四种昆虫病毒基因组DNA限制性内切酶图谱分析

应用限制性内切酶图谱分析．结合 ＤＮＡ单分子层和 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法，对黄地老虎颗粒体病毒（ＡｓＧＶ），甘兰莱粉蝶颗粒体病毒（ｐｈＧＶ），三叶草夜蛾颗粒体病毒（ＳｔＧＶ）和荨麻蛱蝶核型多角体病毒（ＡｕＮＰＶ）等四种杆状病毒提取基因组ＤＮＡ用９处限制性内切酶酶切，得到不同的酶切图谱使其在基因型上进行区分，通过ＤＮＡ单分子展层发现其核酸链都呈闭环和超螺旋构刑，用３２Ｐ标记ＡｕＮＰＶ与ＧＶ杂交，没有发现与ＧＶ的同源性。

黄毛鼠 mtDNA 限制性内切酶图谱的研究

用７种限制性内切酶对黄毛鼠（Ｒａｔｕｓｌｏｓｅａ）线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）进行了分析。ＢａｍＨⅠ，ＢｇｌⅠ，ＰｓｔⅠ，ＰｖｕⅡ，ＥｃｏＲⅤ，ＨｉｎｄⅢ和ＢｃｌⅠ在黄毛鼠ｍｔＤＮＡ上分别具有１，２，２，２，４，５和７个切点，根据单酶解和双酶解片段数目和分子量，构建了黄毛鼠ｍｔＤＮＡ的限制性内切酶图谱。

沈阳地区肺炎支原体分离株P1蛋白基因限制性酶切图谱分型研究

目的 :根据肺炎支原体 (MP)P1蛋白基因限制性酶切图谱分类MP临床分离株 ,调查沈阳地区肺炎支原体流行情况。方法 :多聚酶链反应扩增MPFH标准株和MP临床分离株的P1基因片段 ,扩增产物用限制性内切酶HeaIII消化 ,1.5 %琼脂糖凝胶电泳分析。结果 :肺炎支原体临床分离株和FH标准株酶切图谱相同。结论 :沈阳地区肺炎支原体分离株属于Ⅱ型。

大鳞副泥鳅线粒体DNA九种限制性内切酶酶切图谱

大鳞副泥鳅ｍｔＤＮＡ经１１种限制性内切酶（ＢａｍＨＩ，ＢｇｌＩ，ＢｇｌⅡ，ＥｃｏＲＩ，ＨｐａＩ，ＫｐｎＩ，ＰｓｔＩ，ＳａｃＩ，ＳａｌＩ，ＸｂａＩ和ＸｈｏＩ）单酶完全酶解获得２３个酶切位点，这些酶酶切位点数依次分别是：２、７、０、３、３、０、３、１、１、２和１。通过琼脂糖凝胶电泳测定大鳞副泥鳅ｍｔＤＮＡ平均分子量为１０．３３±０．２２×１０６ｕ（原子质量）；其分子长约１６７２０±３５０碱基对（ｂｐ）。采用双酶完全酶解法构建了大鳞副泥鳅ｍｔＤＮＡ限制性内切酶酶切图谱。

甲基化特异性PCR联合结合重亚硫酸盐限制性内切酶法在胃癌抑癌基因甲基化检测中的应用

目的探讨甲基化特异性PCR(MSP)方法检测胃癌组织中抑癌基因甲基化的准确性,联合应用MSP方法与结合重亚硫酸盐限制性内切酶法(COBRA)检测抑癌基因甲基化状态的意义。方法采用MSP检测胃癌组织抑癌基因Runx3启动子区甲基化的状态,随后再采用COBRA检测胃癌组织标本的甲基化状态。分析两种方法检测结果的关系。结果经MSP方法检测54例肿瘤组织中共有30例标本发生Runx3基因启动子区异常甲基化,甲基化阳性率为55.6%。经COBRA方法检测54例肿瘤组织中有27例出现酶切条带即存在甲基化,甲基化阳性率为50.0%。经COBRA方法检测,在MSP方法检测的30例阳性标本中有3例未出现酶切条带即为假阳性。在MSP方法检测Runx3基因甲基化阴性的24例标本中,经COBRA方法检测,Runx3基因甲基化阴性的标本亦为24例。两种检测方法检测结果的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论甲基化特异性PCR方法在检测胃癌抑癌基因甲基化状态的研究中具有较高的灵敏度,COBRA方法可以检测出MSP方法中的假阳性标本,联合应用两种方法检测胃癌组织中抑癌基因的甲基化状态会使实验结果更可靠、准确。

致病性钩端螺旋体限制性内切酶酶切分析分型研究

为了建立一种简便、稳定的钩体分型方法，我们采用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ对致病性钩端螺旋体八个血清群５４个血清型６４株国内外钩体参考株及２７株野生株进行限制性内切酶酶切分析（ＲＥＡ）。结果表明：９１株菌中共有５９种不同的限制性内切酶图谱（ＲＥＰｓ），根据前５条高分子酶切片段可以区分不同的ＲＥＰｓ；除部分血清群中个别不同的血清型有相同的ＲＥＰ型外，大部份血清型都有其独特的ＲＥＰ型，同一血清群往往拥有共同的酶切片段；所研究的同一血清型的国内和国际参考株的ＲＥＰｓ不同；大多数野生株的ＲＥＡ型和参考株相同，差异仅表现为个别高分子带的缺少和增加，ＲＥＡ分型和血清分型吻合较好，通过ＲＥＡ分型基本可区分不同的血清型。

杨树毒蛾核型多角体病毒的形态结构与病毒DNA的限制性内切酶酶谱分析

杨毒蛾核型多角体病毒(Lencoma Salicis nuclear polyhedrosis virus,简称LsNPV)是一种多粒包理型的杆状病毒。在扫描电镜下呈不规则多面体,病毒多角体大小不一致,平均直径为1.2μm。病毒粒子长为215nm直径30～50nm。LsNPV的基因组是一个环状双链DNA。限制性内切酶BglI,SalI分别把病毒DNA酶解为26和24个限制性片段,由片段总和法计算,基因组大小为86.3kb。

一起食源性疾患中大肠杆菌质粒指纹图谱分析的应用

一起食源性疾患中大肠杆菌质粒指纹图谱分析的应用杜蔷石建成尹明北京市卫生防疫站（１０００１３）近几年，无论是在国内还是在国外，由致病性大肠杆菌引起的食物中毒屡屡发生。尤其是１９９４年美国某家餐馆由于食用了污染Ｏ１５７∶Ｈ７大肠杆菌的快餐食品死亡两人，更...

我国人乳头瘤病毒(HPV6BV)内切酶图谱的建立

本文以14种限制性内切酶对我国克隆的人乳头瘤病毒(HPV6BV)进行内切酶分析,作出图谱,并与国外引进的HPV6b及国外文献报道的HPV6各亚型进行比较,发现其间的差异。

中国人Wilson病患者基因高频突变位点的快速检测

目的建立可用于临床的中国人Wilson病(WD)患者快速、高效的基因检测方法。方法PCR扩增142例非同源家系的WD患者ATP7B基因第8、12、13外显子(以30例健康人为正常对照),分别以限制性内切酶MspI、TaiI和BstDsI消化扩增产物,2%琼脂糖凝胶电泳分离,根据各外显子的限制性酶切图谱分析有无突变,其结果经DNA测序验证。结果48.59%(69/142)的患者在第8外显子检出Arg778Leu突变,其中纯合突变13例,杂合突变56例,染色体突变频率为28.87%(82/284);5.63%(8/142)的患者在第12外显子检出Thr935Met杂合突变,染色体突变频率为2.82%(8/284);24.65%(35/142)的患者在第13外显子检出Pro992Leu突变,其中纯合突变3例,杂合突变32例,染色体突变频率为13.38%(38/284)。检出突变的患者中有12例为Arg778Leu/Pro992Leu复合杂合突变,1例Arg778Leu/Thr935Met复合杂合突变,1例Arg778Leu纯合突变合并Pro992Leu杂合突变,总检出率为69.01%(98/142)。以上结果均经DNA测序证实。结论13外显子Pro992Leu突变是中国人WD患者的基因突变热点之一。采用限制性酶谱分析法能快速、准确检出WD患者基因高频突变位点,可用于对WD疑诊患者及其家系成员的基因诊断。

重组真核质粒pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)的构建及表达

目的:将人类G3BP(Ras-GTPase activating protein SH3 domain binding protein)蛋白Domain(1～5)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使G3BP蛋白各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pEGFP-C1-G3BP为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pEGFP-C2载体上,再将构建成功的pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)重组质粒转染入HeLa细胞内,以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的融合表达情况。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达。结论:重组pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)质粒成功构建并表达。

中国果蝇mtDNA RFLP的初步分析

中国果蝇ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ的初步分析戴灼华陈娅（北京大学生命科学学院细胞生物学及遗传学系，北京１００８７１）ＳｔｕｄｙｏｎｍｔＤＮＡＲＦＬＰｏｆＤｒｏｓｏｐｈｉｌａｔｒｉａｕｒａｒｉａＤａｉＺｈｕｏｈｕａＣｈｅｎＹａ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｅｌＢ...

志贺菌痢暴发菌株的分子流行病学分析

目的 探讨 4种基因分型方法在一起F2a志贺菌痢暴发的流行病学研究中的意义。方法 对 43株从患者粪便和食物中分离菌株进行质粒图谱分析、质粒DNA酶切图谱分析、随机PCR分析、set1/set2毒力基因PCR分析。结果 随机PCR将 43株F2a志贺菌分为 2个不同的谱型 ,质粒图谱、set1/set2毒力基因PCR分为 3个不同的谱型 ,而质粒DNA酶切图谱分为 4个不同的谱型。其中基因型完全相同的菌株 3 5株 ,为引起本次菌痢暴发的流行株。7株基因型不同的菌株是本次暴发期间同时存在的散发病例。从食物中分离的菌株基因型与流行株相同 ,证明此次暴发是通过污染的食物而引起传播的。食堂炊事员粪便中虽然分离出了F2a志贺菌 ,但基因型与流行株不同 ,不是本次暴发的传染源。结论 DNA水平上的分型方法能更为准确。

40例α地中海贫血的实验诊断及基因型

在2992例贫血原因待查者中,采用血红蛋白生化分析,诊断α地中海贫血40例,其中,HbH 14例,HbH-Bart′s 9例,α地中海贫血1 12例,α地中海贫血2 5例。继采用限制性内切酶图谱分析结合聚合酶链反应技术,检出基因型:--SEA/-α3.723例,--SEA/αα12例,αα/-α3.75例。

内蒙一起F2a志贺菌痢爆发的质粒分析

目的 探讨内蒙一起菌痢爆发的特异传染源。方法 对４３ 株Ｆ２ａ志贺菌进行质粒图谱和质粒ＤＮＡ 酶切图谱分析。结果 ①质粒图谱和质粒ＤＮＡ酶切图谱特征相同的菌株为引起本次菌痢爆发的优势克隆；②本次爆发偶合有部分散发病例；③经污染的食物传播是本次爆发的主要传播途径。结论 质粒分析能较为特异、敏感地揭示不同来源志贺菌间的遗传联系和差别。

菌痢暴发的分子流行病学分析

分析１９９２、１９９４年广州、江门两地菌痢暴发期间分离的８４株福氏２ａ志贺氏菌（广州暴发株３０株、散发株２８株、江门暴发株１２株、病例接触者分离株１４株）的质粒图谱及质粒ＤＮＡ限制性酶切图谱特征。结果表明：发生于不同地点、不同时间且传染来源不相同的两起菌痢暴发，由福氏２ａ志贺氏菌的同一克隆引起，该克隆可能是广东地区福氏２ａ志贺氏菌的优势克隆。江门菌痢暴发期间，自密切接触者分离的同型菌株分属３个不同的克隆，提示部分病例接触者感染的福氏２ａ志贺氏菌并非来自病例。比较表型分析（生化反应、血清学分型）与质粒分析，证实表型分析难以鉴别来源不同的同型克隆，而质粒分析提供了简便、敏感、特异鉴定不同来源同型克隆的有效手段。

UP-PCR结合RFLP对脑脊液标本中病原菌的检测

①目的 建立通用引物聚合酶链反应 (UP PCR)结合限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)酶切图谱分析快速检测脑脊液标本中常见病原菌的方法。②方法 通过对体液标本中常见病原菌 16SrRNA基因保守区的序列分析 ,设计通用引物 ,对不同细菌的DNA进行UP PCP扩增 ,确定标本是否有细菌感染 ,然后对阳性标本的扩增产物分别用不同的限制性内切酶酶切 ,进行RFLP分析 ,进一步鉴定细菌。并与常规细菌培养鉴定法进行比较。③结果 UP PCR结合RFLP法最低可检测出 8cfu·mL-1大肠埃希菌和 2 5 0cfu·mL-1金黄色葡萄球菌 ;该法对10 2份脑脊液标本的检测中 ,其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为 92 .3%、96 .6 %、80 .0 %和 98.0 % ,较培养法好。④结论 该方法可以准确、快速地检测出脑脊液标本中感染的病原菌。

Nodal基因第一内含子对nodrl基因表达的影响

Ｎｏｄａｌ基因第一内含子对ｎｏｄｒｌ基因表达的影响周迅蕾吴鹤龄（北京大学生命科学院细胞生物及遗传学系，北京１００８７１）ｎｏｄａｌ基因是小鼠胚胎发育至原肠胚期于原条顶端原结处表达的一个基因。客观存在与胚胎的中胚层的胚层的形成以及左右体轴的决定有关。ｎ...

向日葵细胞质雄性不育基因的研究

向日葵是重要的油料作物之一,其亚油酸含量高于其它食用油,有助于人体心血管健康。在欧洲,向日葵油消耗量在食用油中占首位。目前,限制我国油用向日葵生产的主要因素是其产量及含油量等。培育高产、高含油量向日葵品种的最有效途径是利用杂种优势,一般采用三系配套,即不育系、保持系和恢复系。对三系的分子生物学研究将有助于对细胞质雄性不育产生机制的认识。

棉铃虫核型多角体病毒p40基因序列分析

克隆了棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)单粒包埋型核型多角体病毒 (HaSNPV)基因组HindⅢ H、J片段 ,其长度分别为 10kb和 6 .7kb。通过对克隆片段末端测序 ,得到HaSNPVp40基因全序列。p40基因编码区全长 96 6bp ,预计可编码 36 .kD的多肽。HaSNPVp40基因核苷酸序列与HzSNPVp40基因有 98%的相同性。这两种基因与BmNPVp40(GenBank -L33180 )和AcMNPVgp41(GenBank -L2 2 85 8)的氨基酸序列相似性 43%左右 ,但四种蛋白对应于HzSNPVp40、HaSNPVp40的 2 8～ 2 77氨基酸区域 ,同源性高达 6 2 % ,并且存在一个保守的亲水性结构域。进一步将在基因组中相邻的HindⅢ -H、J两片段用BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、PstⅠ四种限制性内切酶进行了分析。