隔指孢属rDNA ITS区间限制性片断长度多态性(RFLP)分析

利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对捕食线虫真菌隔指孢属进行了系统发育研究。以 ＩＴＳ１和ＩＴＳ４为引物对该属８种８个菌株的核糖体ＤＮＡ转录间区（ＩＴＳ）进行了 ＰＣＲ扩增， ４种内切酶（ ＡｌｕⅠ、 Ｈａｅ Ⅲ、 Ｈｐａ Ⅱ、 ＴａｑⅠ）酶切。结果表明该属的 ＩＴＳ区长度没有明显差异，其长度范围在５６４～５９５之间，酶切图谱能体现不同种 间的多态性。根据４种内切酶酶切结果，利用ＵＰＧＭＡ法构建的隔指孢属分子系 统树，基本体现了属内不同种间的亲缘关系，从分子水平证明了隔指孢属形态分类 上的合理性。

烟草根结线虫生防菌限制性片断长度多态性(RFLP)分析

利用PCR RFLP方法对烟草根结线虫生防菌单顶孢属进行了系统发育研究。以ITS1和ITS4 为引物对该属 12种14个菌株的核糖体DNA转录间区 (ITS)进行了PCR扩增 ,4种内切酶 (AluⅠ、HaeⅢ、HpaⅡ、TaqⅠ )酶切。结果表明 ,该属的ITS区长度没有明显差异 ,其长度范围在 60 8～ 675之间。酶切图谱能体现不同种间的多态性 ,根据 4种内切酶酶切结果 ,利用UPGMA法构建的单顶孢属分子系统树 ,基本体现了属内不同种间的亲缘关系 。

人血红蛋白β-链基因AvaⅡ位点扩增片断长度多态性

目的：为了研究日本人群β-链基因AvaⅡ酶切位点的遗传多态性以及该位点等位基因频率的分布。方法：采用PCR- RFLP技术,对35例无血缘关系的健康日本大学生的70条染色体进行检测,然后用X^2检验进行统计学处理。结果：等位基因B_1频率为0．4715,等位基因B_2频率为0．5287,杂合度H=0．5429,期望杂合度h=0．4986,多态信息量PIC=0．7635；B_1、B_2的传递规律和理论上预计的完全符合,认为日本人群β-链基因AvaⅡ酶切位点也具有遗传多态性,表明β-链基因AvaⅡ酶切位点具有适合信息,并且与国外报道的无显著性差异。结论：这对遗传制图、基因分离、疾病的关联研究,法医学个体识别和双生子的卵性鉴定有一定的价值。

PEAR1基因多态性与缺血性脑卒中复发易感性的关系研究

目的分析血小板内皮聚集受体1(PEAR1)基因多态性与缺血性脑卒中复发的相关性,为防治缺血性脑卒中复发提供依据。方法选取该院神经内科门急诊和住院确诊为急性缺血性脑卒中的150例患者作为研究对象,根据是否为脑卒中复发分为初发脑卒中组(127例)和复发脑卒中组(23例)。应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法分析PEAR1基因rs12041331位点单核苷酸多态性,并测序验证基因型。结果初发脑卒中组和复发脑卒中组PEAR1基因rs12041331G>A位点GG、GA、AA基因型和G、A等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05);复发脑卒中组的年龄较初发脑卒中组高,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、PEAR1基因rs12041331位点AA基因型与缺血性脑卒中复发有关,是缺血性脑卒中复发的危险因素(P<0.05)。结论PEAR1基因rs12041331G>A位点多态性与缺血性脑卒中复发相关。PEAR1基因纯合突变可能是缺血性脑卒中复发的危险因素,PEAR1基因可能是缺血性脑卒中复发风险预测的候选基因。

胰岛素受体底物1基因Gly972Arg多态性与2型糖尿病不相关

目的 探讨中国汉族人群胰岛素受体底物 1(IRS- 1)基因 Gly972 Arg多态性与 2型糖尿病的关系。 方法 选取 10 2例 2型糖尿病患者及 10 2例糖耐量正常的患者配偶进行对照研究 ,应用聚合酶链反应——限制性片断长度多态性的方法进行胰岛素受体底物 1基因 Gly972 Arg多态性位点基因型检测。 结果 IRS- 1基因 Gly972 Arg突变频率在病例组和对照组均为 2 % ,明显低于白人。 结论 在中国汉族人群中 ,IRS- 1基因 Gly972 Arg突变不是

5-HT转运体基因多态性与孤独症核心家系的关联研究

目的 :探讨中国汉族人群 5 -HT转运体基因多态性 (HTTSNP1 8)与孤独症的关系。方法 :应用聚合酶链式反应与限制性片断长度多态性 (PCR -RFLP)分析方法对 175个孤独症核心家系测定基因型和等位基因。结果 :孤独症患儿与父母的基因频率和基因型频率的分布呈基本一致的趋势。传递不平衡检验(TDT)显示等位基因传递无统计学意义 ,(McNemarχ2 =0 0 0 ,P >0 0 5 )。结论 :本研究未发现 5 -HT转运体基因多态性 (HTTSNP1 8)与孤独症存在关联 ,提示该基因多态性不影响孤独症的易感性 ,在中国汉族孤独症发病中不起主要作用。

载脂蛋白E和脂肪结合蛋白-2基因多态性与2型糖尿病肾病的相关性研究

目的 探讨载脂蛋白E(Apo- E)基因、脂肪酸结合蛋白 2(FABP -2)基因 Ala54Thr的多态性与 2 型糖尿病肾病(DN)的相关性。方法 对65例2型糖尿病(DM)患者与 30 例健康对照者进行血清生化指标检测,并采用多聚酶链反应限制性片断长度多态性(PCR -RFLP)技术,观察Apo -E、FABP -2 Ala54Thr基因多态性,研究其与 DN的关系。结果 正常对照组与糖尿病组的 Apo- E、FABP- 2 等位基因和基因型频率存在差异(P<0.01)。DM3 组的Apo E2等位基因频率、FABP 2 Thr/Thr基因型频率高于正常对照组(P<0.01)。携ε2 等位基因的 DM患者胰岛素抵抗的稳态模式评估指数(HOMA)、甘油三酯(TG)水平高于携ε3、ε4者,胰岛素敏感指数(ISI)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)则低于两者,但无统计学意义。携 FABP- 2 Thr/Thr基因型患者的尿微量白蛋白(UAER)明显高于携Ala/Ala,Ala/Thr基因型者(P<0.05)。Apo- E2 与 FABP- 2 Thr/Thr基因型共显的患者,85.7%出现在 DM3组。结论 Apo -E、FABP- 2 Ala54Thr基因多态性与DN的发生有关,当Apo -E2与 FABP -2 Thr/Thr基因型共显时,可能会加重DN的病情。Apo- E2等位基因与FABP -2 Thr/Thr基因型是预测DN发生和发展有用的指标。

低密度脂蛋白受体基因多态性与心肌梗死相关性的研究

目的 研究中国东北地区低密度脂蛋白受体 (LDLR)基因PvuII多态性与心肌梗死 (MI)的相关性 ,并对其血脂质、脂蛋白水平的关系进行分析。方法 采用PCR -RFLP方法检测 4 1例MI患者和 6 7例健康体检者LDLR基因的多态性分布。结果 ①MI组和对照组的P-P-基因性与高LDL -C和TC水平明显相关 ,P+ P+ 基因性与较低的TC和LDL -C相关。②MI组患者的P-等位基因型相对频率高于正常组 ,两者存在显著性差异。③MI组血清TC和LDL -C水平高于对照组 ,两者存在显著性差异。结论 研究证实LDLR基因PvuII位点的多态性可影响血清胆固醇水平 ,并且与MI的发生密切相关。LDLR基因PvuII位点的多态性变化可作为预测冠心病发生的一个基因标志。

老年人心肌梗死与血管紧张素原基因T174M多态性关系

目的探讨血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)基因T174M变异与老年人心肌梗死(M I)的发病关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)、限制性片段长度多态性(RFLP)分析,对55例呈M I患者和60例无冠心病证据的对照组(老年人)进行AGT基因T174M等位基因检测。结果M I患者AGT基因174MM型(7.27%)和M174等位基因(16.36%)的频率显著高于健康对照组(分别为1.67%和9.17%,2χ=7.55,P=0.022,χ2=5.79,P=0.016),经校正冠心病的主要危险因素后,AGT基因174MM仍可显著增加心肌梗死发生的危险性(比数比3.66,P=0.018)。结论AGT基因T174M可能是老年人M I发病的重要危险因素之一。

胆固醇酯转运蛋白及其基因多态性与2型糖尿病大血管病变的关系

探讨胆固醇酯转运蛋白在 2型糖尿病大血管病变发生中所起的作用及胆固醇酯转运蛋白TaqⅠB基因多态性与大血管病变的关系。对 96例正常对照者及 2 2 6例 2型糖尿病患者的血清胆固醇酯转运蛋白水平及胆固醇酯转运蛋白TaqⅠB基因型进行研究。结果发现 :① 2型糖尿病组胆固醇酯转运蛋白水平较正常对照组明显升高 ,大血管病变组升高更显著 ;②糖尿病大血管病变组B1B1基因型频率 (37.3% )显著高于无大血管病变组(16 .4 % ) ,B1B1基因型大血管病变发生率 (6 8.3% )明显高于B1B2 (4 6 .6 % )和B2B2 (2 9.1% )型 ;③多元回归分析显示 ,高胆固醇酯转运蛋白水平和B1等位基因是 2型糖尿病大血管病变的危险因素。提示 :① 2型糖尿病患者血清胆固醇酯转运蛋白水平升高 ,后者是 2型糖尿病大血管病变的危险因素 ;②胆固醇酯转运蛋白TaqⅠB基因多态性与 2型糖尿病大血管病变发生有关 ,B1等位基因是 2型糖尿病大血管病变的易感基因。

广东人群CYP2C9基因T269C位点多态性研究

目的研究广东人群CYP2C9基因T269C位点多态性。方法PCR扩增跨越CYP2C9基因T269C位点的DNA片断,用MvaI酶切PCR产物,通过PAGE-银染判断基因型。结果在接受检测的158例健康广东人中,共检出2名CYP2C9 T269C位点杂合子个体,其余156人均为野生型纯合子个体。结论广东人群存在CYP2C9 269C即CYP2C9*13等位基因,其频率为0.006;中国人群和韩国人群CYP2C9*13等位基因频率差异无显著性。

急性胰腺炎患者Toll样受体4基因多态性分析研究

目的研究Toll样受体4(TLR4)突变与急性胰腺炎(AP)发展及预后的相关性。方法采用错配聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性分析方法在AP和健康志愿者人群中检测TLR4(896A>G)的突变频率。结果①所有TLR4的突变均为杂合子;②AP组TLR4(-/+)基因型频率在轻症AP组和重症AP中呈轻度升高,与健康志愿者组比较差异无统计学意义(P>0.05);③在AP组中,TLR4(-/+)基因型频率呈波浪形升高趋势,并在胰腺组织坏死合并感染组达到峰值;与健康志愿者组相比,胰腺组织坏死合并感染组TLR4(-/+)等位基因型频率差异有统计学意义(P<0.05);④与无胰腺组织坏死组相比,胰腺组织坏死组TLR4(-/+)基因型频率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TLR4错义突变(TLR4 896A>G)在AP发生发展中具有重要的作用,TLR4的基因突变可以损害机体的防御反应。

白介素13基因多态性与哮喘发病易感性的关系

目的探讨白介素13(IL-13)基因内含子区+1923C/T多态性与哮喘发病易感性的关系。方法采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性技术对150例哮喘患者(哮喘组)和150例健康对照者(对照组)IL-13基因内含子区+1923C/T单核苷酸多态性进行检测,比较其基因型和等位基因分布频率。结果对照组IL-13基因内含子区+1923C/T基因型CC、CT和TT的分布频率分别为41.33%(62/150)、44.00%(66/150)和14.67%(22/150),在哮喘组分别为21.33%(32/150)、41.33%(62/150)和37.34%(56/150),两组各基因型分布频率比较差异有统计学意义(χ2=24.52,P<0.01)。CT、TT基因型者患哮喘的危险性高于CC基因型者(χ2=27.38,P<0.01)。结论 IL-13基因内含子区+1923C/T多态性是影响哮喘发病的重要候选基因,T等位基因与哮喘易感性相关。

HLA-DM基因遗传多态性对系统性红斑狼疮易感性的影响

目的 探索 HL A- DM等位基因频率与基因型分布对系统性红斑狼疮 (SL E)易感性的影响。方法 用多聚酶链反应 -限制性片断长度多态性 (PCR- RFL P)确定 DM的基因型 ,用病例对照研究的方法探索 DM与 SL E的关联性。结果 检测到的 7种 DMA与 DMB等位基因和 4 2种单体型在 SL E组与正常对照组分布一致。DMB* 0 10 2 / 0 10 3基因型在对照组的分布频率明显高于 SL E组 (P <0 .0 5 ) ,但校正后差异无显著性 ,其余 13种基因型在两组差异均无显著意义。结论 HL A-DM基因的遗传多态性对 SL

外显子6基因多态与系统性红斑狼疮的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子受体Ⅱ (TNFRⅡ )外显子 6基因多态与华东地区汉族人群系统性红斑狼疮(SLE)易感性的关系。方法 采用聚合酶链式反应和限制性片断长度多态 (PCR -RFLP)方法对 34例SLE患者和 66例健康对照进行TNFRⅡ外显子 6基因分型。结果 在SLE患者与健康对照之间 ,TNFRⅡ外显子 6R等位基因频率(35 3 % /2 1 2 % ;OR =2 0 3 ,95 %可信限 :1 0 1～ 4 0 8;χ2 =4 63 ,P =0 0 31 )与基因型频率 (67 6 % /37 9% :OR =3 43 ,95 %可信限 :1 32～ 9 0 6 ;χ2 =7 97,P =0 0 0 5)均不同。结论 TNFⅡ外显子 6基因多态可能与华东地区汉族人群系统性红斑狼疮发病有关 。

等位特异PCR方法检测IL-6基因启动子区-634C/G多态性

目的:应用等位特异PCR法检测IL-6启动子区-634位C/G变异,以探讨ASPCR应用的可行性.方法:应用ASPCR法和PCR-RFLP法同时检测101例研究对象IL-6启动子区-634位C/G变异的多态性,并对二者的结果进行比较研究.结果:(1)除一个CC基因型结果不一致外,其余的CG、GG和CC基因型两种方法的结果都一样;(2)ASPCR在单点突变多态性的检测中,具有省时、快速和成本低等优点.结论:APCR方法检测基因的已知突变,具有快速、准确、省时、价格低等优点,在满足引物模板间碱基错配能阻止引物延伸的条件下,可优先选用此法.

PEAR1基因多态性与缺血性脑卒中的相关性研究

目的分析PEAR1基因多态性与缺血性脑卒中相关性,为缺血性脑卒中发病机制的进一步研究提供科学依据,为疾病防治提供新的思路。方法收集昆明医科大学附属延安医院神经内科门急诊或住院确诊为急性缺血性脑卒中患者150例作为实验组,同期150例健康体检者作为对照组,应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法分析PEAR1基因rs12041331位点单核苷酸多态性(SNP),并测序验证基因型。结果卡方检验显示缺血性脑卒中组和正常对照组PEAR1基因rs12041331G>A位点GG、GA、AA基因型和G、A等位基因频率间的差异有统计学意义(P<0.05);缺血性脑卒中组的糖尿病、高血压比例较正常对照组多,同型半胱氨酸(HCY)水平较正常对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析显示PEAR1基因rs12041331G>A位点突变可能是缺血性脑卒中发生的危险因素。结论PEAR1基因rs12041331G>A位点基因多态性与缺血性脑卒中发生相关。rs12041331G>A位点基因可作为缺血性脑卒中风险预测的候选基因。

单核细胞趋化蛋白1基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的 探讨中国西北地区汉族人群中2型糖尿病(T2DM)与单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)-2518(A/G)基因多态性的关系.方法 测量41例正常对照者和57例2型糖尿病患者相关临床生化指标,并采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,观察MCP-1 -2518(A/G)基因多态性,研究其与2型糖尿病的关系.结果 2型糖尿病组与正常对照组的MCP-1等位基因和基因型频率比较差异无统计学意义(P>0.05);多因素Logistic回归分析显示,MCP-1 G等位基因为2型糖尿病的保护因素(OR=0.015,CI=0.005～0.437),且有统计学意义(P<0.05).结论 正常对照组与2型糖尿病组MCP-1 -2518(A/G)基因多态性差异无统计学意义,尚不能认为在中国西北汉族人群中MCP-1基因多态性与2型糖尿病之间有相关性,但G等位基因可能为2型糖尿病的保护因素,它的存在降低2型糖尿病的患病率.

环氧化酶-2基因多态性与冠心病易感性的相关性研究

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）基因-765G/C多态性与冠心病易感性的关系。方法对226例经冠状动脉造影确诊的冠心病患者和240例正常人进行对照研究。应用聚合酶链反应限制性片断长度多态性技术测定COX-2基因-765G/C多态性。结果COX-2基因-765G/C多态性在冠心病组和正常人群（对照组）中分布的差异有显著性,冠心病组765G等位基因频率明显高于对照组（85.0%比79.4%,P〈0.05）。等位基因频率的相对风险分析发现,G等位基因携带者患冠心病的风险是C等位基因的1.471倍（95%CI：1.044-2.072）。结论COX-2基因启动子-765G/C多态性与冠心病发病具有相关性,其中G等位基因可能是冠心病发病的遗传易感基因。

白细胞介素27启动子多态性与慢性乙型肝炎病毒感染的相关性研究

目的探讨慢性乙型肝炎病毒感染与白细胞介素27 p28基因启动子区-964A/G多态性的关系。方法采用聚合酶链式反应限制性内切酶长度多态性(PCR-RFLP)技术对168例慢性乙型肝炎感染者和152例健康对照者白细胞介素27 p28启动子区-964A/G多态性进行分析,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素27血清学水平。结果慢性乙肝感染组白细胞介素27 p28启动子区-964位点的AA基因型频率明显高于健康对照组(OR=1.75;95%CI:1.12-2.72;P=0.013);白细胞介素27水平在慢性乙肝患者显著升高(P<0.001)。结论白细胞介素27 p28启动子区-964A/G多态性与慢性乙肝病毒感染感染存在一定的相关性,A等位基因可能是HBV易感的遗传因素。