陈化烟叶中纤维素降解菌群的分离及其特性研究

从陈化烟叶中分离到具有降解纤维素活性的菌群,分析了温度、pH和纤维素材料对菌群酶活性的影响,采用16S rDNA片段的PCR-DGGE(变形梯度凝胶电泳)技术分析菌群组成。结果显示,菌群主要由5种细菌组成。20℃时菌群纤维素酶活性很低,随着温度升高酶活性升高,在60℃时纤维素酶活性达到最高值,继续升温则酶活性下降。pH从3升高到8时,菌群纤维素酶活性不断增大,pH为8时酶活性达到最大,pH继续升高到9时则酶活性下降。菌群对烟叶、滤纸和烟梗中的纤维素都有降解作用,在以烟叶作为纤维素材料培养菌群时,纤维素酶活性明显高于滤纸和烟梗。陈化过程中微生物可能对烟叶纤维素有降解作用,从而影响烟叶的陈化效果;可以利用分离到的菌群在烟叶或烟梗发酵中降解纤维素,改善烟叶或烟梗的品质。

陈化烟叶中1株果胶酶高产菌的分离、筛选与鉴定

烤烟中的高果胶含量严重影响烟草吸食品质和陈化速度。为降低烟草中的果胶含量,提高烟草及烟草制品的品质及安全性,从不同年份和不同产地的18份复烤烟草中共分离筛选出有降解果胶能力的细菌38株和真菌9株。其中,XC-8、XC-30、SMXP-57、SMXP-58、SMXP-62共5株细菌具有较高的降解果胶的能力,在发酵时间24 h、发酵温度30℃、接种量10%条件下果胶酶活性分别为176、179、143、192、121 U/mL。其中,菌株SMXP-58酶活性最高(192 U/mL),通过16S r DNA序列分析并结合形态、理化特性分析,确定SMXP-58菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。将SMXP-58菌株制成的菌剂(9.6×107个/mL)喷施于100 g烟叶表面,发酵3 d的烟叶评吸总分提高了1.02,进一步优化发酵条件,在发酵时间60 h、菌液量1 mL、水量20 mL的条件下,烟叶中果胶含量最低(7.45%)。

陈化烟叶表面可培养寡营养菌多样性分析

通过低浓度营养培养基分离4种不同陈化烟叶表面的微生物,经过连续2-4周的培养,共获得55株不同的菌株,通过16S rDNA扩增和测序进行初步的分子鉴定后,进行BLAST比对分析,挑选每个菌株最大一致性的同源菌株16S rDNA序列一起进行系统聚类分析。结果表明,陈化烟叶中微生物存在着广泛的多样性,每种烟草中都拥有自己独特的微生物菌群,存在大量的兼性寡营养菌,专性寡营养菌较少,而且烟叶的品种和等级直接影响到微生物的种群和数量。

浏阳洞库陈化烟叶微生物多样性分析

【目的】为研究浏阳洞库3个不同香型陈化烟叶样品微生物多样性和群落组成差异。【方法】利用高通量测序对3个不同香型陈化烟叶样品微生物多样性、群落组成进行显著性差异分析,构建各样品微生物生态网络,并对各细菌群落进行功能预测。【结果】(1)浏阳洞库3个不同香型陈化烟叶样品中细菌物种丰富,在门水平上主要由变形菌门和厚壁菌门组成,在属水平上微生物群落主要由鞘氨醇单胞菌属、丁酸杆菌属、假单胞菌属、黄单胞菌属、不动杆菌属、泛菌属、芽孢杆菌属和短波单胞菌属组成;(2)浏阳洞库3个不同香型陈化烟叶样品微生物多样性和群落组成均存在显著差异,清香型陈化烟叶的微生物群落更为丰富,Buttiauxella、黄单胞菌属、泛菌属、甲基杆菌属、鞘氨醇菌属和Kebplela显著增加,微生物之间相互作用的关系更为复杂,浓香型陈化烟叶的微生物生态网络更稳定。(3)陈化烟叶微生物菌群的化能异养功能、发酵功能占主导地位,这也是微生物在烟叶陈化过程中发挥的主要功能。【结论】陈化烟叶样品细菌物种丰富,不同香型陈化烟叶微生物群落多样性和组成有显著差异,清香型烟叶的微生物群落更为丰富,微生物菌群的化能异养和发酵功能占主导地位。本研究为陈化烟叶的研究提供了微生物信息,为后续作用机制研究、菌种资源开发奠定了基础。

陈化烟叶细菌区系的高效分离及增殖技术研究

对陈化烟叶的细菌区系进行高效分离及扩增,获得最适助分离剂和分离条件,选取在玉溪陈化,等级为WDC3F的K326烟叶为试验材料,使用4种不同的助分离剂对陈化烟叶细菌区系进行了分离,同时对分离的细菌区系进行了培养增殖,利用可培养和免培养法对培养前后的细菌区系多样性进行了评价和分析。结果表明,以1‰SDS为助分离剂对陈化烟叶细菌区系进行分离,分离率相对于传统方法提高了489.58%。培养温度为15℃时,使用烟叶浸液培养基不仅可使烟叶表面细菌总量增殖约100倍,而且可以较好地保留区系的多样性。免培养分析表明,培养增殖前后的细菌区系结构存在一定差异,但其细菌群落代谢功能并没有显著差异,这表明扩增后的细菌区系仍然具备了原细菌区系的生理功能。本研究探索并建立了陈化烟叶细菌区系的高效分离方法,为陈化烟叶微生物资源的开发提供了理论基础。

不同陈化烟叶叶面高温微生物多样性

以国内外不同品种、不同陈化时间的10个烟叶样品为材料,对其叶面高温微生物进行了分离纯化、鉴定和多样性研究,以了解表面高温微生物在烟叶陈化发酵中的作用.结果表明：陈化烟叶表面高温菌总量为103~105个/g,高温细菌占绝对优势,真菌很少,未能分离到放线菌和酵母菌;高温细菌主要包括芽孢杆菌属（Bacillus）和地芽孢杆菌属（Geobacillus）两个属,芽孢杆菌属为优势菌属;高温霉菌主要包括青霉属（Penicillium）和曲霉属（Aspergillus）,曲霉属为优势菌属.国内外烟叶表面微生物种类和数量有所差异,与陈化时间和烟叶品种等因素有着密切关系.

不同前处理方法对陈化烟叶致香成分测定的影响

采用同时蒸馏萃取(SDE)、顶空固相微萃取(HS-SPME)、吹扫捕集-热脱附(P&T-TD)3种前处理方法结合气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析陈化烟叶致香成分的种类和含量的差异。结果表明,吹扫捕集-热脱附法所得致香成分129种,同时蒸馏萃取法所得致香成分105种,顶空固相微萃取法所得致香成分101种;从所得烟叶主要致香成分的种类分析,吹扫捕集-热脱附法适合分析低沸点醛类、酮类、烯烃类等易挥发性组分,同时蒸馏萃取法适合分析挥发性、半挥发性的酮类、醇类、酯类及高沸点难挥发酸、酯类组分,顶空固相微萃取法适合分析挥发性、半挥发性酮类、酯类、低碳分子酸等组分;从方法的重现性分析,进行6次平行试验,同时蒸馏萃取法所得致香成分TIC总峰面积RSD为3.94%,吹扫捕集-热脱附法为4.26%,顶空固相微萃取法为4.92%。