β3肾上腺素能受体mRNA在肥胖倾向型小鼠附睾脂肪垫中表达上调

目的:观察肥胖倾向型小鼠附睾脂肪垫中β3肾上腺素能受体(β3-AR)mRNA水平。方法:通过高脂饮食诱导肥胖倾向小鼠模型,正常饮食组作为对照(n=8),高脂饮食组(n=8)饲喂5周,鉴定为肥胖倾向型小鼠,获得附睾脂肪垫组织。逆转录和半定量聚合酶链反应(SQ-PCR)法分析β3-AR mRNA的表达,GAPDH mRNA为内参照。结果:肥胖倾向型和非倾向型小鼠脂肪垫β3-AR/GAPDH mRNA比分别为1.98±0.34和1.19±0.26,肥胖倾向型小鼠附睾脂肪垫β3-AR mRNA的表达水平上调具有统计学意义(P<0.01)。结论:β3-AR与脂肪代谢密切相关,可望作为治疗干预人类肥胖和Ⅱ型糖尿病的潜在靶点。

血管性血友病因子基因敲除可抑制高脂喂养小鼠附睾脂肪的含量和炎症反应

目的探讨血管性血友病因子(von Willebrand Factor,vWF)对高脂饮食诱导的肥胖及内脏脂肪含量、组织炎症的影响。方法 16只8周大雄性WT小鼠随机分为普通饮食组(WTNC)、高脂饮食组(WT HFD),16只8周大vWF基因敲除小鼠随机分为普通饮食组(vWFKONC)、高脂饮食组(vWFKOHFD),一共四组,每组8只,普通饮食组给予普通饲料喂养,高脂饮食组给予60%高脂饲料喂养。12周后对比各组小鼠体重、附睾脂肪含量及附睾脂肪的病理形态和炎症表达水平。结果相较于普通饮食,高脂饮食可显著增加WT、vWF基因敲除小鼠的体重及附睾脂肪含量;而对比高脂饮食vWF基因敲除和高脂饮食WT小鼠,发现前者的体重、附睾脂肪含量均明显小于后者[体重:(30.44±0.60) g vs (43.74±0.78) g,附睾脂肪含量:(1.14±0.11) g vs (3.01±0.04) g,P值均<0.05],进一步对上述2组附睾脂肪组织进行HE病理分析,发现前者附睾脂肪中"王冠样结构"[1]的数量少于后者,且附睾脂肪RT-PCR分析显示前者MCP-1、TNF-α、IL-β和IL-6的表达均低于后者(P值均<0.05)。结论 vWF基因敲除可抑制高脂饮食小鼠的体重增长和附睾脂肪含量,同时可降低脂肪组织炎症水平。

穴位埋线对肥胖小鼠附睾脂肪组织巨噬细胞极化的影响

目的:观察"足三里""丰隆"穴位埋线对肥胖小鼠附睾脂肪组织巨噬细胞极化的影响,探讨穴位埋线减重的作用机制。方法:从30只雄性C57BL/6小鼠中随机选取10只予普通饲料喂养,剩余20只予高脂饲料喂养制备肥胖模型。将造模成功的16只小鼠随机分为模型组和埋线组,每组8只,从普通饲料喂养的小鼠中随机选取8只作为正常组。造模成功次日,埋线组于"足三里""丰隆"穴行穴位埋线,每10天1次,共治疗4次。比较各组小鼠干预第0、8、16、24、32、40天的体质量及干预后糖代谢水平。干预结束后,比较各组小鼠脂代谢水平和附睾脂肪组织质量;HE染色法观察各组小鼠附睾脂肪组织形态;实时荧光定量PCR法检测小鼠附睾脂肪组织M1和M2型巨噬细胞相关细胞因子白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)的mRNA表达;实时荧光定量PCR法和Western blot法检测小鼠附睾脂肪组织M1型巨噬细胞表面标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和M2型巨噬细胞表面标志物精氨酸酶1(Arg-1)mRNA和蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠干预第0、8、16、24、32、40天体质量均增加(P<0.05);葡萄糖耐量实验0、30、60、120 min及胰岛素耐受实验0、30、60、90、120 min血糖均高于正常组(P<0.05);总胆固醇和三酰甘油水平明显高于正常组(P<0.001,P<0.01);附睾脂肪组织质量明显高于正常组(P<0.001);附睾脂肪组织IL-6、MCP-1、TNF-α及iNOS mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001),IL-10、Arg-1 mRNA表达降低(P<0.01),iNOS蛋白表达上调(P<0.01),Arg-1蛋白表达下调(P<0.001)。与模型组比较,埋线组小鼠在干预16、24、32、40天体质量降低(P<0.05);葡萄糖耐量实验30、60、120 min及胰岛素耐受实验30、60 min血糖均低于模型组(P<0.05);总胆固醇和三酰甘油水平低于模型组(P<0.01,P<0.05);附睾脂肪组织质量明显低于模型组(P<0.01);附睾脂肪组织IL-6、MCP-1、TNF-α、iNOS mRNA表达降低(P<0.05),IL-10、Arg-1 mRNA表达升高(P<0.05),iNOS蛋白表达下调(P<0.05),Arg-1蛋白表达上调(P<0.01)。结论:"足三里""丰隆"穴位埋线可能通过影响巨噬细胞的极化而发挥减重作用。

β-石竹烯通过上调PPARγ/PGC-1α/UCP1通路促进肥胖小鼠白色脂肪棕色化作用

目的探究β-石竹烯(BCP)对肥胖小鼠白色脂肪棕色化的作用及其机制。方法雄性昆明小鼠高脂饮食辅以丙硫氧嘧啶生理盐水溶液[14.4 mg/(kg·d)]腹腔注射建立肥胖小鼠模型。肥胖模型小鼠随机分为模型组(Model组)和BCP给药组(BCP-50组),正常饮食小鼠设为对照组(Control组),每组8只。BCP给药组按50 mg/kg早晚灌胃给药各一次,其余组用吐温80水溶液灌胃,持续4周。4周给药结束后进行口服糖耐量实验,实验结束禁食过夜后处死小鼠,快速收集血液样本和脂肪组织用于后续实验检测。试剂盒检测血清学相关指标;苏木精-伊红染色观察脂肪组织形态;免疫组化染色观察脂肪组织解偶联蛋白1(UCP1)表达;Western blot检测附睾白色脂肪(eWAT)中过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂1-α(PGC-1α)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、UCP1和大麻素受体2(CNR2)蛋白的表达。结果与Model组相比,BCP-50组肥胖小鼠的体质量显著减轻(P<0.05),摄食量减少(P<0.01),胰岛素抵抗得到改善(P<0.0001),肥胖小鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和非酯化脂肪酸(NEFA)含量降低(P<0.0001和P<0.01),总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量无明显变化。此外,BCP-50组肥胖小鼠的脂肪系数和eWAT比重降低(P<0.05);eWAT和BAT中脂肪细胞减小,UCP1蛋白表达升高(P<0.01和P<0.05);除了UCP1外,BCP-50组肥胖小鼠eWAT中PGC1α、PPARγ和CNR2蛋白的表达水平也明显升高(P<0.01,P<0.05和P<0.001)。结论BCP通过上调PPARγ/PGC-1α/UCP1通路表达促进白色脂肪棕色化,从而改善肥胖。

小鼠THBS1基因敲除改善内脏脂肪免疫微环境并抑制结直肠癌腹腔种植转移

目的探究血小板反应蛋白1(thrombospondin-1,THBS1)基因敲除对结直肠癌免疫微环境与肿瘤进展的作用。方法构建THBS1基因敲除小鼠,经PCR、琼脂糖凝胶电泳明确小鼠基因型。用THBS1基因野生型(THBS1^(+/+))与THBS1基因敲除(THBS1^(-/-))小鼠构建结直肠癌皮下荷瘤与腹腔种植转移模型,观察THBS1基因敲除对小鼠肿瘤生长情况的影响。用流式细胞术检测腹腔种植转移模型中THBS1基因敲除后对结直肠癌附睾脂肪中免疫细胞的变化。结果与THBS1^(+/+)小鼠相比,THBS1^(-/-)小鼠在结肠癌皮下荷瘤模型中肿瘤生长没有差异(P>0.05),而在腹腔种植转移模型中则显著抑制肿瘤生长(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与THBS1^(+/+)小鼠相比,THBS1基因敲除后腹腔种植转移模型小鼠的附睾脂肪组织中总巨噬细胞比例增高(P<0.01),其中M1型(经典型或促炎型)巨噬细胞比例升高(P<0.01)、M2型(替代活化型或抗炎型)巨噬细胞比例下降(P<0.01);髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)比例下降(P<0.05),其中Ly6C亚群(P<0.01)比例升高,Ly6G亚群比例降低(P<0.05);CD8+T细胞比例显著升高(P<0.01)、CD4^(+)T细胞比例降低(P<0.01)。与THBS1^(+/+)小鼠相比,THBS1基因敲除小鼠外周血总巨噬细胞、M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞比例均无变化(P>0.05);MDSC及ly6C亚群比例无变化(P>0.05),ly6G亚群比例降低(P<0.05);CD8^(+)T细胞比例显著降低(P<0.05)、CD4+T细胞比例无变化(P>0.05)。结论THBS1基因敲除通过增强肿瘤免疫抑制结直肠癌细胞腹腔种植转移。

非受体酪氨酸激酶Src在异丙肾上腺素介导 脂肪分解中的作用

目的研究非受体酪氨酸激酶肉瘤病毒蛋白(Src)在异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠脂肪分解中的作用。方法将10周龄的雄性C57BL/6野生型小鼠分成3组:对照组、ISO组和ISO+吡唑并嘧啶类化合物(PP1)组。检测各组小鼠的附睾脂肪重量,苏木精和伊红(HE)染色观察脂肪细胞大小;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)技术检测附睾脂肪组织中脂肪分解基因--脂肪组织三酰甘油脂肪酶(ATGL)及脂肪合成基因--过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和脂蛋白脂肪酶(LPL)的mRNA表达。3T3-L1脂肪细胞处理分为3组:对照组、ISO组和ISO+PP1组。蛋白免疫印迹法检测不同处理条件下Src的磷酸化变化。结果动物实验结果显示,与对照组相比,ISO组小鼠的附睾脂肪重量减少,脂肪细胞大小显著降低(均为P<0.001);qPCR结果显示,与对照组相比,ISO组脂肪分解基因ATGL的mRNA表达显著增加(P<0.05),脂肪合成基因PPARγ和LPL的mRNA表达显著减少(均为P<0.01)。此外,在动物实验中我们证实了Src在脂肪分解中的作用,结果显示与ISO组比较,ISO+PP1组小鼠的附睾脂肪重量(P<0.05)及脂肪细胞大小(P<0.001)均明显增加;qPCR结果显示,与ISO组相比,ISO+PP1组脂肪分解基因ATGL的mRNA表达下降(P<0.01),脂肪合成基因PPARγ(P<0.01)和LPL的mRNA表达上升。细胞实验结果表明,ISO能显著增加Src的磷酸化(P<0.05),且可被PP1有效抑制(P<0.01)。结论在实验动物体内,ISO诱导脂肪分解依赖Src激酶活性。

利用FACS定量研究脂肪组织中肥大细胞的数目

肥胖会导致脂肪组织中各种免疫细胞数量的失衡,肥大细胞(MCs)在肥胖个体的脂肪组织中数量明显增多,而MCs稳定剂木犀草素(LU)可以降低高脂饮食小鼠附睾脂肪组织(EAT)中MCs的数量,并改善肥胖和胰岛素抵抗的发展。此前的研究是利用甲苯胺蓝染色半定量EAT中MCs数量的变化。甲苯胺蓝染色的特异性和统计精密度都存在一定的欠缺,为了更精确地研究在肥胖过程中脂肪组织中MCs数量的变化,文章建立了高精密度的流式细胞荧光分选(fluorescence activated cell sorting,FACS)技术,并研究了低脂、高脂和高脂补充LU组小鼠EAT中MCs变化情况。FACS分析定量结果显示,MCs在高脂饮食诱导下明显升高,而饮食补充LU可以明显降低MCs的数目。另外,EAT中MC蛋白酶的定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结果也支持了FACS分析的结果。因此,利用FACS分析脂肪组织中MCs数目的精确变化,为进一步研究MCs在肥胖中的作用机制提供技术支持。