小鼠附植前胚胎超薄切片的琼脂糖预包埋制备方法

将小鼠附植前胚胎分别经戊二醛-锇酸固定后,采取琼脂糖预包埋法使胚胎凝聚成团,然后对含胚胎的琼脂糖块进行脱水、渗透和包埋。结果显示,Epon812包埋块中的胚胎排列紧密,半薄切片胚胎的整体形态完整,胚胎超微结构保存良好。说明琼脂糖预包埋法是制备小鼠附植前胚胎超薄切片的有效方法。

热应激对小鼠卵母细胞和附植前胚胎及其生长内环境氧化损伤的影响

【目的】研究热应激对机体(肝脏)以及生殖系统氧化、卵母细胞和附植前胚胎氧化及发育能力的影响,探讨热应激影响卵母细胞及附植前胚胎发育能力的机制。【方法】分别用总谷胱甘肽和微量丙二醛测定试剂盒检测热应激后小鼠卵母细胞、附植前胚胎和组织器官内总谷胱甘肽(totalGlutathione,TGSH)、丙二醛(MDA)的含量,并且观察后续胚胎的发育情况。【结果】母体经35℃处理6和12h后,其体内的卵母细胞(6h)和发育至1～3d的胚胎(桑椹胚前期,12h)的后续胚胎发育率显著降低,胚胎中TGSH含量下降(P<0.01)、MDA含量升高(P<0.01),卵母细胞中二者的含量未有变化;发育至第4天、第5天的胚胎(桑椹胚和囊胚)中TGSH和MDA的含量及胚胎发育率均未有变化(P>0.05);发育至第1～5天的体外培养的胚胎分别经39℃处理12h后,胚胎中TGSH和MDA及其发育率均未有变化(P>0.05);随着热应激温度升高和时间的延长,肝脏和输卵管中TGSH显著降低、MDA显著升高;当温度达到41℃时,卵巢和子宫中TGSH显著降低、MDA显著升高。【结论】桑椹胚以前的胚胎遭受母体热应激后,发育能力降低,这与热应激所诱导的氧化损伤密切相关,但是母体热应激后卵母细胞后续胚胎的发育能力降低与氧化损伤无关。体外培养的胚胎经39℃处理12h后,对附植前胚胎氧化损伤和孵出率均无影响。

哺乳动物附植前胚胎的基因表达调控

哺乳动物胚胎附植前期包括:合子的形成,胚胎基因组的激活和细胞分化的开始。在这个时期,发育由母源物质控制转为合子基因控制,在此过程,同时形成染色质介导的转录抑制时期,要解除抑制必须经过胚胎基因组的激活。通过对体内、外附植前胚胎的mRNA的表达特点以及它们与成功发育联系的研究,可以筛选出最佳的体外培养条件,设计最佳的核移植方案。

体细胞共培养对猪附植前胚胎发育的影响

目前，动物胚胎体外生产技术已经相对成熟，包括卵母细胞的体外成熟（IVM）、体外受精（IVF）及早期胚胎的体外培养（IVC）等。因此，可以有效地利用屠宰场废弃的卵巢，大量、廉价地进行实验室生产胚胎，为早期胚胎发育机理、胚胎干细胞等的研究提供丰富的试验材料。然而，猪的早期胚胎体外培养仍存在囊胚发育率低、囊胚细胞数少、囊胚质量不高等问题，如何提高猪体外胚胎的囊胚发育率和囊胚质量是解决猪胚胎体外生产的关键因素。

DDRT-PCR技术在研究附植前胚胎基因表达中的应用

哺乳动物附植前胚胎的发育受相应基因的调控,在不同的发育阶段表达不同的差异基因,分离并克隆差异表达基因,有利于了解胚胎发育的分子机理.本文对mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)的基本原理、特点,单胚差异显示技术(SPEDDRT-PCR)在研究动物特定发育阶段表达的基因的优点,以及对不同种类动物早期胚胎在特定发育阶段表达的基因进展情况作了介绍.

哺乳动物附植前胚胎细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡是细胞为维持内环境稳定,更好地适应生存环境而主动形成的一种自我死亡过程,它涉及一系列基因的激活、表达及调控等作用。附植前的胚胎就已经观察到凋亡的发生,研究认为超出一程度的凋亡不利于胚胎的发育。作者主要对哺乳动物附植前胚胎发生凋亡的研究进行阐述,为改进体外培养体系、提高胚胎质量提供一定的理论依据。

附植前胚胎耐热应激损伤的MAPKs信号通路调控的研究进展

热应激(环境高温或热性疾病)致附植前胚胎发育阻滞/死亡是导致家畜(尤其是奶牛)夏季妊娠率低的主要因素,就热应激时附植前胚胎丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路的级联激活调节细胞增殖和分化,阻遏细胞凋亡,促进生长因子表达等研究和热应激时MAPKs信号通路对牛附植前胚胎的信号调控进行综述,重点阐述MAPKs通路对附植前胚胎的重要作用。通过对近年来国内外对附植前胚胎受热损伤和MAPKs信号通路的级联激活以及它们之间关联的研究进展的总结,并结合青岛农业大学产科实验室近年来对降低夏季由热应激引起的细胞凋亡的相关研究,来揭示附植前胚胎耐热应激损伤的MAPKs信号通路调控的研究进展。MAPKs信号通路在附植前胚胎的信号转导通路中占有重要位置。在热应激作用下,附植前胚胎经历氧化、凋亡和合成调节蛋白过程,胚胎能否存活,取决于其自身耐热能力及胚胎生存环境,并需要借助于信号通路的精细调控,不论是内因还是外因都可能通过MAPKs信号通路级联调控胚胎存亡。热应激时,MAPKs信号通路各成员在附植前胚胎中的生物学效应各不相同,并且相互联系,共同调控着附植前胚胎的分化、凋亡等过程,转导刺激信号,参与机体内的反应。热应激后胚胎细胞的生死取决于自身抗热能力(内因)和其在子宫/培养的生存环境(外因),并且内、外因素均与MAPKs信号转导通路有关。

DDRT-PCR技术在研究附植前胚胎基因表达中的应用

甘肃农业大学动物医学院张进隆等5位科研工作者根据哺乳动物附植前胚胎的发育受相应基因的控制。在不同阶段（发育阶段）有不同的差异基因，他们分离并克隆此差异表达基因，以了解胚胎发育的分子机理。他们应用mRNA差异显示技术（DDRT-PCR）的基本原理、特点，即一对细胞的总RNA反转录而成的cDNA模板、PCR高效扩增、

维生素E对附植前小鼠胚胎发育与一氧化氮生成的影响

为了探讨维生素E对一氧化氮(NO)的产生及其对早期胚胎发育的影响,用Griess试剂法检测了附植前小鼠胚胎中一氧化氮的生成情况.结果表明,附植前胚胎中有NO的产生,且从第1天到第3天有逐渐上升的趋势,第4天有所下降.用抗氧化剂维生素E处理后,NO的生成量下降,表明在附植前小鼠胚胎发育中维生素E对NO的产生可能起到一定的抑制作用.

热应激对小鼠附植前早期胚胎HSP70的诱导表达

选择超数排卵后怀孕昆明小鼠75只。以注射人绒毛膜促性腺激素（hCC）后的胚胎发育阶段为标准，分别在合子、2细胞、4细胞、8．16细胞和囊胚期对孕鼠进行了37℃、39℃、41℃和43℃热应激4h。热应激后取胚，用免疫荧光细胞化学法检验胚胎热休克蛋白70（HSP70）的诱导表达。结果表明，HSP70在4细胞以上胚胎内星阳性表达，相对高温时其表达量增加，囊胚时最显著。可见，附植前早期胚胎HSP70的热诱导表达与细胞期和温度密切相关。