痢疾杆菌侵袭HeLa细胞基因表达谱的研究

采用cDNA微阵列技术检测了HeLa细胞被痢疾杆菌侵袭1h和3h后的基因表达变化,共发现2倍以上差异表达基因752个,上调基因有509个,下调基因有306个,并初步推测HeLa细胞通过激活某些信号通路,诱导表达多个基因,产生整体的细胞效应,以对抗痢疾杆菌的侵袭。对显著差异表达的两个基因TNFR 1B和ERBB2,在痢疾杆菌侵袭HeLa细胞1h和3h后的表达量经荧光实时定量PCR验证,确定这两个基因的确在痢疾杆菌侵袭期间高表达,它们在细胞对痢疾杆菌2457T侵袭反应中起重要的作用。这些结果促进了对痢疾杆菌分子致病机理的认识,也为形成预防和治疗痢疾的策略提供了理论基础。

HeLa细胞感染痢疾杆菌前后差异表达的新EST序列的电子延伸及验证

目的:研究痢疾杆菌福氏2a入侵前和入侵后3h的人上皮细胞差异表达的新基因.方法:采用增毒的痢疾杆菌福氏2a 2457T侵袭HeLa细胞,检查HeLa细胞中细菌的数量并用RT-PCR方法从HeLa细胞中提取总RNA,制备探针.采用含有约3000个代表新基因的芯片进行芯片杂交,分析杂交结果.将所获得的新的156条EST序列为种子序列用cDNA微阵列实验,以人类EST数据库为基础库,应用siClone软件进行EST拼接、校对并尽可能延长获得大片段或全长cDNA.选取基因组未注释的编码区序列作为新基因进行RT-PCR实验验证.结果:共鉴定到≥3倍或≤0.33的差异表达的代表新基因的EST序列45条,其中25个延伸序列鉴定为与重要的肠道功能相关的已知基因,并有3个在痢疾杆菌侵袭期间高表达的存在显著差异的新EST序列,他们分别名为:NPCCKH12、ADBCSB02和HTBAMG05,这3个基因是新的人基因或假基因.结论:鉴定出了在HeLa细胞感染痢疾杆菌前后差异表达的新EST序列,为进一步研究痢疾杆菌与寄主相互作用奠定了基础.

诺氟沙星注射液的抗菌作用与毒性研究

一、体外抗菌作用测定:诺氟沙星注射液对所试的330株革兰氏阳性菌（120株）、革兰氏阴性菌（210株）体外抗菌活力与诺氟沙星片基本一致,未见有耐药菌株出现;对阴性菌的作用较强,尤其对痢疾杆菌、大肠杆菌、克氏肺炎杆菌的作用最强,MIC50、MIC90均≤0.5μg/ml,对肠道杆菌的抑菌活力与氟啶酸相似或略强,优于庆大霉素;对非产酶葡萄球菌的抑菌活力优于氟啶酸,与头孢三嗪相同,MIC50均为1.0μg/ml;对表皮葡萄球菌、链球菌、粪链球菌的作用均较氟啶酸、庆大霉素和头孢三嗪强。不同的血清浓度（0—75％）、细菌接种量（104—108）及pH值（5.0—9.O）对其抗菌活性的影响不大,试验还证明,诺氟沙星注射液具有强的杀菌作用,当与细胞接触2.0小时后即呈现杀菌作用。

志贺氏Ⅰ型痢疾杆菌耐药谱及R质粒携带率的研究

本文使用链霉素、四环素、磺胺嘧啶、氯霉素、氨苄青霉素、甲氧苄胺嘧啶、庆大霉素、卡那霉素等8种抗生素检测志贺氏I型痢疾杆菌(志贺I型菌)32株及福氏菌57株的耐药谱,并以大肠杆菌K-12c600F-Rifr为受菌,对志贺I型菌及福氏菌进行可传递性耐药性质粒(R质粒)携带率的检测.结果发现志贺I型菌的耐药谱以氯霉素、四环素型为主,福氏菌以链霉素、氯霉素、四环素、磺胺嘧啶型为主.志贺I型菌R质粒携带率为65.2%,高于福氏菌R质粒携带率(42.1%),低于国外志贺I型菌R质粒的携带率.

痢疾杆菌免疫小鼠的GALT中T淋巴细胞亚群的应答状态

以鼠伤寒杆菌Ｇ３０株为对照，应用间接免疫荧光法检测了痢疾杆菌福氏２ａ经口服及腹腔免疫后，小鼠派伊尔氏（ＰＰ）节结、肠系膜淋巴结（ＭＬＮ）及脾脏（ＳＰｔ）中Ｌ３Ｔ４～＋、Ｌｙｔ２～＋Ｔ细胞亚群的变化；并以ＭＴＴ比色法测定了ＣｏｎＡ诱导的淋巴细胞增殖反应。实验发现：无论是口服还是腹腔途径，这两种细菌都诱导出基本相似的Ｔ淋巴细胞反应，即Ｌ３Ｔ４亚群在ＰＰ及ＭＬＮ中均有显著升高，而Ｌｙｔ２亚群均无明显变化；口服途径仅ＰＰ淋巴细胞的增殖反应有明显升高，腹腔途径主要为ＭＬＮ出现淋巴细胞显著的增殖反应。提示：在痢疾菌感染免疫中以Ｌ３Ｔ４亚群起主要作用；ＰＰ作为粘膜免疫的诱导部位；经口途径主要诱导肠道局部淋巴细胞的免疫应答，经腹腔途径虽能诱导多部位免疫应答但有否抗粘膜感染保护作用尚待研究。