附睾蛋白酶抑制蛋白的研究进展

附睾蛋白酶抑制蛋白(Eppin)基因是最近克隆到的一种人类和小鼠附睾和睾丸中特异性表达的基因。Epp in蛋白是一种富含半胱氨酸同时含有乳清酸蛋白(WAP)和牛胰蛋白酶抑制蛋白(BPTI)结构域的分泌蛋白,它与精子成熟和生殖有关,此外还参与了人类附睾的天然免疫系统。针对Epp in蛋白的免疫避孕是一种有效和安全的方式,但还需进一步验证它的安全性。本文就Epp in的生殖和免疫功能及在免疫避孕中的应用进行综述。

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾中CRES蛋白表达的影响

目的：研究青春期大鼠实验性左侧精索静脉曲张（ELV）对睾丸和附睾中胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生（CRES）蛋白表达的影响，探索精索静脉曲张导致不育的机制。方法：建立青春期雄性SD大鼠ELV模型，采用免疫组化及蛋白印迹方法检测CRES蛋白在ELV2周组（n=8）、4周组（n=8）及其相应的对照组（n均=5）大鼠睾丸和附睾头、体、尾中的表达变化。结果：免疫组化显示，CRES蛋白在ELV实验组和对照组大鼠睾丸和附睾中均有表达。在睾丸中，CRES蛋白主要定位于圆形和长形精子细胞的胞质、精子的顶体以及残余体中，其表达与生精周期密切相关，I～Ⅲ和Ⅸ～XⅣ期表达最强，Ⅶ～Ⅷ期表达次之，Ⅳ～Ⅵ期表达减弱。在附睾中，CRES蛋白主要表达于从附睾起始段到尾部的上皮主细胞的胞质中，且以体、尾部表达最强，头部次之，管腔分泌物也呈阳性表达。实验组比对照组CRES蛋白表达增强。Western印迹显示：实验组和对照组大鼠睾丸和附睾在相对分子质量（Mr）为19000和14000处均可见CRES蛋白条带，其中以M．19000处表达更为明显。实验组CRES蛋白的表达比对照组明显增强。对免疫组化和Western印迹结果进行灰度值和积分吸光度值（IA）测定，并经统计学分析显示：ELV2周组和4周组比其相对应的对照组表达增强且差异有显著性（P〈0．05或P〈0．01），而ELV各组问未见CRES蛋白表达有明显差异（P〉0．05）。结论：CRES蛋白在大鼠睾丸和附睾中均有表达，睾丸中表达呈现生精周期特异性和细胞特异性，附睾中表达呈现附睾上皮区段和细胞特异性；CRES蛋白在青春期ELV大鼠睾丸和附睾中的表达比对照组明显增强。这些结果提示CRES蛋白在精子发生和精子成熟过程中可能起着重要的作用，并且可能与ELV引起的不育或生育力低下有关。

人Eppin基因的原核表达及抗原性鉴定

目的构建人附睾蛋白酶抑制蛋白(epididymal protease inhibitor,eppin)基因原核表达质粒,表达并纯化重组蛋白,并探讨其抗原性及应用价值。方法以健康人睾丸组织cDNA为模板进行PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pET-32a,并转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,经Ni^(2+)-NTA亲和层析柱纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定。结果重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后证实构建成功;SDS-PAGE结果显示表达产物为相对分子质量36KD的融合蛋白,Western印迹检测纯化后蛋白显示特异性条带。结论成功构建了pET-32a-Eppin重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Eppin蛋白,为进一步研究其生物学活性及免疫性避孕效应奠定了基础。