降解乳蛋白菌株的分离筛选与鉴定

从腐败食物中分离筛选到一株可降解牛乳蛋白的菌株,并通过菌落形态观察与测定、生理生化指标测定、核酸特征分析以及16S rRNA基因序列测定等方面对该菌株进行鉴定,经BLAST比对构建了该菌株的系统发育树。经上述几方面的鉴定后,判定该菌株属于枯草芽孢杆菌。

降解乳蛋白菌株中蛋白酶基因的克隆及分析

从降解乳蛋白菌株Bacillus subtilis strain ZJ06中克隆蛋白酶基因apr,分析蛋白酶基因apr结构,预测蛋白酶性质。以PCR方法从降解乳蛋白菌株Bacillus subtilis strain ZJ06基因组中扩增一碱性蛋白酶基因apr片段,对其克隆测序;提取菌体总RNA,进行RT-PCR;地高辛随机引物法标记探针,进行菌落原位杂交。结果表明,从降解乳蛋白菌株Bacillus subtilis strain ZJ06基因组中克隆到碱性蛋白酶基因apr,ORF1146bp编码382个氨基酸,理论分子量为39 ku,信号肽长30个氨基酸,是分泌型蛋白酶,蛋白酶原352个氨基酸,成熟酶275个氨基酸,GC含量51.4%,理论分子量为27.4 ku。RT-PCR、菌落原位杂交方法证实该基因的存在与表达。