长1216 bp,有792 bp的开放阅读框,共编码264个氨基酸。以其氨基酸序列为分子标记,比较了3种鲟鱼的共6种POMC的氨基酸同源性,并利用已报道的鱼类的POMC氨基酸序列构建了系统发育树,可识别2个大的单系类群,即类群I:非新鳍亚纲类群(仅包含辐鳍亚纲的长吻雀鳝),类群II:新鳍亚纲类群。AsPOMC可能是一种进化上更原始的基因。

吗啡依赖及戒断大鼠下丘脑前阿黑皮素原mRNA的变化

目的··:观察大鼠吗啡依赖和戒断状态下脑内前阿黑皮素原 (POMC )mRNA的变化。方法·· :采用腹腔注射法 ,按剂量递增原则建立大鼠吗啡依赖动物模型 ,同时建立生理盐水对照组。吗啡依赖大鼠随机分为依赖组和戒断组。对照组和依赖组动物于末次注射后3h ,戒断组大鼠于末次注射后72h迅速断头处死取脑 ,收集各个脑区组织总RNA标本。以POMC反义RNA探针对得到的RNA标本进行NorthernBlot印迹杂交 ,用电子计算机图像处理系统对所得结果进行分析。结果·· :吗啡依赖大鼠下丘脑POMCmRNA的表达仅为生理盐水对照组的69.56%±s4.7 % ,戒断72h状态下的吗啡依赖大鼠下丘脑POMCmRNA的表达恢复至生理盐水对照组的78.26 %±s5.3 % ;海马、纹状体和垂体POMCmRNA表达均为阴性。结论··:吗啡依赖大鼠下丘脑POMCmRNA的表达较生理盐水对照组有显著下降 ,戒断72h状态下的吗啡依赖大鼠其下丘脑POMCmRNA的表达较依赖组大鼠有显著回升 ,但仍显著低于正常组水平。

冷环境和缺氧对大鼠阿黑皮素原衍生肽的影响

目的研究低温和低压缺氧复合因素对大鼠脑垂体和血浆阿黑皮素原衍生肽含量的影响。方法采用 56只健康成熟的雄性Wistar大鼠 ,分别在 1 0℃和 2 0℃条件下模拟上升至 3km和 5km高度 ,设2 5℃室温地面对照组。观察大鼠脑垂体和血浆阿黑皮素原衍生肽含量的变化。结果 2 0℃环境中 ,5km组血浆 β EP和ACTH含量显著高于地面对照组和 3km组 (P <0 .0 1 ) ,脑垂体 β EP的含量显著降低(P <0 .0 1 ) ;1 0℃环境中随高度升高 ,血浆β EP含量显著降低 (P <0 .0 1 ) ,脑垂体β EP的含量显著升高(P <0 .0 1 ) ,5km组血浆ACTH较地面对照组显著降低 (P <0 .0 1 )。2 0℃地面对照及各高度组血浆ACTH含量和 2 0℃ 5km组血浆β EP含量均显著高于 1 0℃相应高度组 (P <0 .0 1 )。结论 2 0℃条件下随着缺氧程度加深 ,血浆 β EP和ACTH升高 ;1 0℃条件下血浆 β EP降低 ,低压缺氧条件下 ,随着环境温度降低 ,血浆ACTH含量下降 ,将对体温调节产生重要影响。

大鼠下丘脑内前阿黑皮素原mRNA的老年变化

研究大鼠下丘脑内前阿黑皮素原（POMC）mRNA表达的老年变化，本实验采用SPraque－Dawley大鼠3月龄（青年组）和28～30月龄（老年组）各8只，利用地高辛标记POMC反义RNA探针进行原位杂交组织化学并行图象定量分析。结果：在青年组大鼠肉，OPMCmRNA阳性胞体主要分布于弓状核及其邻近区域；老年大鼠POMCmRNA胞体主要分布于弓状核的内侧，着色浅谈．与年轻大鼠相比，老年大鼠下丘脑内POMCmRNA神经元数量显著减少，（P＜0．01），胞体灰度值明显升高（P＜0．05），而胞体截面积略有增大，但差异无显著性（P＞0．05）。结果表明，大鼠下丘脑内POMCInRNA神经元有明显的老年变化，提示老年大鼠下丘脑POMC神经元胞体发生了衰老形态学改变，功能活动低下，细胞丢失，POMC的表达显著增加，生物合成功能紊乱。

锌对热应激大鼠POMC衍生肽的影响

大鼠喂饲高锌（ＨＺ）、中锌（ＭＺ）、低锌（ＬＺ）饲料２周后，在高温室（干球４０．５℃，湿球３０．８℃）连续暴露３ｈ，观察锌对阿黑皮素原（ＰＯＭＣ）衍生肽的影响。结果发现：（１）高温刺激可致垂体β－内啡肽（β－Ｅｐ）含量下降、血浆β－Ｅｐ和ＡＣＴＨ浓度升高；（２）在室温下摄入不同锌水平饲料可使大鼠血浆ＰＯＭＣ衍生肽浓度发生变化，高锌摄入有助于增加血浆β－Ｅｐ和ＡＣＴＨ水平，而低锌摄入则使血浆β－Ｅｐ和ＡＣＴＨ水平下降；（３）摄入不同锌水平大鼠经高温暴露３ｈ后，垂体β－Ｅｐ含量下降程度不同（ＨＺ组下降最少，ＭＺ组次之，ＬＺ组下降最多），血浆β－Ｅｐ和ＡＣＴＨ浓度升高也各异（ＨＺ组和ＭＺ组增高较少，ＬＺ组增加最多）。据此结果，还就锌对热应激鼠发挥保护作用的机制进行初步探讨，提出了锌增强机体热耐受能力的假说。

湖羊、东湖杂种羊POMC基因外显子3单核苷酸多态性及其与生长性状的关联分析

阿黑皮素原(Pro-opiomelanocortin,POMC)在动物采食和能量平衡调控中发挥重要作用,文章对绵羊POMC基因外显子3进行扩增和测序,筛选多态性位点,并分析多态位点与湖羊和东弗里生×湖羊杂种羊生长性状的相关性。测序后发现湖羊POMC基因外显子3有2个单碱基突变(g.273T/C和g.456G/A),根据273位点处发生的T/C突变,建立PCR-RFLP分析方法,并对162只湖羊和130只东湖杂种羊进行检测分析。结果发现,在湖羊群体中检测到TT(0.469)、TC(0.438)和CC(0.093)3种基因型,而在东湖杂种羊群体中仅检测到TT(0.754)和TC(0.246)两种基因型。POMC基因外显子3的273位点多态性与生长性状的相关性研究结果显示:湖羊群体中CC基因型个体的2月龄断奶重、4月龄尻高及TC基因型个体4月龄体长和管围均显著高于TT型个体(P<0.05);CC基因型个体的4月龄重、6月龄重极显著高于TT和TC基因型个体(P<0.01);CC基因型个体的4月龄体高和体长极显著高于TT型个体(P<0.01),且显著高于TC基因型个体(P<0.05)。此外,CC型个体的管围极显著高于TT基因型个体(P<0.01)。东湖杂种羊群体中TC基因型个体的2月龄断奶重、4月龄重及4月龄体高、体长、胸深和管围都显著高于TT型个体(P<0.05),TC型个体的6月龄重极显著高于TT型个体(P<0.01)。研究结果表明,POMC基因外显子3与绵羊生长性状相关,C等位基因对体重及体尺性状的增加更有利。该结果为进一步探讨POMC基因作为绵羊生长性状的辅助选育标记奠定了基础。

应激性胃溃疡大鼠前爪不同区域黑色素变化的ghrelin-POMC通路研究

目的探讨应激性胃溃疡大鼠前爪手掌不同区域黑色素变化及其机制。方法采用随机数字表法将20只SD雄性大鼠分为空白对照组、模型组,每组各10只,利用无水乙醇灌胃复制应激性胃溃疡模型后,利用多巴氧化酶检测两组大鼠前爪皮肤黑色素变化;用ELISA法检测两组大鼠血清ghrelin水平;用RT-PCR法检测两组大鼠胃黏膜组织ghrelin mRNA、垂体和前爪皮肤组织POMC mRNA水平。结果模型组大鼠5区的黑色素细胞明显增多;与空白对照大鼠比较,模型组大鼠的血清ghrelin水平及ghrelin mRNA降低,且差异有统计学差异(P<0.05);模型组大鼠的垂体和前爪皮肤组织POMC mRNA水平显著高于空白对照组(P<0.05)。结论应激性胃溃疡大鼠的病理变化可以在手掌特定区域通过黑色素的变化反映出来,初步推测其内在机制可能是通过作用于ghrelin-POMC通路实现的。

针刺足三里穴对冷应激性胃溃疡大鼠下丘脑与肾上腺SP和POMC表达的影响

目的:研究针刺足三里穴对冷应激性急性胃溃疡的保护作用,以及应激大鼠下丘脑和肾上腺SP和POMCmRNA的表达情况.方法:大鼠22只随机分成3组:正常对照组(6只)、单纯应激组(8只)、针刺预防应激组(8只).针刺预防组先给于针刺足三里穴,再冷应激.胃黏膜溃疡指数和RT-PCR法研究针刺足三里对大鼠的冷应激性溃疡的保护作用和下丘脑、肾上腺的SP、POMC的表达,经图像分析系统照相并进行半定量.结果:与单纯应激组比较,针刺足三里穴可以明显减少冷应激造成的溃疡指数(9.75±1.91vs26.25±4.40,P<0.01),抑制应激造成的皮质醇分泌增加(66.83nmol/L±12.25nmol/Lvs104.38nmol/L±8.31nmol/L,P<0.01),上调下丘脑的SP的表达(1.02±0.42vs0.45±0.12,P<0.05),下调肾上腺SP的表达(1.88±0.82vs2.93±1.08,P<0.05);下丘脑POMC在应激过程中表达增高,针刺能抑制POMC的表达,刺预防应激组与单纯应激组相比差异显著(0.56±0.14vs0.82±0.19,P<0.01);肾上腺中无POMC表达,不参与应激过程.结论:针刺对冷应激溃疡具有保护作用,该种保护作用是通过对生理性上调下丘脑SP的表达,下调POMC的病理性表达及抑制肾上腺SP而实现的.

鲇POMC cDNA的克隆与表达分析

采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)分离、克隆出鲇(Parasilurus asotus)垂体阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)基因全长cDNA序列,共1 099 bp,包括129 bp 5′非翻译区、648 bp阅读框以及322 bp 3′非翻译区,阅读框共编码215个氨基酸,POMC前体蛋白的结构主要由信号肽(Met1-Ala28)、N端多肽(Gln29-Asp102)、促肾上腺皮质激素(ACTH,Ser 105-Met144)、α-黑色素细胞刺激激素(α-MSH,Ser105-Val 117)、促肾上腺皮质激素样中叶肽(CLIP,Arg123-Met144)、γ-促脂解激素(γ-LPH,Glu145-Ser158)、β-黑色素细胞刺激激素(β-MSH,Asp161-Ser177)和β-内啡肽(β-EP,Tyr178-Leu215)构成。分子量计算值为24.66 kD,理论等电点为7.25。同源性分析表明鲇与斑点叉尾的相似性高达88%,其构成多肽中α-MSH、β-MSH、β-EP、CLIP保守性逐渐降低,而γ-MSH、连接肽(JP)、γ-LPH是变异比较大的区域,同时鲇POMC中不含有γ-MSH,连接肽和部分γ-LPH也不存在。生物信息学分析显示鲇POMC基因所编码的蛋白质以亲水性区域为主,具有丰富的B细胞抗原位点。定量分析结果表明POMC mRNA主要在垂体中高表达,在非垂体组织的脑中表达量最高,鳃、头肾、肝、脾、肌肉、皮肤等组织也有少量表达。

益气止血中药复方对脾不统血证大鼠脑组织POMC mRNA表达的影响

目的,观察益气止血中药对脾不统血证模型大鼠前阿黑皮素(POMC)基因表达的影响。方法:以原位杂交结合图像分析的方法检测大脑皮层、海马、下丘脑前阿黑皮素信使核糖核酸(POMC mRNA)的积分光密度和面积。结果:脾不统血证模型大鼠脑组织POMC mRNA的积分光密度和面积均较正常显著增强,益气止血中药复方对各部位POMC的基因表达均有下调作用。结论:益气止血中药复方对各部位POMC的基因表达均有较好的调节作用,表现出单纯用药的协同作用,且其作用也略强于阳性对照药归脾丸。

锌对热应激大鼠垂体POMC mRNA表达的影响

目的：通过锌对热应激大鼠垂体阿黑皮素原（ＰＯＭＣ）ｍＲＮＡ表达的影响研究，探讨锌对热应激大鼠的保护机理。方法：２０只ＳＤ雄性大鼠随机等分４组，即高锌高温暴露组（Ａ组）、中锌高温暴露组（Ｂ组）、低锌高温暴露组（Ｃ组）和正常锌室温对照组（Ｄ组）。在ＡＩＮ－９３Ｍ饲料配方基础上，以碳酸锌为锌源，配制成高锌、中锌、低锌和正常锌饲料，每公斤饲料锌含量测定值分别为９２．２ｍｇ、４５．６１ｍｇ、２１．７０ｍｇ和４５．６１ｍｇ。４组大鼠在室温下饲以相应饲料１４天后，将Ａ、Ｂ、Ｃ组大鼠置于高温室（Ｔｄｂ４０℃，Ｔｗｂ３０．８℃）中连续暴露３小时。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析法（探针为地高锌标记的ＰＯＭＣｃＲＮＡ），观察垂体ＰＯＭＣｍＲＮＡ表达水平。结果：（１）高温应激可使大鼠垂体ＰＯＭＣｍＲＮＡ表达水平增高；（２）高锌摄入可使热应激大鼠垂体ＰＯＭ－ＣｍＲＮＡ表达水平升高，而低锌摄入则相反。结论：锌对热应激大鼠垂体ＰＯＭＣ基因有调控作用。

电针对肥胖大鼠下丘脑POMC、AgRP蛋白和基因表达的影响

目的观测电针对肥胖大鼠下丘脑前阿黑皮素(POMC))和刺鼠相关肽(AgRP)蛋白、基因表达的影响,探讨针刺治疗肥胖的可能机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针组,每组10只。高脂饮食喂养造肥胖模型,造模成功后给予电针组动物足三里、丰隆、关元和中脘电针10 min,3次/周,总疗程为8周。每2周记录大鼠体质量和进食量;用Western Blot法检测大鼠下丘脑POMC、AgRP蛋白表达水平,用real-time PCR法检测大鼠下丘脑POMC、AgRP基因表达。结果与正常组大鼠相比,模型组大鼠的体质量从干预前到干预结束后均升高(P<0.05);进食量始终较高(P<0.01);下丘脑POMC蛋白、基因表达显著降低(P<0.01);下丘脑AgRP蛋白、基因表达显著升高(P<0.01);与模型组相比,干预4周后,电针组大鼠进食量显著低于模型组(P<0.01),且该差异一直持续至干预8周后;干预6周后,电针组大鼠体质量开始低于模型组(P<0.05);干预8周后,电针组大鼠体质量均显著低于模型组(P<0.01);电针组大鼠下丘脑POMC蛋白、基因表达显著升高(P<0.01);电针组大鼠下丘脑AgRP蛋白表达低于模型组(P<0.05),基因表达显著降低(P<0.01)。结论电针能够改善肥胖大鼠下丘脑食欲肽的蛋白和基因表达,上调下丘脑抑食欲肽POMC的蛋白表达和基因表达、下调下丘脑促食欲肽AgRP的蛋白表达和基因表达,明显降低肥胖大鼠的进食欲望,减少其进食量,控制体质量增长、改善肥胖状态,这可能是针刺改善肥胖能量代谢的中枢机制之一。

NPY和POMC基因在生长差异与饥饿再摄食鳙个体中的表达分析

为研究摄食促进基因和摄食抑制基因对鱼类生长调控和饥饿再摄食过程的影响,研究克隆了鳙神经肽Y(HynNPY)基因和前阿黑皮素原(HynPOMC)基因cDNA序列,采用qRT-PCR技术分析它们在生长显著差异鳙个体下丘脑、肠中的基因表达变化;设置对照组(连续投喂4周)、饥饿组、饥饿再摄食组,分析NPY和POMC在不同处理组鳙的下丘脑、肠中的基因表达变化。鳙NPY和POMC基因cDNA全长分别为839和799 bp,开放阅读框有291和657 bp,分别编码96和218个氨基酸。系统进化分析结果表明,鳙NPY和POCM基因具有高度保守性。鳙NPY在下丘脑的表达量最高,其次为肠和脑;POMC在肠道中的表达量最高,其次为下丘脑和肝脏。在相同环境下生长差异鳙个体的下丘脑和肠中,NPY在极大个体的表达量高于极小组个体,POMC在极小个体中的表达量高于极大个体。饥饿导致NPY在下丘脑表达上升,在肠表达量显著上升,恢复摄食后,NPY在下丘脑和肠中表达量下降;POMC在饥饿组下丘脑和肠中都表现为表达量呈显著上升,复投喂后POMC表达量逐步下降至接近对照组水平。肠组织学观察显示,极大个体的肠腔直径、肠绒毛长度、肠壁厚度均优于极小个体;饥饿胁迫导致的肠绒毛断裂、黏膜白细胞浸润等损伤能在再摄食后逐步恢复。研究结果表明,NPY促进摄取更多食物,POMC抑制食欲,二者共同参与鳙中枢神经和外周组织摄食调控,并可能通过影响摄食行为、营养吸收和GH分泌从而直接或间接调控鳙生长。研究结果对加深鳙生长调控分子机制的理解及遗传改良具有较大的理论和现实意义。

“剪切型X-盒结合蛋白1”与POMC神经元内质网应激导致的代谢失衡

＂剪切型X-盒结合蛋白1＂（spliced X-box binding protein 1,Xbp1s）是亮氨酸拉链蛋白家族成员,调控＂未折叠蛋白反应元件＂（unfolded protein response element,UPRE）的转录过程,参与蛋白质折叠和内质网构建。最近,美国德克萨斯大学西南医学中心Kevin W.Williams等研究人员发现了Xbp1s的一个新功能：Xbp1s可显著改善下丘脑神经元＂内质网应激＂（endoplasmic reticulum stress）导致的机体能量与糖稳态失衡。

miR-214-3p在骨质疏松大鼠弓状核表达变化中的初步研究

目的研究miR-214-3p在骨质疏松大鼠弓状核的表达,初步揭示其在骨质疏松发生发展中的作用。方法将4月龄雌性SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组6只,实验组行切除卵巢手术,对照组行假手术,常规饲养8周。应用苏木精-伊红染色法和骨形态计量学检测大鼠胫骨干骺端骨密度;生物信息学分析弓状核miR-214-3p作用的靶基因;荧光定量聚合酶链反应法测定大鼠弓状核阿黑皮素原mRNA表达水平以及弓状核、血清miR-214-3p表达水平;免疫组织化学染色法测定大鼠下丘脑弓状核阿黑皮素原表达强度。结果与对照组比较,实验组大鼠胫骨干骺端骨小梁数量、骨小梁厚度和骨小梁面积百分比均明显减小(均P<0.01),骨小梁分离度明显升高(P<0.01);实验组弓状核miR-214-3p表达水平升高(P<0.05),同时血清miR-214-3p表达水平明显升高(P<0.01);生物信息学分析显示miR-214-3p与阿黑皮素原具有良好的靶向关系;与对照组相比较,实验组弓状核阿黑皮素原mRNA的表达水平降低(P<0.05),弓状核阿黑皮素原蛋白表达强度明显降低(P<0.01)。结论骨质疏松大鼠弓状核miR-214-3p表达水平升高,可通过其自身或调控阿黑皮素原影响骨质疏松的发生发展。