Ca^(2+)信号途径参与稻瘟病菌分生孢子萌发及附着胞形成的调控

为了确定Ca2+信号途径是否参与、在哪一时期参与稻瘟病菌分生孢子萌发及附着胞形成过程的调控,用四种可从不同位点阻断Ca2+信号途径的抑制剂分别处理分生孢子,观察抑制剂对孢子萌发及附着胞形成过程的抑制作用。结果表明:Ca2+螯合剂EGTA、Ca2+通道抑制剂Verapamil、抑制磷脂酶C活性的抑制剂U-73122、影响钙调素与钙调素依赖蛋白激酶作用位点的抑制剂KN-93,随着浓度的增加,对孢子萌发和附着胞形成过程的抑制作用明显增强;同一浓度下,抑制剂对附着胞形成过程的抑制作用大于孢子萌发过程;抑制剂影响孢子萌发和附着胞形成过程在萌发早期(1~4h)最有效;在完全被抑制、不能萌发的孢子内出现了许多颗粒状囊泡;抑制剂可使附着胞形态明显变小甚至不能形成。以上结果表明钙信号途径参与了稻瘟病菌孢子萌发及疏水条件下附着胞形成过程的调控。

影响茶花炭疽病孢子萌发与附着胞形成的因子

采用载玻片检测法,对碳氮源、温度、pH和光照等因子对孢子萌发与附着胞形成的影响进行研究。结果表明,供试碳氮源中,茶花炭疽菌孢子萌发的最佳碳源为葡萄糖、最佳氮源为酵母提取物;碳源对附着胞形成的影响不显著,而所有氮源均抑制附着胞的形成。孢子萌发和附着胞形成的最适温度同为20℃;最适pH为中性偏酸。孢子萌发的最佳光照条件为先进行12 h光照培养、再进行12 h黑暗处理;自然光条件下附着胞形成率最高。可见不同外界因子对茶花炭疽病病原菌孢子萌发和附着胞形成的影响不同,对该病害发病机理与侵染机制的研究,需要进一步结合致病性试验进行深入研究。

萘乙酸对橡胶树胶胞炭疽菌生长速率、孢子萌发率和附着胞形成率的影响

橡胶树炭疽病是影响橡胶树割胶生产的重要病害之一,主要由胶孢炭疽菌和尖孢炭疽菌侵染引起的,在世界各大植胶地区引起了无数橡胶树叶片脱落,甚至整株死亡,给当地的橡胶产业发展造成了严重损失。本实验主要采用菌落生长速率法、孢子萌发测试法等常规植物病理学方法研究萘乙酸对橡胶树胶胞炭疽菌RC169生长速率、孢子萌发率和附着胞形成率的影响。结果表明,低浓度时萘乙酸对RC169菌丝生长、孢子的萌发和附着胞的形成具有促进作用,但随着用药浓度的升高,其促进作用变为抑制作用,且抑制作用随之规律性增强。

Alternaria alternata菌群的菌丝融合及附着胞形成的研究

Ａｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅｒｎａｔａ菌群的菌丝融合及附着胞形成的研究＊黄思良（广西农业科学院，南宁５３０００７ＳＴＵＤＩＥＳＯＮＨＹＰＨＡＬＡＮＡＳＴＯＭＯＳＩＳＡＮＤＡＰＰＲＥＳＳＯＲＩＡＬＦＯＲＭＡＴＩＯＮＩＮＡＬＴＥＲＮＡＲＩＡＡＬＴＥＲＮＡ...

温湿度对芒果炭疽病病原菌分生孢子萌发及附着胞形成的影响

测定了温、湿度对芒果叶片上的胶孢炭疽菌分生孢子萌发及附着胞形成的影响。结果表明,胶孢炭疽菌分生孢子在12-37℃范围内均可萌发,且形成附着胞,适宜温度24-28℃。接种6 h后,附着胞开始形成,9-12 h为附着胞形成高峰期;分生孢子在相对湿度90%-100%范围内均可萌发,且形成附着胞。相对湿度越高越有利于分生孢子萌发及附着胞的形成。

玉米大斑病菌孢子萌发和附着胞形成的影响因素研究

Factors of influence on conidium germination and appressorium formation of Setosphaeria turcica,such as light condition,conidial concentration,nutrient resources and pH value of conidial suspension were studied.There was no significant difference among light treatments.The optimal pH for conidium germination and appressorium formation was 5.0 to 7.0.The exogenous nutrient sources were not the indispensable factors for conidium germination,but 5% sugar solution were more favorable for appressorium formation than the others.Low conidial concentration in suspension(conidia ≤104/mL)was propitious to conidium germination and appressorium formation,which were inhibited significantly in higher concentration.It was suggested that the phenomenon was due to the self-inhibitor,a kind of lipophilic substance,existing in the site of conidium germination.

橡胶树胶胞炭疽菌对乙烯利敏感性初报

【目的】探讨植物生长调节剂乙烯利对橡胶树胶胞炭疽菌生长速率、孢子萌发和附着胞形成的影响,为橡胶树炭疽病防治提供新途径。【方法】以橡胶树胶胞炭疽菌RC169为供试菌株,利用菌丝生长速率法、孢子萌发法等常规植物病理学方法测定浓度为50.00、25.00、12.50、6.24、3.12和0 g/L的乙烯利处理对RC169菌丝生长的影响,以及浓度为0、0.2、0.4、0.8、1.6和3.2 g/L的乙烯利处理对RC169孢子萌发、附着胞形成等的影响。【结果】参试梯度浓度(50.00、25.00、12.50、6.24、3.12和0 g/L)乙烯利对RC169生长的抑菌率分别为98.6%、88.1%、34.7%、25.0%、8.1%和0,相应回归方程为y=2.9157x+1.9585,R2=0.9518;参试梯度浓度(0、0.2、0.4、0.8、1.6和3.2 g/L)乙烯利下RC169孢子萌发率分别为92.20%、36.70%、20.60%、12.30%、2.63%和0,相应线性回归方程为:y=-1.3945x+7.0663,R2=0.6803,RC169附着胞形成率分别为90.50%、5.37%、3.13%、1.10%、0和0,对应线性回归方程为:y=-1.7383x+6.7965,R2=0.8493。【结论】在一定浓度范围,乙烯利对橡胶树胶胞炭疽菌菌丝生长、孢子萌发、附着胞形成均具有抑制作用,且随着乙烯利浓度的升高,其抑制作用随之增强。

枯草芽孢杆菌菌株A抗菌蛋白的分离纯化及抗真菌机理

【目的】揭示生防菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株A产生的抗真菌蛋白的性质及作用机理。【方法】采用硫酸铵沉淀菌株A发酵液获粗蛋白;采用DE52离子交换层析技术对粗蛋白进行分离纯化;对具抗真菌活性的纯化组分采用MALDI-TOF-MS进行结构分析;以玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)为材料,对纯化活性蛋白的抗真菌机理进行研究。【结果】从粗蛋白中分离到一种抗真菌活性蛋白(FV),与RNA结合蛋白Hfq Bacillus subtilis subsp.subtilis gi|16078797的匹配率为86.484%,相对分子质量为8 508.5 Da,等电点为8.04。FV对玉米小斑病菌孢子萌发的半数抑制浓度(IC50)为138.32μg.mL-1,附着胞形成的IC50为22.23μg.mL-1。经FV处理后,玉米小斑病菌菌丝顶端、中部出现膨大泡囊,呈"念珠状";扫描电镜观察发现泡囊状菌丝表面凹凸不平,并残留有碎片;透射电镜观察发现在部分菌丝细胞原生质出现"空泡"的菌丝里有"子菌丝"。【结论】枯草芽孢杆菌菌株A产生的抗真菌蛋白与RNA结合蛋白Hfq高度同源,可抑制致病真菌孢子萌发、附着胞形成,并影响菌丝细胞的形态和结构。

海南省3种油茶炭疽病菌的致病力及其生物学特性研究

为了弄清海南省不同油茶炭疽病菌致病力差异及生物学特性,采用刺伤接种法对3种油茶炭疽病菌(C.fructicola、C.siamense、C.camelliae)的致病力进行测定,发现不同病原间致病力存在显著差异,其中C.fructicola致病力最强,C.siamense致病力次之,C.camelliae致病力最弱。对3种炭疽病菌生物学特性研究发现,3种病菌最适生长温度、p H值及光照条件类似,同时均可利用多种碳、氮源,但不同病菌生长的最优碳源、氮源有一定差异。C.fructicola的产孢量、分生孢子萌发率及附着胞形成率均高于C.siamense及C.camelliae。不同油茶炭疽病菌生物学特性的差异可能与其致病力分化有关。本研究结果将为进一步研究不同油茶炭疽病菌致病差异机制提供理论依据。

植物提取物对黄瓜炭疽病菌的抑制作用

目的寻找新型的植物源杀菌剂,对黄瓜炭疽病的有效防治具有重要的理论意义。方法选用34种植物的80%乙醇提取物(储藏期为6个月),采用生长速率法和水洋菜平板表面萌发法,测试其对黄瓜炭疽病菌(Colletotrichumlagenarium)的抑制作用。结果供试提取物在质量浓度为0.01g/ml条件下,甘草、枸杞、金钱草等11种植物的80%乙醇提取物对黄瓜炭疽病菌分生孢子萌发的抑制率大于60%,其中甘草的抑制作用最强,达99.6%;12种提取物对黄瓜炭疽病菌菌丝生长的抑制率大于50%;15种提取物对黄瓜炭疽病菌附着胞形成抑制率达50%。结论大部分植物提取物对测试病菌具有一定程度的抑制作用,只有极少数提取物对病菌的菌丝生长、分生孢子萌发、附着胞形成等不同的发育阶段均表现出强烈的抑菌效果,与对照达极显著差异。

钙信号途径参与小斑病菌致病过程的调控

为确定Ca2+信号途径与玉米小斑病菌致病过程的相关性,用可从不同位点阻断Ca2+信号转导途径的抑制剂分别处理小斑病菌的分生孢子,结果表明:Ca2+螯合剂EGTA、Ca2+通道抑制剂Verapam il、影响钙调素与钙调素依赖蛋白激酶作用位点的抑制剂KN-93,随着浓度的增加,对孢子萌发和附着胞形成过程的抑制作用明显增强;同一浓度下,抑制剂对附着胞形成过程的抑制作用大于孢子萌发过程;抑制剂可使附着胞形态明显变小甚至不能形成。以上结果表明钙信号途径参与了玉米小斑病菌主要致病过程的调控。

香蕉黑星病菌侵入前发育的Ca^(2+)/CaM依赖信号研究

测定Phyllosticta musarum在不同疏水性的人工表面上的孢子萌发率和附着胞形成率,以及Ca2+/CaM依赖信号系统是否参与了P.musarum侵入前阶段的发育调控。结果表明,P.musarum在侵染寄主时形成一种专门的附着胞作为侵染结构,刚性的疏水表面有利于诱导P.musarum分生孢子的萌发。刚性表面则有利于附着胞的形成,而对这种与侵染相关的特化结构即附着胞的发育影响不显著。加入外源Ca2+,不论浓度如何都能促进分生孢子萌发,而附着胞形成率在高浓度外源Ca2+存在时则明显下降。Ca2+敖合剂EGTA有抑制孢子萌发和附着胞形成的作用,但在EGTA中加入Ca2+载体A23187和CaCl2可部分缓解EGTA的这种抑制作用。磷酸酯酶C(PLC)抑制剂Neomycin可以抑制附着胞形成。Ca2+通道阻断剂TMB-8和Nicardipine,CaM拮抗剂Chloropromazine在微摩尔剂量水平上均可抑制附着胞形成。证明由Ca2+/CaM信号系统控制的生化过程参与了P.musarum在寄主香蕉表面侵入前的形态建成。

抗真菌单体组分DZP8对水稻纹枯病菌和稻瘟病菌的抗菌作用(英文)

在离体条件下研究了链霉菌702菌株所产抗真菌单体组分DZP8对水稻纹枯病菌菌丝的生长、菌核的形成及萌发,以及对稻瘟病菌菌丝的生长、分生孢子的形成及萌发、附着胞的形成的影响。结果表明,抗真菌单体组分DZP8对水稻纹枯病菌和稻瘟病菌均具有较强的抑制作用,其对水稻纹枯病菌和稻瘟病菌菌丝生长抑制的EC50和EC90分别为1.81、3.35和37.01、136.21g/ml;在48.01g/mlDZP8处理下,菌核形成率仅为39.21%,形成时间比对照延迟216h,干重比对照减少81.37%;33.51g/mlDZP8显著抑制菌核的萌发;160.08g/mlDZP8处理下稻瘟病菌产孢量仅为对照的9.29%,20.14g/mlDZP8对分生孢子萌发的抑制率为95.16%,对附着胞形成的抑制率则可达100%

抑制辣椒炭疽菌的生防芽孢杆菌菌株筛选和鉴定

从植物根际土壤分离筛选获得的芽孢杆菌C-D6菌株对辣椒炭疽菌(Colletotrichum capsici)显示明显的抑制作用.通过形态观察、16S r DNA序列同源性分析以及tet B-tet L基因特异序列扩增,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).实验结果表明:C-D6菌株在PDA平板上对辣椒炭疽菌、尖孢镰刀菌、苞叶芋柱帚霉和烟草疫霉等多种重要植物病原真菌具有明显的拮抗作用.显微观察发现:C-D6菌株的细菌培养液对辣椒炭疽菌的附着胞形成具有强烈的抑制作用.表明该菌株对辣椒炭疽菌引起的炭疽病的生物防治具有潜在的应用价值.

稻瘟病菌单克隆抗体2B4的研究

从230个具有ELISA阳性反应的细胞株获得了11株具有高效价的单克隆抗体, 其中2B4显示较强结合作用,并均能与分生孢子、芽管和附着胞表面结合。Western blotting分析表明,单抗2B4能与孢子芽管表面的1%SDS提取物中的15kDa的蛋白结合。免疫金定位发现该蛋白确是在病菌各个形态阶段广泛存在的分泌性蛋白。采用2B4从分生孢子cDNA表达文库中筛选获得6个阳性克隆。该克隆MP1表达的蛋白抗原与实际存在的15KDa是相一致的。其基因克隆及功能分析正在研究之中。

稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)的凋亡诱导和检测

使用低浓度H2O2和高浓度NaCl诱导稻瘟病菌的凋亡,检测了产生的凋亡特征。结果显示:诱导后稻瘟病菌具有典型的凋亡特征,如胞内活性氧累积、磷脂酰丝氨酸从细胞膜的内表面转移到外表面、染色体浓缩和DNA断裂。进一步研究发现:凋亡关键性酶类caspase的抑制剂Z-VAD-FMK能够显著影响稻瘟病菌的孢子萌发和附着胞形成过程。典型的稻瘟病菌孢子由3个细胞组成;在Z-VAD-FMK的作用下,2个以上细胞同时萌发产生芽管的比例由34.1%增加到66.0%,同时形成附着胞的源细胞也以顶端细胞为主转变为以基部细胞为主。这些结果说明凋亡参与了稻瘟病菌的孢子萌发和附着胞形成过程。

油茶(Camellia oleifera)果生刺盘孢菌(Colletotrichum fructicola)Hog1基因功能和致病性分析

为了探讨Hog1基因在油茶果生刺盘孢菌(Colletotrichum fructicola)致病过程中的作用。本研究以酿酒酵母中的Hog1基因为依托,进行BlAsTP比对分析油茶果生刺盘孢菌的全基因组数据,以获取与其高度同源的Hog1蛋白序列,通过对ATMT体系进行改进和调整,建立了炭疽病菌基因敲除体系。采用形态观察、显微鉴定、生物学表型分析方法,基于科赫法则(Koch postulates),检测病原菌的致病力大小。结果表明,本试验成功敲除了C.fructicola野生型菌株CFLH16 Hog1基因,发现突变体菌株ΔC.f Hog1与CFLH16相比,其产孢量显著下降,且无法形成附着胞,基本丧失致病能力;ΔC.f Hog1对盐胁迫(NaCl)与CFLH16相比其敏感性显著降低,对细胞壁胁迫(SDS)和过氧化物胁迫(H2O2)与CFLH16相比其敏感性不明显。研究发现C.f Hog1基因编码的蛋白质是果生刺盘孢菌生长发育过程中一个重要蛋白,参与调控病菌的附着胞形成、致病过程以及对外界胁迫的应答。本试验针对油茶炭疽病害的功能基因进行探索,为油茶病害分子机制研究提供了参考依据,为进一步实现油茶病害有效调控的目标打下了基础。