隔指孢属rDNA ITS区间限制性片断长度多态性(RFLP)分析

利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对捕食线虫真菌隔指孢属进行了系统发育研究。以 ＩＴＳ１和ＩＴＳ４为引物对该属８种８个菌株的核糖体ＤＮＡ转录间区（ＩＴＳ）进行了 ＰＣＲ扩增， ４种内切酶（ ＡｌｕⅠ、 Ｈａｅ Ⅲ、 Ｈｐａ Ⅱ、 ＴａｑⅠ）酶切。结果表明该属的 ＩＴＳ区长度没有明显差异，其长度范围在５６４～５９５之间，酶切图谱能体现不同种 间的多态性。根据４种内切酶酶切结果，利用ＵＰＧＭＡ法构建的隔指孢属分子系 统树，基本体现了属内不同种间的亲缘关系，从分子水平证明了隔指孢属形态分类 上的合理性。

烟草根结线虫生防菌限制性片断长度多态性(RFLP)分析

利用PCR RFLP方法对烟草根结线虫生防菌单顶孢属进行了系统发育研究。以ITS1和ITS4 为引物对该属 12种14个菌株的核糖体DNA转录间区 (ITS)进行了PCR扩增 ,4种内切酶 (AluⅠ、HaeⅢ、HpaⅡ、TaqⅠ )酶切。结果表明 ,该属的ITS区长度没有明显差异 ,其长度范围在 60 8～ 675之间。酶切图谱能体现不同种间的多态性 ,根据 4种内切酶酶切结果 ,利用UPGMA法构建的单顶孢属分子系统树 ,基本体现了属内不同种间的亲缘关系 。

人血红蛋白β-链基因AvaⅡ位点扩增片断长度多态性

目的：为了研究日本人群β-链基因AvaⅡ酶切位点的遗传多态性以及该位点等位基因频率的分布。方法：采用PCR- RFLP技术,对35例无血缘关系的健康日本大学生的70条染色体进行检测,然后用X^2检验进行统计学处理。结果：等位基因B_1频率为0．4715,等位基因B_2频率为0．5287,杂合度H=0．5429,期望杂合度h=0．4986,多态信息量PIC=0．7635；B_1、B_2的传递规律和理论上预计的完全符合,认为日本人群β-链基因AvaⅡ酶切位点也具有遗传多态性,表明β-链基因AvaⅡ酶切位点具有适合信息,并且与国外报道的无显著性差异。结论：这对遗传制图、基因分离、疾病的关联研究,法医学个体识别和双生子的卵性鉴定有一定的价值。

PEAR1基因多态性与缺血性脑卒中复发易感性的关系研究

目的分析血小板内皮聚集受体1(PEAR1)基因多态性与缺血性脑卒中复发的相关性,为防治缺血性脑卒中复发提供依据。方法选取该院神经内科门急诊和住院确诊为急性缺血性脑卒中的150例患者作为研究对象,根据是否为脑卒中复发分为初发脑卒中组(127例)和复发脑卒中组(23例)。应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法分析PEAR1基因rs12041331位点单核苷酸多态性,并测序验证基因型。结果初发脑卒中组和复发脑卒中组PEAR1基因rs12041331G>A位点GG、GA、AA基因型和G、A等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05);复发脑卒中组的年龄较初发脑卒中组高,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、PEAR1基因rs12041331位点AA基因型与缺血性脑卒中复发有关,是缺血性脑卒中复发的危险因素(P<0.05)。结论PEAR1基因rs12041331G>A位点多态性与缺血性脑卒中复发相关。PEAR1基因纯合突变可能是缺血性脑卒中复发的危险因素,PEAR1基因可能是缺血性脑卒中复发风险预测的候选基因。

PEAR1基因多态性与缺血性脑卒中的相关性研究

目的分析PEAR1基因多态性与缺血性脑卒中相关性,为缺血性脑卒中发病机制的进一步研究提供科学依据,为疾病防治提供新的思路。方法收集昆明医科大学附属延安医院神经内科门急诊或住院确诊为急性缺血性脑卒中患者150例作为实验组,同期150例健康体检者作为对照组,应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法分析PEAR1基因rs12041331位点单核苷酸多态性(SNP),并测序验证基因型。结果卡方检验显示缺血性脑卒中组和正常对照组PEAR1基因rs12041331G>A位点GG、GA、AA基因型和G、A等位基因频率间的差异有统计学意义(P<0.05);缺血性脑卒中组的糖尿病、高血压比例较正常对照组多,同型半胱氨酸(HCY)水平较正常对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析显示PEAR1基因rs12041331G>A位点突变可能是缺血性脑卒中发生的危险因素。结论PEAR1基因rs12041331G>A位点基因多态性与缺血性脑卒中发生相关。rs12041331G>A位点基因可作为缺血性脑卒中风险预测的候选基因。

广东地区乙型肝炎病毒基因型研究

目的了解广东地区乙型肝炎病毒慢性感染者基因型。方法采用限制性片段长度多态性(RFLP)及序列测定法检测广东地区27例HBV携带者和173例慢性乙肝患者的HBV基因型。结果B型105例(52.5%),C型94例(47%),D型1例,未发现其他基因型。B型中ASC所占比例(18.1%)显著高于C型中ASC所占比例(8.5%),χ2=3.89,P<0.05。C型中肝硬化所占比例(23.4%)显著高于B型中肝硬化所占比例(7.6%),χ2=8.46,P<0.01。C型在ASC、慢性乙肝轻度、中度、重度及重型肝炎、肝硬化的比例依次增高,分别为29.6%(8/27),35.5%(11/31),44.2%(23/52),45.8%(11/24),52%(13/25),71%(23/31),提示广东地区C基因型与较重肝病有关。C型较B型年龄大。105例B型与94例C型无性别差异。结论广东地区HBV基因型有B,C,D型构成,以B型为主。C型较B型年龄大,与较重肝病有关。B,C型间无性别差异。

CYP1A1 MspI多态性与子宫内膜癌易感性的病例对照研究

自20世纪60年代以来，上海市区子宫内膜癌发病率逐年上升，且发病年龄有年轻化的趋势。子宫内膜癌的发病机制目前还不十分明确，多数流行病学研究显示子宫内膜癌的危险因素都与雌激素有关，雌激素水平升高导致的内膜增生及DNA损伤被认为是子宫内膜癌发生的主要机制。

胰岛素受体底物1基因Gly972Arg多态性与2型糖尿病不相关

目的 探讨中国汉族人群胰岛素受体底物 1(IRS- 1)基因 Gly972 Arg多态性与 2型糖尿病的关系。 方法 选取 10 2例 2型糖尿病患者及 10 2例糖耐量正常的患者配偶进行对照研究 ,应用聚合酶链反应——限制性片断长度多态性的方法进行胰岛素受体底物 1基因 Gly972 Arg多态性位点基因型检测。 结果 IRS- 1基因 Gly972 Arg突变频率在病例组和对照组均为 2 % ,明显低于白人。 结论 在中国汉族人群中 ,IRS- 1基因 Gly972 Arg突变不是

吉林市结核分支杆菌IS6110 DNA指纹图谱特征分析

目的 分析吉林市结核分支杆菌IS6 110RFLP图谱特征。方法 对 5 3株结核分支杆菌分离株进行IS6 110基因分型 ,得到IS6 110RFLP图谱 ;按菌株指纹特征的同源性高低予以分组 ,并进行分析。结果 吉林市结核分支杆菌IS6 110RFLP图谱特征为 :(1)IS6 110拷贝数目平均为 13个 ;(2 )A、B两组同源性很高 ,具有“北京基因型”特征 ,C组多态性较强 ;(3)IS6 110RFLP图谱特征分布无地域差异 ;(4)耐药菌株与敏感菌株图谱特征无明显差异 ,但初治耐药菌株成簇率较高。结论 吉林市结核分支杆菌IS6 110RFLP图谱特征以“北京基因型”为主 ;但还具一些独有的特征。

5-HT转运体基因多态性与孤独症核心家系的关联研究

目的 :探讨中国汉族人群 5 -HT转运体基因多态性 (HTTSNP1 8)与孤独症的关系。方法 :应用聚合酶链式反应与限制性片断长度多态性 (PCR -RFLP)分析方法对 175个孤独症核心家系测定基因型和等位基因。结果 :孤独症患儿与父母的基因频率和基因型频率的分布呈基本一致的趋势。传递不平衡检验(TDT)显示等位基因传递无统计学意义 ,(McNemarχ2 =0 0 0 ,P >0 0 5 )。结论 :本研究未发现 5 -HT转运体基因多态性 (HTTSNP1 8)与孤独症存在关联 ,提示该基因多态性不影响孤独症的易感性 ,在中国汉族孤独症发病中不起主要作用。

TNF-α和HSP70-2基因多态性与急性胰腺炎的相关性研究

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)-α和热休克蛋白(HSP)70-2基因多态性与急性胰腺炎(AP)的相关性。方法运用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RLFP)检测72例AP患者(AP组)和71例正常人(对照组)的TNF-α及HSP70-2基因多态性。结果 AP组与对照组的TNF-α基因型和等位基因比例间差异无统计学意义;AP组中,重型胰腺炎(SAP)和轻型胰腺炎(MAP)的TNF-α基因型和等位基因间差异无统计学意义。TNF-α和HSP70-2基因AA型与GA+GG型患者的白细胞、C反应蛋白(CRP)、淀粉酶、三酰甘油、血糖差异均无统计学意义;AP组的HSP70-2基因GA+GG型患者比例高于对照组(69.4%vs 49.3%),AP组携带的G等位基因比例高于对照组(46.5%vs 31.7%),差异均有统计学意义。AP组中,SAP的GA+GG型比例高于MAP(81.0%vs 53.3%),差异有统计学意义;而G等位基因在SAP和MAP间无明显差异(P>0.05)。结论 TNF-α基因多态性与AP不相关,HSP70-2基因多态性与AP相关,携带G等位基因发生重症AP的可能性增大,可能是重症AP的易感因素之一。

低密度脂蛋白受体基因多态性与心肌梗死相关性的研究

目的 研究中国东北地区低密度脂蛋白受体 (LDLR)基因PvuII多态性与心肌梗死 (MI)的相关性 ,并对其血脂质、脂蛋白水平的关系进行分析。方法 采用PCR -RFLP方法检测 4 1例MI患者和 6 7例健康体检者LDLR基因的多态性分布。结果 ①MI组和对照组的P-P-基因性与高LDL -C和TC水平明显相关 ,P+ P+ 基因性与较低的TC和LDL -C相关。②MI组患者的P-等位基因型相对频率高于正常组 ,两者存在显著性差异。③MI组血清TC和LDL -C水平高于对照组 ,两者存在显著性差异。结论 研究证实LDLR基因PvuII位点的多态性可影响血清胆固醇水平 ,并且与MI的发生密切相关。LDLR基因PvuII位点的多态性变化可作为预测冠心病发生的一个基因标志。

载脂蛋白E和脂肪结合蛋白-2基因多态性与2型糖尿病肾病的相关性研究

目的 探讨载脂蛋白E(Apo- E)基因、脂肪酸结合蛋白 2(FABP -2)基因 Ala54Thr的多态性与 2 型糖尿病肾病(DN)的相关性。方法 对65例2型糖尿病(DM)患者与 30 例健康对照者进行血清生化指标检测,并采用多聚酶链反应限制性片断长度多态性(PCR -RFLP)技术,观察Apo -E、FABP -2 Ala54Thr基因多态性,研究其与 DN的关系。结果 正常对照组与糖尿病组的 Apo- E、FABP- 2 等位基因和基因型频率存在差异(P<0.01)。DM3 组的Apo E2等位基因频率、FABP 2 Thr/Thr基因型频率高于正常对照组(P<0.01)。携ε2 等位基因的 DM患者胰岛素抵抗的稳态模式评估指数(HOMA)、甘油三酯(TG)水平高于携ε3、ε4者,胰岛素敏感指数(ISI)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)则低于两者,但无统计学意义。携 FABP- 2 Thr/Thr基因型患者的尿微量白蛋白(UAER)明显高于携Ala/Ala,Ala/Thr基因型者(P<0.05)。Apo- E2 与 FABP- 2 Thr/Thr基因型共显的患者,85.7%出现在 DM3组。结论 Apo -E、FABP- 2 Ala54Thr基因多态性与DN的发生有关,当Apo -E2与 FABP -2 Thr/Thr基因型共显时,可能会加重DN的病情。Apo- E2等位基因与FABP -2 Thr/Thr基因型是预测DN发生和发展有用的指标。

RFLP和AFLP分析白菜型油菜和甘蓝型油菜遗传多样性及其在油菜改良中的应用价值(英文)

采用RFLP和AFLP标记对来自中国和欧美的7份甘蓝型油菜和22份白菜型油菜进行了遗传多样性分析。在这29份材料中,166个酶-探针组合和2对AFLP引物共检测到1477个RFLP标记和183个AFLP标记。RFLP数据显示以拟南芥EST克隆作探针比用油菜基因组克隆做探针能检测到更多的多态性位点,且采用EcoRⅠ或BamHⅠ酶切比HindⅢ酶切多态性好,白菜型油菜和甘蓝型油菜中基因的拷贝数平均都为3个左右。UPGMA聚类分析表明中国白菜型油菜的遗传多样性比甘蓝型油菜和欧美白菜型油菜丰富,欧美甘蓝型油菜与欧美白菜型油菜聚为一类,而与中国甘蓝型油菜差异更大。中国白菜型油菜丰富的遗传多样性为中国甘蓝型油菜的改良提供了宝贵的资源,揭示了利用白菜型油菜A基因组和甘蓝型油菜A基因组间亚基因组杂种优势的可能性。

老年人心肌梗死与血管紧张素原基因T174M多态性关系

目的探讨血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)基因T174M变异与老年人心肌梗死(M I)的发病关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)、限制性片段长度多态性(RFLP)分析,对55例呈M I患者和60例无冠心病证据的对照组(老年人)进行AGT基因T174M等位基因检测。结果M I患者AGT基因174MM型(7.27%)和M174等位基因(16.36%)的频率显著高于健康对照组(分别为1.67%和9.17%,2χ=7.55,P=0.022,χ2=5.79,P=0.016),经校正冠心病的主要危险因素后,AGT基因174MM仍可显著增加心肌梗死发生的危险性(比数比3.66,P=0.018)。结论AGT基因T174M可能是老年人M I发病的重要危险因素之一。

原发性高血压患者MTHFR基因C677T多态性及血浆Hcy水平的变化

目的 :研究N5 ,N10_亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因C677T多态性及血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平的改变与原发性高血压的关系。方法 :对55例单纯收缩期高血压 (ISH)和50例非单纯收缩期高血压(NISH)两组及46例健康对照组 ,检测MTHFR基因C677T多态性和血浆Hcy水平。结果 :(1)ISH患者组MTHFR基因纯合 (T/T)型频率高于杂合 (T/C)型和野生 (C/C)型 (49 1%、40 0%和10 9 % ) ,与NISH组及正常对照组比较有极显著性差异 (P<0.01) ,其等位基因频率分布也有极显著性差异 (P<0.01)。而NISH组与对照组基因型分布及等位基因频率均无差异 (P>0.05)。ISH患者组T/T纯合基因型与T/C +C/C基因型的优势比(OR)为3 91(95 %CI:1.89～8.11)。(2)3组中T/T基因型者血浆Hcy 水平均高于其他基因型者 (P<0.05)。(3)ISH组血浆Hcy 水平高于NISH组和对照组 (P<0.05 ,P<0.01) ,NISH组与对照组差异无显著性 (P>0.05)。结论 :高Hcy 血症可能是ISH发病的独立危险因素 ,MTHFR基因C677T纯合突变可能是其发病的重要遗传因素。没有发现NISH的发病与高Hcy 血症有关。

胆固醇酯转运蛋白及其基因多态性与2型糖尿病大血管病变的关系

探讨胆固醇酯转运蛋白在 2型糖尿病大血管病变发生中所起的作用及胆固醇酯转运蛋白TaqⅠB基因多态性与大血管病变的关系。对 96例正常对照者及 2 2 6例 2型糖尿病患者的血清胆固醇酯转运蛋白水平及胆固醇酯转运蛋白TaqⅠB基因型进行研究。结果发现 :① 2型糖尿病组胆固醇酯转运蛋白水平较正常对照组明显升高 ,大血管病变组升高更显著 ;②糖尿病大血管病变组B1B1基因型频率 (37.3% )显著高于无大血管病变组(16 .4 % ) ,B1B1基因型大血管病变发生率 (6 8.3% )明显高于B1B2 (4 6 .6 % )和B2B2 (2 9.1% )型 ;③多元回归分析显示 ,高胆固醇酯转运蛋白水平和B1等位基因是 2型糖尿病大血管病变的危险因素。提示 :① 2型糖尿病患者血清胆固醇酯转运蛋白水平升高 ,后者是 2型糖尿病大血管病变的危险因素 ;②胆固醇酯转运蛋白TaqⅠB基因多态性与 2型糖尿病大血管病变发生有关 ,B1等位基因是 2型糖尿病大血管病变的易感基因。

建立PCR-CE-RFLP方法快速诊断女性生殖道的细菌感染

目的建立PCR-CE-RFLP方法直接检测女性生殖道感染标本中的细菌,为临床提供快速、准确的诊断依据。方法利用细菌16S rRNA集保守性和变异性于一体的特点,合成1对通用引物,其上游5′端用5-′FAM标记。将8株已知菌和38例临床诊断为生殖道炎症的标本及其培养物进行PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶HaeⅢ消化,经毛细管电泳(CE)通过限制性片断长度多态性分析(RFLP)来鉴定不同病原菌。结果(1)已知菌株PCR扩增阳性率为75%(6/8)、生殖道感染标本的PCR扩增阳性率为79%(30/38),毛细管电泳阳性率两者均为100%。(2)已知菌株PCR扩增产物的5′端HaeⅢ完全酶切片段的毛细管电泳结果,与电子克隆产物的酶切片段基本一致。(3)用传统培养检测法在生殖道能检出的常见致病菌,实验用PCR-CE-RFLP法同样也能检出。(4)实验还发现数种传统培养法未检出的细菌。结论PCR-CE-RFLP法比传统的细菌培养法具有快速、准确、灵敏的优点,比传统方法缩短20 h,可用于临床标本的直接鉴定。

单核细胞趋化蛋白1基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的 探讨中国西北地区汉族人群中2型糖尿病(T2DM)与单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)-2518(A/G)基因多态性的关系.方法 测量41例正常对照者和57例2型糖尿病患者相关临床生化指标,并采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,观察MCP-1 -2518(A/G)基因多态性,研究其与2型糖尿病的关系.结果 2型糖尿病组与正常对照组的MCP-1等位基因和基因型频率比较差异无统计学意义(P>0.05);多因素Logistic回归分析显示,MCP-1 G等位基因为2型糖尿病的保护因素(OR=0.015,CI=0.005～0.437),且有统计学意义(P<0.05).结论 正常对照组与2型糖尿病组MCP-1 -2518(A/G)基因多态性差异无统计学意义,尚不能认为在中国西北汉族人群中MCP-1基因多态性与2型糖尿病之间有相关性,但G等位基因可能为2型糖尿病的保护因素,它的存在降低2型糖尿病的患病率.

乙型肝炎病毒基因型、拉米夫定耐药突变的RFLP检测及临床相关性分析

目的对乙型肝炎(简称乙肝)肝病毒进行基因分型,检测患者服用拉米夫定后血清中乙肝病毒突变情况,并进行临床相关性分析。方法设计乙肝病毒突变及基因分型特异性引物和酶切位点,系用限制性片断长度多态性(RFLP)分析法检测突变类型并对乙肝病毒进行基因分型。结果在115份被检测的血清标本中,75份(65%)标本为野生型,18份(15.7%)标本为YIDD突变,10份(8.7%)标本为YVDD突变;在混合型突变中,YIDD+YVDD存在于6份(5.2%)标本中,YMDD+YIDD存在于4份(3.5%)标本中,2份(1.7%)标本为YMDD+YVDD混合突变型;未检测到YSDD突变型。在180位点的突变检测中,98份(85%)标本为野生型,5份(4.3%)标本为rtL180M,L180M+M204I存在于8份(6.96%)标本中,另4份(3.5%)标本为L180M+M204V混合突变型。在115份标本中,102份标本为C基因型,13份标本为B基因型,未发现其他基因型。通过χ2检验,乙肝病毒YMDD突变与患者的性别、血清DNA水平、病毒基因型之间没有相关性(P>0.05),而乙肝病毒YMDD变异与患者服用拉米夫定的时间长短有相关性(P<0.05),用药时间越长,发生突变的几率越大。乙肝患者服用拉米夫定后,180位点的突变和204位点突变具有相关性(P<0.05)。结论采用RFLP分析法可以有效地检测乙肝病毒YMDD突变并对乙肝病毒进行基因分型。