限制性片段长度多态性分析法在CXCL10 G-201A位点变异检测中的应用

目的通过检测慢性乙型肝炎重型(chronic severe hepatitis B,CSHB)患者趋化因子CXCL10[干扰素γ诱导蛋白(IFN γ-inducible protein,IP-10)]基因启动子区G-201A位点的变异率,探讨PCR-限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)法用于批量单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分型鉴定的应用价值。方法选取解放军第三〇二医院的200例CSHB患者(CSHB组)为研究对象,300例健康体检者作为正常对照(normal control,NC)组。收集患者EDTA-K2抗凝全血,提取白细胞DNA,采用PCR-RFLP法进行检测,对其中185例[CSHB组93例(46.5%),NC组92例(30.7%)]样本(占总样品的37%)用DNA测序法进行验证。结果 185例样本用DNA测序法进行验证,经Kappa检验k=0.937,P<0.05,说明二种检测结果之间的一致性具有统计学意义,二种方法的一致率为97.84%,符合体外诊断试剂临床试验指导方案中关于二种方法一致性的专业要求(一致率≥95%)。CSHB组趋化因子IP-10相关的G-201A的突变率为21.28%、NC组为13.82%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CSHB组患者的趋化因子IP-10基因启动子区G-201A位点的突变率明显高于NC组。本实验结果表明,PCR-RFLP法经过直接测序法验证结果可靠,可以用于标本的SNP分型。

双相情感性障碍患者的基因限制性片段多态性分析

应用Ｈ－ｒａｓ－Ｉ探针，分析了１８例双相情感性障碍患者和２０名健康人基组ＰｖｕＩＩ酶切的限制性片段多态性，显示两组间无显著性差异。应用Ｈ－ｒａｓ－Ｉ探针，分析了１７例双相情感性障碍患者和１８名健康人基组ＳａｃＩ酶切的ＲＦＬＰ，发现ＲＦＬＰ在两组资料中有非常显著性差异。

胰岛素基因可变重复序列多态性与PCOS的相关性

目的:探讨胰岛素基因可变重复序列(INS-VNTR)多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)易感性之间的关系及其与PCOS发生胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法:用聚合酶链反应-限制性片段多态性技术,检测130例PCOS患者(PCOS组)和130例非PCOS妇女(对照组)的INS-VNTR多态性。结果:2组的Ⅰ/Ⅰ、Ⅰ/Ⅲ和Ⅲ/Ⅲ基因型频率分布差别无统计学意义(P=0.196),经Logistic回归分析,Ⅲ/Ⅲ基因型并没有增加PCOS发病的危险性(OR=6.25,95%CI:0.74～52.79)。PCOS胰岛素抵抗亚组(PCOS-IR组,88例)相应位点的INS-VNTR基因型频率及等位基因频率均高于PCOS非胰岛素抵抗亚组(PCOS-NIR组,42例,P<0.05);PCOS患者中Ⅲ/Ⅲ基因型者的INS、IR状态高于Ⅰ/Ⅰ基因型者。结论:VNTR可能不是PCOS发病的易感基因,但是Ⅲ型INS-VNTR可能使PCOS患者发生IR的危险性增加。

3种类型脑梗死患者载脂蛋白E基因多态性分析

目的:探讨载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与不同类型脑梗死的关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP),检测115例脑梗死患者(脑梗死组)和120例健康受试者(对照组)的ApoE基因型和基因频率,并将脑梗死患者分为3种类型:动脉粥样硬化性血栓形成(ACI)69例、心源性脑栓塞8例和腔隙性梗死38例。同时检测研究对象血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。结果:脑梗死组ε4基因频率显著高于对照组(P<0.05),ε4在ACI患者中频率较高,与腔隙性梗死和对照组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。在脑梗死患者中,ε2有升高HDL的作用,ε4有升高TG的作用。结论:ApoE ε4是动脉粥样硬化性血栓形成的遗传易感因子。ApoE可能通过引起血脂代谢紊乱而增加脑梗死发病危险性。

对甘肃回族、藏族、汉族人群CYP2C19基因多态性分析

目的:确定细胞色素P4502C19(CYP2C19)在甘肃地区回族、藏族、汉族人群中的基因型及等位基因分布特征,并考察性别对其基因多态性的影响。方法:选取甘肃地区回族、藏族、汉族无亲缘关系健康志愿者,采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性法分析CYP2C19基因多态性。结果:检测到CYP2C19的6个基因型,其分布在男性和女性间无显著差异,但在3个民族间分布差异显著(P<0.05)。结论:在甘肃地区回族、藏族、汉族健康人群中,CYP2C19的基因型分布有显著差异,而性别对CYP2C19遗传多态性无显著影响。

C-反应蛋白及其-717A／G多态性与心房颤动的相关性

目的:研究江苏南通地区人群高敏C-反应蛋白(hs-CRP)浓度及其-717A/G多态性与心房颤动的相关性。方法:通过对92例心房颤动患者和60例非房颤对照者的性别、年龄、体质量指数等一般临床资料的比较,分析房颤与其危险因素的关系。应用免疫比浊法测hs-CRP,PCR-RFLP法检测CRP-717A/G基因型。结果:房颤患者CRP浓度与左房内径(LAD)呈正相关(r=0.58,P<0.01),房颤组CRP浓度显著高于对照组(P<0.01),非阵发性房颤患者hs-CRP浓度高于阵发性房颤患者(P<0.05)。2组间A/A与G/A+G/G基因型分布差异无统计学意义(P>0.05),但G等位基因在房颤组中表现为低频率(P<0.05)。结论:hs-CRP浓度与房颤及房颤亚型相关,hs-CRP浓度与LAD呈正相关,炎症有可能通过结构重构来影响房颤的发生,CRP-717A/G多态性与房颤的关系尚需更大规模的前瞻性研究。

中国北京市区健康人群白细胞介素6基因启动子区基因的多态性及与亚裔和高加索人群的比较

目的:动脉硬化、老年痴呆、糖尿病、骨质疏松等均有循环中炎症介质持续升高的表现。观察北京市区健康人循环中炎症介质白细胞介素6启动子区基因多态性与循环中白细胞介素6、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原的关系,并评价白细胞介素6基因多态性的种族差异。方法:采用随机整群抽样的方法于2003-03/2004-03筛选中国北京地区30岁以上自我评价健康的汉族居民662人,男365人,女297人。通过身体检查及血液学及血生化学检测,了解调查对象健康状况;测定入选人群白细胞介素6、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原;检测白细胞介素6启动子区174(G/C),597(G/A),572(G/C)基因多态性,观察其与循环中炎症指标白细胞介素6、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原的关系。结果:按意向处理分析,进入结果分析662人。①入选健康成人662人,174位均为GG型,未发现GC和CC型;597位GG型占99.24%,仅有5人为GA型,未发现CC型;572位存在GG,CC,GC3种基因型,G和C等位基因频率分别为0.22和0.78,基因型和等位基因频率均无性别差异。②G等位基因(GG+GC型)携带者循环中白细胞介素6、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原水平明显高于CC基因型犤(2.91±2.21)ng/L,(2.43±2.31)mg/L,(3.05±0.71)g/L;(2.44±1.47)ng/L,(1.41±1.57)mg/L,(2.70±0.64)g/L,P=0.03,0.01,0.01犦。③中国北京地区汉族人群白细胞介素6启动子区174(G/C),597(G/A)、572(G/C)的基因型分布与日本、韩国亚裔人群相似(174位和597位几乎均为GG型,572位G等位基因频率分别为0.28,0.23,0.25,P>0.05),而明显不同于德国、瑞典高加索人群(174位存在GG,GC,CC,597位存在GG,GA,AA3种基因型,572位G等位基因频率分别为0.95,0.93,P<0.01)。结论:白细胞介素6启动子区174(G/C),597(G/A),572(G/C)基因多态性存在种族差异,亚裔人群不存在174(G/C),597(G/A)基因多态性,572位基因型频率也明显不同于高加索人群。572(G/C)位存在基因多态性并影响循环中白细胞介素6的表达从而影响机体炎症状态,G等位基因为少见基因,其携带者白细胞介素6和超敏C反应蛋白水平明显高于CC型个体。

血栓素A2受体基因多态性与脑梗死的相关性研究

目的探讨上海地区汉族人群血栓素A_2受体(TXA_2R)基因多态性与脑梗死的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法对138例脑梗死患者和135例正常老年对照者TXA_2R基因rs768963位点多态性进行分析,计算其基因型频率和等位基因频率。结果 Logistic回归分析结果显示,血压和血糖水平是脑梗死的独立危险因素。脑梗死组与正常老年对照组受试者TXA_2R基因rs768963位点的基因型(TT基因型、TC基因型和CC基因型)和等位基因(T和C)频率比较,差异均无统计学意义(p>0.05);进一步Logistic回归分析结果显示,TXA_2R基因rs768963位点基因突变与性别、年龄、血脂、血压和血糖水平均无相关性(P>0.05)。结论 TXA_2R基因rs768963位点多态性可能与上海地区汉族人群脑梗死无关。

AGTR1基因多态性与糖尿病肾病易感性相关

目的:探讨Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体(angiotensinⅡtypeⅠreceptor,AGTR1)A1166C多态性与糖尿病肾病的关系。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术研究AGTR1多态性在正常对照组(157例)、2型糖尿病非肾病组(141例,糖尿病病程≥10年)、2型糖尿病肾病组(152例)中的基因频率分布。结果:2型糖尿病肾病组AGTR1 C等位基因频率明显高于正常对照组和2型糖尿病非肾病组(P<0.05),正常对照组与2型糖尿病非肾病组间差异无统计学意义。结论:AGTR1 A1166C基因多态性与糖尿病肾病相关,即C等位基因携带可能增加糖尿病肾病的发生风险。

N^(5,10)-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与宁夏回族原发性高血压的关系

目的:探讨N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)C677T位点突变与宁夏回族人群原发性高血压(EH)之间的关系。方法:收集原发性高血压病患者(EH组)146例,健康体检正常血压者(NT组)112例,抽外周静脉血提取DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度(PCR-RFLP)多态性技术检测MTHFR基因多态性。结果:EH组和NT组CC、CT和TT基因型总体分布频率差异有统计学意义(P<0.05),EH组TT基因型频率及T等位基因频率均高于NT组,差异有统计学意义(P<0.05)。CC基因型组和CT+TT基因型组舒张压差异无统计学意义(P>0.05),但收缩压、脉压和平均动脉压CT+TT基因型组高于CC基因型组,差异有统计学意义(P<0.05)。二元逐步Logistic回归结果显示,CT+TT基因型,女性,BMI、TG、BUN增高为EH的危险因素,GLU为保护因素。结论:MTHFR基因C677T多态性可能与宁夏回族EH发病有关,T等位基因有可能是宁夏回族人群EH的易感基因。

儿童急性淋巴细胞白血病ERCC1基因多态性分析

目的：探讨剪切修复基因ERCC 18092C〉A和19007G〉A遗传多态性与儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）的相关性。方法：采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法,分析183例儿童ALL患者（病例组）和190例健康对照者（对照组）的ERCC1基因型。结果：病例组与对照组中2个基因位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律;病例组ERCC1基因C8092A位点的基因型频数分布：AA为15（8.2%）,AC为57（31.1%）,CC为111（60.7%）;对照组该位点基因型频数分布：AA为13（6.8%）,AC为83（43.7%）,CC为94（49.5%）,两组间基因型频数分布差异有显著性（P〈0.05）;CC基因型频数病例组高于对照组（P〈0.05）,其OR为1.57（95%CI为1.04-2.37）;按性别分层,ERCC1G19007和C8092A男性病例组与男性对照组的基因型频数分布差异均有显著性（P〈0.05）;按年龄分层,ERCC1C8092A小于10岁病例组与对照组CC基因型分布频数差异有显著性（P〈0.05）。结论：ERCC 18092CC基因多态性与中国儿童ALL的发生发展有关联性。

桂东南地区2型糖尿病肾病与MTHFR基因C677T多态性的相关性

目的研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与2型糖尿病肾病(DN)的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性的方法,检测桂东南地区2型糖尿病患者163例MTHFR基因C677T多态性,其中DN 82例、单纯糖尿病(DM)81例和健康对照组(CON)77例。同时检测血清同型半胱氨酸(Hcy)水平,并比较各组间MTHFR基因型频率、等位基因频率和Hcy水平。结果 DN组MTHFR基因纯合基因型(TT)、杂合基因型(CT)及T等位基因频率(分别为4.9%、37.8%和23.8%)均明显高于DM组(分别为2.5%、28.4%和16.7%)和CON组(分别为0.0%、29.8%和14.9%),基因型和等位基因频率分布差异均有统计学意义(P<0.05),而DM组和CON组之间的分布差异无统计学意义(P>0.05)。单因素Logistic回归分析结果显示,MTHFR基因型C677T多态性与DN的发生密切相关(OR值及其95%CI分别为1.660、1.038和2.655)。携带T等位基因患者血中Hcy水平显著高于未携带T等位基因患者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MTHFR基因C677T多态性与桂东南地区2型糖尿病患者DN相关,MTHFR T等位基因可能是该地区DN的易感基因。

LRRK2基因多态性与散发性阿尔茨海默病相关性的研究

目的：探讨LRRK2基因多态性同散发性阿尔茨海默病（SAD）的相关性。方法采集216例中国东南部福建地区汉族SAD患者和433例健康者的周围血液标本并提取DNA ，应用聚合酶链反应（PCR）-限制性酶切方法（RFLP）进行LRRK2基因R1628P和G2385R多态位点的基因型检测，变异者进行直接测序验证。结果R1628P检测中，SAD组C等位基因频率显著低于对照组（0．5％ vs 2．1％，χ2＝4．959，P＜0．05）；SAD组GC基因型频率也显著低于对照组（0．9％ vs 4．2％，χ2＝5．037，P＜0．05）。Logistic回归分析校正年龄、性别等因素的影响后，发现携带R1628P多态者比未携带者AD发病风险降低88％（OR：0．217，95％ CI：0．050～0．945，P＜0．05）。G2385R检测中，SAD组A等位基因频率及GA基因型频率分别同对照组比较，差别无统计学意义（A等位基因：2．1％ vs 1．4％，χ2＝0．881，P＞0．05；GA基因型：4．2％ vs 2．8％，χ2＝0．896，P＞0．05）。结论 LRRK2基因R1628P多态可能是SAD发病中的一个保护性因子，而G2385R多态同SAD发病没有相关性。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C基因G 73A位点的多态性与急性心肌梗死关系的探讨

目的探讨半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)基因外显子+73G/A(简称G73A)位点变异与急性心肌梗死(AMI)的关系;同时观察池州地区汉族AMI患者血浆Cys C浓度的变化。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法分析112例AMI患者和110名健康对照者全血DNA中Cys C基因G73A位点变异的多态性分布情况,同时检测AMI组和对照组血浆Cys C浓度。结果AMI患者血浆Cys C浓度明显低于对照组(P<0.05)。在AMI患者组中,G73A位点GG/GA/AA基因型频率分别为64.3%、28.6%和7.1%,G等位基因频率为78.6%;对照组G73A位点GG/GA/AA基因型频率分别为67.3%、28.3%和4.5%,G等位基因频率为81.4%,2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论Cys C水平的降低可能是AMI发病的危险因素之一;池州地区汉族AMI患者和正常人群中存在Cys C基因G73A位点变异的多态性,这个位点发生变异可能对AMI疾病的的发生不起主要作用。

西安地区NINJ2基因多态性与缺血性脑卒中发生的关系

[目的]探讨神经损伤诱导蚕白2（NINJ2）基因多态性与西安地区缺血性脑卒中发生的关系。[方法]选择2014年5月至2016年4月本院神经内科收治的218例脑梗死患者为观察组，选取同期入院进行健康体检的124例健康人作为对照组，采用聚合酶联反应一限制性片段长度多态性技术对NINJ2的rs10849373、rs12425791、rs11833579、rs11063806位点进行基因型检测，比较两组基因型和等位基因频率的差异。[结果]rs10849373、rs12425791、rs11833579、rs11063806位点GG、GA和AA基因型在观察组和对照组的频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律；观察组rs10849373位点AA、GA基因型以及等位基因A的频率分别为11．47％、41．28％和32．11％，均显著高于对照组（P〈0．05）；rs12425791、rs11833579、rs11063806位点在观察组和对照组间的分布差异无统计学意义（P〉0．05）。[结论]NINJ2基因中rs10849373位点与西安地区缺血性脑卒中发生有关，其确切机制有待进一步研究。

CYP2C19基因多态性对接受椎动脉支架患者预后的影响

目的探讨在椎动脉支架置入术后患者的CYP2C19基因型分布与椎动脉支架内再发狭窄、复发性卒中和出血等预后不良事件的关系。方法回顾性分析205例接受CYP2C19基因检测的椎动脉狭窄并行支架置入术患者的临床资料。根据CYP2C19基因型所致肝脏对药物代谢情况,将椎动脉支架置入术后患者分为快、中、慢代谢3组,观察预后。结果3组患者在接受氯吡格雷及阿司匹林双联抗血小板治疗前,血小板抑制率未达标(ADP%<50%)的患者数量比较,差别无统计学意义(P>0.05);接受氯吡格雷及阿司匹林双联抗血小板治疗6月后,差别有统计学意义(P<0.05)。3组患者在椎动脉支架置入术后规律氯吡格雷及阿司匹林双联抗血小板治疗6月内椎动脉支架内再狭窄和复发性脑梗死患者数量比较,差别有统计学意义(P<0.05),但对于其常见副作用如颅内出血及胃肠道、牙龈等其他部位出血的患者数量比较,差别无统计学意义(P>0.05)。结论在椎动脉支架置入术后患者中,CYP2C19基因快代谢型使用氯吡格雷及阿司匹林双联抗血小板治疗预防椎动脉支架内再狭窄、复发性脑梗死的获益明显优于中代谢型和慢代谢型,且颅内出血及胃肠道、牙龈等其他部位出血影响不明显。在椎动脉支架置入术后常规使用氯吡格雷及阿司匹林双联抗血小板治疗的患者中,CYP2C19基因多态性为影响患者椎动脉支架内再狭窄和复发性脑梗死的重要危险因素。

山东汉族女性ERα基因多态性与Graves病的关系

目的探讨ERα基因多态性与山东汉族女性Graves病(GD)的关系。方法用PCR-RFLP方法检测100名汉族健康女性和200名汉族女性GD患者ERα-PvuⅡ基因型和ERα-XbaI基因型,放免法测定甲状腺功能。结果GD患者与健康对照组PvuⅡ酶切基因型、等位基因频率间均存在差异,有统计学意义(均P<0.05),而XbaI酶切基因型、等位基因频率差异无统计学意义(均P>0.05)。结论ERα-PvuⅡ基因型可能是预测汉族女性GD的遗传标志之一。

山东汉族女性ERα基因多态性与桥本氏病的关系

目的探讨ERα基因多态性与山东汉族女性桥本氏病(HT)的关系。方法采用PCR-RFLP法检测100名汉族健康女性和100名汉族女性HT患者ERα-PvuⅡ基因型和ERα-XbaⅠ基因型,放免法测定甲状腺功能。结果HT患者与对照组ERα-PvuⅡ基因型和ERα-XbaⅠ基因型,等位基因频率的差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论ERα-PvuⅡ基因型、ERα-XbaⅠ基因型不能作为预测汉族女性发生HT的危险性遗传标志。

趋化因子CXCL5启动子区-156G/C基因多态性与2型糖尿病的关系

目的:探讨趋化因子CXCL5基因启动子-156位点G/C单核苷酸多态性与2型糖尿病的关系。方法:随机选择我院2型糖尿病患者(T2DM组)210例,对照组171例。采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测趋化因子CXCL5基因启动子-156位点G/C多态性。结果:趋化因子CXCL5启动子-156G/C多态性(各基因型频率、C等位基因频率)在T2DM组与对照组的分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CXCL5基因多态性可能不是糖尿病发病的危险因素。

载脂蛋白E基因多态性与老年外周动脉硬化闭塞病的相关性

目的探讨北京万寿路社区老年人群载脂蛋白E(apoE)基因多态性与老年外周动脉硬化闭塞病(peripheralarterial occlusive disease,PAOD)的相关性。方法用多重四引物扩增受阻突变体系PCR技术,检测了153例老年PAOD患者(PAOD组)及246例健康老年人(NC组)的apoE基因多态性。结果 apoE等位基因呈多态性。apoE6种基因型频率(ε4/4,ε4/3,ε4/2,ε3/3,ε3/2,ε2/2)及3种等位基因频率(ε4,ε3,ε2)的分布在老年PAOD组与NC组间无显著差异(P>0.05)。结论 apoE基因多态性不是老年PAOD的独立危险因素。