利用FACS定量研究脂肪组织中肥大细胞的数目

肥胖会导致脂肪组织中各种免疫细胞数量的失衡,肥大细胞(MCs)在肥胖个体的脂肪组织中数量明显增多,而MCs稳定剂木犀草素(LU)可以降低高脂饮食小鼠附睾脂肪组织(EAT)中MCs的数量,并改善肥胖和胰岛素抵抗的发展。此前的研究是利用甲苯胺蓝染色半定量EAT中MCs数量的变化。甲苯胺蓝染色的特异性和统计精密度都存在一定的欠缺,为了更精确地研究在肥胖过程中脂肪组织中MCs数量的变化,文章建立了高精密度的流式细胞荧光分选(fluorescence activated cell sorting,FACS)技术,并研究了低脂、高脂和高脂补充LU组小鼠EAT中MCs变化情况。FACS分析定量结果显示,MCs在高脂饮食诱导下明显升高,而饮食补充LU可以明显降低MCs的数目。另外,EAT中MC蛋白酶的定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结果也支持了FACS分析的结果。因此,利用FACS分析脂肪组织中MCs数目的精确变化,为进一步研究MCs在肥胖中的作用机制提供技术支持。

β-石竹烯通过上调PPARγ/PGC-1α/UCP1通路促进肥胖小鼠白色脂肪棕色化作用

目的探究β-石竹烯(BCP)对肥胖小鼠白色脂肪棕色化的作用及其机制。方法雄性昆明小鼠高脂饮食辅以丙硫氧嘧啶生理盐水溶液[14.4 mg/(kg·d)]腹腔注射建立肥胖小鼠模型。肥胖模型小鼠随机分为模型组(Model组)和BCP给药组(BCP-50组),正常饮食小鼠设为对照组(Control组),每组8只。BCP给药组按50 mg/kg早晚灌胃给药各一次,其余组用吐温80水溶液灌胃,持续4周。4周给药结束后进行口服糖耐量实验,实验结束禁食过夜后处死小鼠,快速收集血液样本和脂肪组织用于后续实验检测。试剂盒检测血清学相关指标;苏木精-伊红染色观察脂肪组织形态;免疫组化染色观察脂肪组织解偶联蛋白1(UCP1)表达;Western blot检测附睾白色脂肪(eWAT)中过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂1-α(PGC-1α)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、UCP1和大麻素受体2(CNR2)蛋白的表达。结果与Model组相比,BCP-50组肥胖小鼠的体质量显著减轻(P<0.05),摄食量减少(P<0.01),胰岛素抵抗得到改善(P<0.0001),肥胖小鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和非酯化脂肪酸(NEFA)含量降低(P<0.0001和P<0.01),总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量无明显变化。此外,BCP-50组肥胖小鼠的脂肪系数和eWAT比重降低(P<0.05);eWAT和BAT中脂肪细胞减小,UCP1蛋白表达升高(P<0.01和P<0.05);除了UCP1外,BCP-50组肥胖小鼠eWAT中PGC1α、PPARγ和CNR2蛋白的表达水平也明显升高(P<0.01,P<0.05和P<0.001)。结论BCP通过上调PPARγ/PGC-1α/UCP1通路表达促进白色脂肪棕色化,从而改善肥胖。

非受体酪氨酸激酶Src在异丙肾上腺素介导 脂肪分解中的作用

目的研究非受体酪氨酸激酶肉瘤病毒蛋白(Src)在异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠脂肪分解中的作用。方法将10周龄的雄性C57BL/6野生型小鼠分成3组:对照组、ISO组和ISO+吡唑并嘧啶类化合物(PP1)组。检测各组小鼠的附睾脂肪重量,苏木精和伊红(HE)染色观察脂肪细胞大小;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)技术检测附睾脂肪组织中脂肪分解基因--脂肪组织三酰甘油脂肪酶(ATGL)及脂肪合成基因--过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和脂蛋白脂肪酶(LPL)的mRNA表达。3T3-L1脂肪细胞处理分为3组:对照组、ISO组和ISO+PP1组。蛋白免疫印迹法检测不同处理条件下Src的磷酸化变化。结果动物实验结果显示,与对照组相比,ISO组小鼠的附睾脂肪重量减少,脂肪细胞大小显著降低(均为P<0.001);qPCR结果显示,与对照组相比,ISO组脂肪分解基因ATGL的mRNA表达显著增加(P<0.05),脂肪合成基因PPARγ和LPL的mRNA表达显著减少(均为P<0.01)。此外,在动物实验中我们证实了Src在脂肪分解中的作用,结果显示与ISO组比较,ISO+PP1组小鼠的附睾脂肪重量(P<0.05)及脂肪细胞大小(P<0.001)均明显增加;qPCR结果显示,与ISO组相比,ISO+PP1组脂肪分解基因ATGL的mRNA表达下降(P<0.01),脂肪合成基因PPARγ(P<0.01)和LPL的mRNA表达上升。细胞实验结果表明,ISO能显著增加Src的磷酸化(P<0.05),且可被PP1有效抑制(P<0.01)。结论在实验动物体内,ISO诱导脂肪分解依赖Src激酶活性。