降落式PCR和SSCP检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体γ基因重排

目的以降落式PCR和单链构型多态性(SSCP)方法检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体(TCR)γ基因重排,探讨其在淋巴细胞白血病诊断中的价值。方法盐析法提取淋巴细胞白血病患者外周血白细胞DNA,TCR-γ基因重排通用引物和降落式PCR扩增基因重排。分别采用琼脂糖凝胶电泳、SSCP和DNA直接测序方法检测PCR扩增产物。阳性细胞系DNA模板与反应增生性淋巴组织DNA按不同比例混合后扩增,检测降落式PCR的灵敏度。结果琼脂糖电泳中,18例T淋巴细胞白血病中有15例、4例B淋巴细胞白血病中有2例为阳性,阳性标本经SSCP进一步分析,呈不连续条带。DNA直接测序证实扩增产物为TCR-γ基因重排。阳性对照模板占1%以上时可得到阳性扩增结果。结论TCR-γ基因重排通用引物结合降落式PCR可有效扩增T淋巴细胞白血病基因重排,可用于T淋巴细胞白血病的辅助诊断。

激光捕获显微切割-单细胞PCR技术的应用研究

目的建立一套优化的激光捕获显微切割一单细胞聚合酶链反应（Polymerase chain reaction，PCR）技术，应用于分子组织学研究中单细胞基因的检测。方法从淋巴结反应性增生冷冻组织切片中，应用激光捕获显微切割获取1～10个淋巴细胞，采用优化的单细胞PCR反应体系和条件进行β-珠蛋白基因检测。结果单轮常规PCR各组多细胞的扩增阳性率比较无显著性差异（P〉0．05），而单细胞的扩增阳性率低于各组多细胞，有显著性差异（P〈0．01）；半巢式降落式PCR的单细胞扩增阳性率高于单轮常规PCR，有显著性差异（P〈0．01）。结论联合应用优化的激光捕获显微切割及半巢式降落式PCR技术，显著提高了单细胞PCR的敏感性、特异性和稳定性。

重庆地区汉族CD14启动子区多态性分析

目的 调查CD14 ( 2 60 )多态性在重庆地区汉族中的分布特征 ,及检验该随机样本遗传学研究的可靠性。方法 对 110名重庆汉族个体 ,采用降落式PCR和限制性片段长度多态性法 (RFLP)进行基因型分析。结果 重庆地区汉族CD14 ( 2 60 )多态性TT、TC、CC 3种基因型频率分别为 43 6%、3 9 1%和 17 3 %;样本分布符合Hardy Weinberg平衡。结论 重庆汉族CD14 ( 2 60 )多态性基因型分布特征与白种人存在明显差异。样本为H W平衡群体 。

尖吻蝮蛇未知C类凝集素蛋白cDNA扩增、克隆与表达

蛇毒中C类凝集素 (C TLs)超家族蛋白 ,是具有抗凝血等功能的一族蛋白质 .根据测得的蛇毒蛋白的N端氨基酸序列 ,设计PCR引物 ;从湖南尖吻蝮蛇毒腺中提取总RNA ,经反转录 ,再通过温度降落锚式PCR ,在只使用一个特异性引物和一个通用引物、进行一次循环数不超过 30的非巢式反应的条件下 ,即获得两个较为清晰的扩增条带 ;其中之一带经克隆、测序、比较 ,证明其与已知的蛇毒中C类凝集素超家族蛋白质有较高的同源性 .在大肠杆菌中获得高效融合表达 ,融合蛋白占细胞总蛋白的 2 6 %～ 30 %