含水稻rbcL重组质粒限制图谱的构建

从水稻叶绿体基因文库中挑选合rbcL基因的3号克隆,采用大量煮沸法,分离纯化了质粒DNA,利用限制性核酸内切酶BamH I、 Sma I、Xhol和Cta I进行单酶或双酶切,在BamH I限制图谱的基础上构建了几种限制酶的限制图谱.

水稻叶绿体基因文库的构建和精细限制图谱的制作

水稻幼叶在加有高浓度抗坏血酸的缓冲液中匀浆,以获得完整的叶绿体,从中分离到ctDNA得率高达100μg/100g叶,纯度足以用于限制性核酸内切酶分析。ctDNA经Mbo I部分酶解得到的片段克隆到载体pcos 2 EMBL的Bam HI位点,重组DNA经体外包装后感染宿主菌,筛选表型Tc^5Km^R的重组子,通过计数克隆有效率达5×10~4重组菌落/1微克插入DNA。用λ-末端酶对重组环状双链DNA在cos位点切成线性分子,产生两个(ON-L及ON-R)可供标记和杂交的末端,线性Cosmid DNA经限制酶部分消化,凝胶电泳分离,干燥凝胶放射自显影,得到了6种限制性核酸内切酶的限制图谱。水稻ctDNA全长为129.5kb,在ctDNA上Pvu Ⅱ、Sal Ⅰ、Pst Ⅰ、Hind Ⅲ、Eco RI及Bam HI的切点分别为11、12、17、37、67和44个,1R A和B为21.7kb,LSC为73.7kb,SSC为12.4kb。

杀蚊球形芽孢杆菌BS10的质粒限制图谱

本文报道一株国内分离的具有杀幼蚊活性的球形芽孢杆菌(Bactllus sphaerieus下文简称BS)的大质粒(pFWI),其分子量为69.5×10~6道尔顿,绘制了该质粒的Xho Ⅰ限制性核酸内切酶酶图。以苏云金芽孢杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensis israelensis下文简称BTI)75×10~6道尔顿质粒为探针与该菌株DNA进行核酸杂交,结果表明BTI与该菌株为毒素蛋白编码的基因序列之间无同源性,说明它们的进化来源是不相同的。

氧化亚铁硫杆菌质粒pTf—52限制图谱和嵌合质粒pSDF—1的构建

从一株氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillus ferrooxidans)中分离到一个分子量为4.5×10~6Md 的质粒 pTf—52,用 Pst Ⅰ、BglⅡ、Kpn Ⅰ酶切此质粒,进行限制性酶切分析,作出了 pTf—52的限制图谱;并将 pTf—52插入到 pBR325的 Pst Ⅰ位点,体外重组,转化 E.coli HB101,构建成一个能够在 E.coli 中进行复制的嵌合质柱 pSDF—1(Tc^rCm^rAp^s),分子量为8.2×10~6Md。经限制性酶切分析,确证 pSDF—1是由 pBR325和 pTf—52重组成的,并确定了这两种质粒在 pSDF—1中的连接方向。

武昌鱼肝线粒体DNA限制性内切酶酶解图谱与12S rRNA基因的初步定位

武昌鱼肝线粒体(mt)DNA经六种限制性内切酶BamHI,BgⅢ,BgⅡ,EcoRI,HindⅡHpall单酶完全酶解分別得到2,2,3,3,3和7个片段。用琼脂糖凝胶电泳测得各个酶解片段的长度和分子量,经计算该mtDNA长约16.6kb,分子量10.2×10~6道尔顿(dalton)。用七对限制酶双酶全酶解,构建出五种限制性内切酶图谱。以酵母线粒体15SrRNA基因为探针对武昌鱼肝mtDNA中的12SrRNA基因进行初步定位。

大熊猫线粒体DNA的九种限制酶图谱

本文用9种限制性内切酶(BamH I,BgIⅠ,BgIⅡ,EcoRⅠ,EcoR Ⅴ,PstⅠ,PvuⅡ,SalⅠ,XhoⅠ)分析大熊猫的线粒休DNA(mtDNA)。构建其中5种酶(BamHⅠ,EcoRⅠ,EcoRⅤ,PstⅠ,PvuⅡ)的mtDNA物理图谱。大熊猫mtDNA的分子大小约为16.4 Kb,酶切位点是随机分布。我们的结果为进一步研究大熊猫mtDNA进化提供了基础资料。

泥鳅线粒体DNA限制性酶切图谱

对鱼类线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）限制性内切酶图谱分析，有利于进行鱼类种间和种内遗传变异及进化的研究（张亚平等，１９９２）。目前国内外对鱼类的ｍｔＤＮＡ研究已有一些报道（陈关君等，１９８４；戴建华等，１９９４；Ａｖｉｓｅ等，１９８７；Ｂｒｏｗｎ，１９８...

福建两个蛋鸭品种和常见野鸭线粒体DNA(mtDNA)限制性酶切图谱的比较

用７种限制性内切酶（ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｏｃＲⅤ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＸｂａⅠ）分析了蛋鸭（金定鸭、莆田黑鸭）、野鸭（斑嘴鸭、绿头鸭）的ｍｔＤＮＡ限制性类型，并用双酶法构建了以上鸭类的ｍｔＤＮＡ限制性酶切图谱．结果表明，蛋鸭与野鸭在ｍｔＤＮＡ结构上发生了明显分岐．比较两种野鸭和金定鸭的图谱，发现金定鸭与绿头鸭的亲缘关系较近．

家蚕蛹线粒体DNA限制酶图谱初步研究

应用碱变性法制备家蚕蛹线粒体DNA,经9种限制性内切酶单酶和双酶解后,构建了家蚕蛹mtDNA的限制酶图谱.家蚕的二化品种与多化品种的mtDNA限制酶图谱有差异,与蓖麻蚕的mtDNA限制酶图谱相比,则有显著差异.

珠鸡mtDNA的限制性图谱

应用AvaⅠ、BamHⅠ、BglⅠ、DraⅠ、EcoRⅠ、HpaⅠ、PvuⅡ、SacⅠ、SalⅠ、ScaⅠ和StuⅠ共 11种限制酶对珠鸡(Acrylliumvulturinum)mtDNA进行单酶切分析 ,结果表明 ,珠鸡mtDNA的分子量为 16 .7kb ;另以其中除AvaⅠ和StuⅠ外的 9种限制酶进行双酶切分析 ,构建了珠鸡mtDNA的限制性图谱 ,并与家鸡 (Gallusgallusdomesticus)比较 ,二者mtDNA序列歧异值为 0 .0 73.

玉米黑粉菌mtDNA的研究 Ⅱ.限制性内切酶酶切图谱

本文报道玉米黑粉菌mtDNA的限制性内切酶酶切图谱。分别将mtDNA的Bam HI各片段制成探针,与mtDNA分别用8种酶酶切后的Southern膜进行杂交,用片段重叠法得出各套片段的排列次序,再将克隆化的Bam HI片段进行第二酶切,按分子量拼排出各酶酶切位点在mtDNA上分布的图谱。此外,片段重叠分析时,还发现玉米黑粉菌mtDNA为环状结构;杂交分析时还发现mtDNA内没有明显的重复序列。DNA总长60.7kb。

丰鲤及其双亲线粒体DNA限制性酶切图谱的研究

采用密度梯度离心及RNase消化法制备并纯化了丰鲤(Fengcarp)、兴国红鲤(Xingguoredcarp)及散鳞镜鲤(Scatterscaledmirrorcarp)的肝脏线粒体DNA,用10种限制性内切酶HindIII、EcoRI、BamHI、XbaI、XhoI、PstI、BglII、SalI、BglI、PvuII进行了分析.丰鲤mtDNA相对分子质量约为9 88×106,大小约为16 49kb;兴国红鲤mtDNA相对分子质量约为9 89×106,大小约为16 50kb;散鳞镜鲤mtDNA相对分子质量约为9 87×106,大小为16 48kb.HindIII、EcoRI、BglI、BamHI、XbaI、XhoI、SalI、BglII、PstI及PvuII在丰鲤、兴国红鲤、散鳞镜鲤线粒体DNA分子上均分别有6、4、3、3、3、1、1、0、1和4个切点.根据单酶切及双酶切结果,构建了丰鲤、兴国红鲤、散鳞镜鲤mtDNA9种酶的限制性酶切图谱,结果表明丰鲤、兴国红鲤及散鳞镜鲤mtDNA间缺乏变异性.

青鱼线粒体DNA限制性酶切图谱的研究

用10种限制性内切酶对青鱼(Mylopharyngodonpiceus)的肝脏mtDNA进行了分析,其分子质量为9 949×106u,分子大小约为16 60kb.PstⅠ、EcoRⅠ、XhoⅠ、HindⅢ、BamHⅠ、PvuⅡ、SalⅠ、XbaⅠ、BglⅡ、BglⅠ在青鱼的mtDNA分子上分别具有0、3、1、4、4、3、2、2、2、3个切点.根据单酶解及双酶解结果建立了青鱼mtDNA的限制性酶切图谱.

水稻野败不育系与保持系线粒体DNA限制酶酶切图谱分析

采用限制酶酶切片段长度多态性（RFLP）分析方法比较了水稻野败不育系及其籼型保持系线粒体DNA酶切图谱。野败不育系与籼型保持系线粒体DNA在组成上存在十分明显的差异。根据具有相同迁移位置与大小的片段比例判断,这2种不同细胞质线粒体DNA顺序同源性约为30％。分子杂交结果显示,编码功能蛋白的基因及其邻近顺序存在相当程度的保守性。本文并对线粒体DNA的组成变异与细胞质雄性不育的关系进行了分析与讨论。

滑鼠蛇肝线粒体DNA的限制酶图谱

用六种限制性内切酶BamHⅠ、EcoRⅠ、PstⅠ、BglⅠ、BglⅡ和SalⅠ对滑鼠蛇肝脏线粒体DNA(mtDNA)进行酶解。发现BglⅡ、PstⅠ、BamHⅠ、BglⅠ和EcoRⅠ在滑鼠蛇肝mtDNA上分别有1、2、3、3和4个切点。SalⅠ不能切割滑鼠蛇肝mtDNA。根据滑鼠蛇肝mtDNA的单酶、双酶完全酶解及部分酶解片段的数目和分子量,建立了滑鼠蛇肝mtDNA的限制酶图谱。

葡萄糖异构酶产生菌——玫瑰红链霉菌336质粒pSR336限制酶图谱的建立

开发新的克隆载体依然是链霉菌基因克隆的一项重要基础工作。我们首次从葡萄糖异构酶产生菌——玫瑰红链霉菌(Streptomyces roseoru-her)336中分离到质粒pSR336。

沈阳地区肺炎支原体分离株P1蛋白基因限制性酶切图谱分型研究

目的 :根据肺炎支原体 (MP)P1蛋白基因限制性酶切图谱分类MP临床分离株 ,调查沈阳地区肺炎支原体流行情况。方法 :多聚酶链反应扩增MPFH标准株和MP临床分离株的P1基因片段 ,扩增产物用限制性内切酶HeaIII消化 ,1.5 %琼脂糖凝胶电泳分析。结果 :肺炎支原体临床分离株和FH标准株酶切图谱相同。结论 :沈阳地区肺炎支原体分离株属于Ⅱ型。

大鳞副泥鳅线粒体DNA九种限制性内切酶酶切图谱

大鳞副泥鳅ｍｔＤＮＡ经１１种限制性内切酶（ＢａｍＨＩ，ＢｇｌＩ，ＢｇｌⅡ，ＥｃｏＲＩ，ＨｐａＩ，ＫｐｎＩ，ＰｓｔＩ，ＳａｃＩ，ＳａｌＩ，ＸｂａＩ和ＸｈｏＩ）单酶完全酶解获得２３个酶切位点，这些酶酶切位点数依次分别是：２、７、０、３、３、０、３、１、１、２和１。通过琼脂糖凝胶电泳测定大鳞副泥鳅ｍｔＤＮＡ平均分子量为１０．３３±０．２２×１０６ｕ（原子质量）；其分子长约１６７２０±３５０碱基对（ｂｐ）。采用双酶完全酶解法构建了大鳞副泥鳅ｍｔＤＮＡ限制性内切酶酶切图谱。

幼儿园儿童巨细胞病毒分离毒株的限制性酶切图谱分析

目的 调查幼儿园学龄前儿童间人巨细胞病毒 (HCMV)传播的分子流行病学状况。②方法 应用限制性核酸内切酶 ,对 112名幼儿园儿童尿标本分离到的部分HCMV毒株进行酶切图谱分析。③结果 自 2所幼儿园同组儿童分离到的大多数HCMV毒株具有相同的限制性酶切图谱。④结论 水平传播是幼儿园婴幼儿间HCMV传播的主要方式 。

四种昆虫病毒基因组DNA限制性内切酶图谱分析

应用限制性内切酶图谱分析．结合 ＤＮＡ单分子层和 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法，对黄地老虎颗粒体病毒（ＡｓＧＶ），甘兰莱粉蝶颗粒体病毒（ｐｈＧＶ），三叶草夜蛾颗粒体病毒（ＳｔＧＶ）和荨麻蛱蝶核型多角体病毒（ＡｕＮＰＶ）等四种杆状病毒提取基因组ＤＮＡ用９处限制性内切酶酶切，得到不同的酶切图谱使其在基因型上进行区分，通过ＤＮＡ单分子展层发现其核酸链都呈闭环和超螺旋构刑，用３２Ｐ标记ＡｕＮＰＶ与ＧＶ杂交，没有发现与ＧＶ的同源性。