云贵两省三地带绦虫的分子鉴定——核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)限制性酶切片段长度多态性(RFLP)分析

目的用PCR-RFLP方法对rDNA-ITS1片段进行分析,以进一步明确云贵地区是否存在牛带绦虫亚洲亚种,并建立一种快速鉴定方法。方法取贵州都匀株(DY)、贵州从江株(CJ)、云南大理株(DL)带绦虫及台湾株(TW)成虫标本,剪取孕节,抽提DNA,PCR扩增rDNA-ITS1片段,分别用4种限制性内切酶MspI、CfoI、AluI、RsaI对扩增片段作酶切分析。结果PCR产物经AluI、RsaI酶切后,TW、DL、DY和CJ株RFLP图谱一致;经MspI、CfoI酶切后,TW、DL和DY株RFLP图谱一致,CJ株显著不同。结论1)DL和DY株与TW株同属牛带绦虫亚洲亚种;而CJ株是传统牛带绦虫;2)rDNA-ITS1的PCR-RFLP分析方法简便,可以用于带绦虫的分类学研究。

亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性与原发性高血压患者动脉顺应性的关系

目的研究亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性与原发性高血压及动脉顺应性的关系。方法对695例原发性高血压患者和509例年龄匹配的正常对照者采用聚合酶链反应和限制片长多态性分析方法进行基因多态性分析,电泳判断基因型及测序,并测定颈动脉—桡动脉脉搏波速度和颈动脉—股动脉脉搏波速度。结果高血压组TT基因型频率和T等位基因频率显著高于正常对照组(26.5%比20.6%及48.7%比42.4%,P=0.015和0.002)。T等位基因携带者的颈动脉—股动脉脉搏波速度显著高于CC基因型者(P<0.05),高血压组颈动脉—桡动脉脉搏波速度在T等位基因携带者也显著高于CC基因型者(P=0.001)。携带T等位基因的高血压患者颈动脉—股动脉脉搏波速度及非单纯收缩期高血压患者颈动脉—桡动脉脉搏波速度均显著高于CC基因型者(P<0.05)。结论亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性可能与原发性高血压发病危险性增加有关,并且677T等位基因可能是高血压动脉硬化的遗传因素。

血小板活化因子乙酰水解酶基因多态性与支气管哮喘的相关性

目的研究血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)基因多态性与支气管哮喘儿童发病的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术,对53例哮喘及35例正常对照组儿童PAF-AH第11外显子Ala379Val位点基因多态性进行分析。结果哮喘组患儿基因组型频率和等位基因频率与对照组比较均无显著性差异(P均>0.05)。结论PAF-AH第11外显子Ala379Val基因突变与儿童支气管哮喘发病无关。

中国荷斯坦奶牛与鲁西黄牛线粒体DNA多态性和系统进化分析

为阐明中国荷斯坦奶牛和鲁西黄牛的线粒体DNA多态性及其起源关系,提取了2个品种牛外周血液中的线粒体DNA(mtDNA),用PCR方法将牛mtDNA全长分为4段进行扩增,并用NlaⅢ、HpaⅡ、BglⅡ等16种限制性内切酶进行酶解消化,分析2个品种牛mtDNA的多态性,最终经7种限制性内切酶片段长度多态性分析,共归纳出4种主要的单倍型。通过对2个品种牛mtDNAD环全序列的聚类分析表明:鲁西黄牛和中国荷斯坦奶牛可能均为混合母系起源,源于欧洲普通牛和印度瘤牛。该研究结果对提高动物体外受精和体细胞核移植效率等生物技术平台有一定的理论指导意义。

Bcl-2基因多态性与乳腺癌临床生物学指标的关系

目的：探讨凋亡基因Bcl-2启动子区C（-938）A单核苷酸多态性（snigle nucleotide polymorphism,SNP）与河北省乳腺癌患者临床生物学指标的关系。方法：采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性分析（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）方法检测113例乳腺癌患者Bcl-2基因C（-938）A SNP的3个基因型（即AA、AC和CC）,并与临床生物学指标相关联,比较各组间基因型频率的分布情况。结果：按腋淋巴结转移个数进行分层分析,AA型和AC＋CC型在无转移、1~3个转移、≥4个转移组中分别占26.8%、47.8%、52.6%和73.2%、52.2%、47.4%,两组比较差异有统计学意义（χ2=6.337,P=0.042）;与AC＋CC型相比,AA型在≥4个转移组OR值为3.041（95%CI：1.072~8.626）。在组织学分级中,AA型和AC＋CC型在Ⅰ~Ⅱ级、Ⅲ级中分别占30.9%、57.9%和69.1%、42.1%,两组基因型分布差异有统计学意义（χ2=5.055,P=0.025）;与AC＋CC型相比,AA型在肿瘤分化Ⅲ级组中OR值为3.082（95%CI：1.122~8.465）。按雌激素受体（estrogen receptor,ER）、孕激素受体（progesterone receptor,PR）和C-erbB2蛋白表达水平进行分层分析,发现AA型和AC＋CC型的上述指标分布差异无统计学意义（χ2=3.005,χ2=1.504,χ2=1.163;P〉0.05）。结论：乳腺癌患者Bcl-2基因C（-938）A SNP的AA基因型与其腋淋巴结转移率较高和肿瘤组织分化较差相关。

维吾尔族和汉族人群RANTES基因多态性特征及其对HIV-1感染的意义

目的 分析RANTES启动子区等位基因在中国维吾尔族和汉族健康人和HIV 1感染者中的分布特点 ,以期阐明RANTES基因突变型和人类免疫缺陷病毒(HIV 1 )感染在不同民族人群的关系。方法 利用PCR RFLP法对维吾尔族和汉族HIV 1感染者和健康人群的 86 5份样品的RANTES 4 0 3、 2 8等位基因进行检测。结果 两个位点在维吾尔族和汉族人群均有较高的等位基因频率 ,分布基本一致 ;RANTES等位基因具有 6个基因表型 ,分别为AC/AC、AC/AG、AC/GC、AG/GC、GC/GC和AG/AG ;从单倍型看 ,汉族和维吾尔族均以GC为最高 ,占 6 2 7% ,AC分别为 2 8 7%和 30 4 % ,AG分别为 8 6 %和 6 8%。但是从单个位点看 ,HIV感染者和健康人、吸毒者差异均无统计学意义(P >0 0 5 ) ;从基因表型分析 ,与AC/AC比较 ,AC/AG、AC/GC、AG/GC、GC/GC的OR值显示都有不同程度的关联(OR =0 33～0 81 )。结论 汉族和维吾尔族中RANTES启动子区 4 0 3/ 2 8均有较高的突变频率 ;与AC/AC比较 ,AC/AG、AC/GC、AG/GC。

广西巴马地区长寿老人 ApoE 基因多态性与认知功能的关系

目的:研究广西巴马地区长寿老人载脂蛋白E(ApoE)基因多态性的分布及其与认知功能改变的关系。方法:采用简易精神状态量表(MMSE)对112例90岁以上广西巴马地区长寿老人进行认知功能检查,并用限制性酶切片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法进行ApoE 基因分型。根据MMSE 得分将研究对象分为认知功能正常组和认知功能障碍组.比较两组人群的基因型、基因频率的分布特征。结果:巴马长寿老人中发生认知功能障碍者占14.29%。长寿老人中ApoEε3/3基因型分布的百分比最大,其次是ε2/3,而ε4/4最少。ApoE 各基因型和等位基因频率认知功能正常组和认知功能障碍组相比较,ε4等位基因频率认知障碍组明显高于认知正常组(P<0.01),ε4基因携带者认知功能障碍发生率明显高于其他基因携带者。结论:巴马地区长寿人群中,ApoEε3/ 3为最常见的基因型,而ε4/4最少;ApoE 基因多态性与巴马长寿老人认知功能改变有关联;ApoEε4基因仍然是长寿老人认知功能障碍发病的危险因子,较低的ApoEε4等位基因频率可能是巴马地区长寿老人认知功能保存较好的原因之一。

CD24基因多态性与多发性硬化患病易感性研究

目的探讨CD24基因多态性与多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的相关性。方法以来自中国南方汉族人群的83名确诊MS患者和110名非自身免疫性疾病的患者及健康志愿者为研究对象,利用PCR—RFLP 技术检测CD24 E2+226C／T位点酶切多态性。结果 CD24 E2+226位点T等位基因频率MS组明显高于对照组 (MS 44．6％ vs CON 33．2％,P=0．022)。未发现CD24基因型等位基因与性别、疾病发病年龄、MS临床类型及临床严重程度之间存在相关性。结论中国南方汉族人群CD24基因多态性与MS患病相关,该基因可能是MS的易感基因。

GABRA3基因rs12688628位点G/T多态性与甲亢性低钾性周期性麻痹的相关性研究

目的探讨GABRA3基因rs12688628位点G/T多态性与中国南方汉族男性人群甲亢性低钾性周期性麻痹(Thyrotoxic Hypokalemic Periodic Paralysis,THPP)遗传易感的相关性。方法以来自中国南方汉族人群的35例THPP患者,35例Graves’病不伴低钾瘫痪(Graves’Disease without hypokalemic periodic paralysis,GD)患者、25例非甲亢性低钾周期性麻痹(hypokalemic periodic paralysis,HPP)患者及35例健康志愿者(healthy indiciduals,NC)为研究对象,均为男性,抽取外周静脉血提取DNA,巢式PCR扩增GABRA3基因,通过限制性内切酶消化和琼脂糖电泳显示GABRA3基因多态性。对所有研究对象进行TSH、FT4、FT3测定,THPP患者和HPP患者麻痹发作时测定血K+。结果 GABRA3基因3号内含子rs12688628位点G等位基因型THPP组高于其他3组(THPP 36%vsHPP组34%vs GD组3%vs正常对照组14%),与GD和正常组均有显著差异,但与HPP组间比较无明显差异。结论中国南方汉族人群GABRA3基因rs12688628位点G/T多态性与THPP发病相关,该基因可能是THPP的易感基因。

2型糖尿病患者APOA5—1131T／C基因多态性与血脂水平的相关性研究

目的探讨载脂蛋白A5基因（APOAS）-1131T／C多态性与广州市2型糖尿病患者血脂水平的相关性。方法用聚合酶链反应．限制性片段长度多态性分析（PCR—RFLP）技术检测75例健康人及86例2型糖尿病患者APOA5-1131T／C基因型，并统计等位基因频率分布情况；用Olympus AU2700分析仪测定所有研究对象的血脂水平。结果2型糖尿病组APOA5—1131T／C基N频率、等位基因频率与健康对照组差异无统计学显著性意义（P〉0．05）；2型糖尿病组C等位基因携带者TG水平显著高于非C等位基因携带者（P〈0．05）。结论APOA5—1131T／C多态性影响2型糖尿病患者血浆TG水平，APOA5-1131C等位基因与2型糖尿病血浆TG水平增高有密切关系。

ICOS基因多态性与中国南方汉族人群多发性硬化的相关性

目的探讨可诱导协同刺激分子(inducible costimulate,ICOS)基因多态性与多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)遗传易感性。方法以来自中国南方汉族人群的83名确诊MS患者和110名非自身免疫性疾病的患者及健康志愿者为研究对象,利用PCR-RFLP技术监测ICOS基因-2394/2119位点酶切多态性。结果 ICOS-2394位点TT基因型频率MS组明显高于对照组(MS33.7%VS对照组10.9%,P<0.001),携带T等位基因可增加MS患病危险(OR=3.482,P<0.001),ICOS-2119位点TT基因型MS组明显低于对照组(MS4.8%vs对照组15.5%,P<0.05)。结论中国南方汉族人群ICOS基因多态性与MS发病相关,该基因可能是MS的易感基因。

线粒体ATPase-6基因多态性与男性精子活力的关系

目的探讨线粒体ATP合成酶6亚基(ATPase-6)基因多态性与男性精子活力的关系。方法选择弱精子症患者319例(观察组)及精子活力正常者344例(对照组),采用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性分析技术检测其线粒体ATPase-6基因(+9 052 bp)的HaeⅡ酶切位点多态性,并对两组的基因型分布及等位基因频率进行Hardy-Weinberg平衡检测,分析ATPase-6突变基因频率与精子活力的关系。结果观察组的hh、Hh、HH基因型分布分别为19.74%、1.25%、79.01%,对照组分别为4.94%、0.58%、94.45%,两组基因型分布均处于Hardy-Weinberg平衡范围;但观察组的突变型基因(h)频率明显高于对照组(P<0.01)。结论 ATPase-6基因(+9 052bp)HaeⅡ酶切位点突变可能影响ATPase-6基因的翻译效率,进而影响男性精子活力,引起弱精子症。

2型糖尿病与正常人群中β_3肾上腺素能受体基因Trp64Arg多态性表型征

方法 应用PCR—RFLP技术检测了相互间无一级亲属关系的124位2型糖尿病患者及138位非糖尿病对照人群中β_3肾上腺素能受体的一处错义突变(Trp64Arg),同时检查了体重指数、腰臀比例、血压,测定了血脂及OGTT或馒头餐试验中Omin及120min血糖及胰岛素。结果 非糖尿病人群中Trp64Arg的等位基因频率0.17,突变频率在糖尿病与非糖尿病之间相比无统计学显著性差异(P>0.05);突变与否间上述临床特征相比未见统计学显著性差异(P>0.05)。结论 该突变至少在其杂合子型可能不是中国人散发2型糖尿病的主要决定因素;纯合子突变型可能导致2型糖尿病早发,有待今后积累资料深入研究。

G蛋白β3亚单位基因C825T多态性与高血压患者的肥胖无关

目的 探讨G蛋白β3亚单位基因C82 5T多态性与原发性高血压患者肥胖的相关关系。 方法 采用聚合酶链反应结合限制性内切酶片段长度多态分析方法检测 14 7例健康人和 32 1例高血压患者的G蛋白 β3亚单位C82 5T多态性 ,并测定高血压患者的体质指数、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及空腹血糖浓度。结果 高血压组G蛋白β3亚单位C82 5T多态性中基因型频率 (CC为 2 8.7% ,CT为 5 2 % ,TT为19.3% )、等位基因频率 (C为 5 4 .6 72 % ,T为 4 5 .33% )与正常对照组基因型频率 (CC为 2 7.2 % ,CT为 4 6 .9% ,TT为 2 5 .9% )、等位基因频率 (C为 5 0 .7% ,T为 4 9.3% )比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;CC基因型患者的体质指数、血脂水平与CT +TT基因型患者比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 G蛋白 β3亚单位基因C82

PPARγC161T基因多态性与原发性高血压证型的相关性研究

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)C161T基因多态性与原发性高血压(EH)阴虚阳亢型、痰湿壅盛型的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)分析阴虚阳亢型与痰湿壅盛型PPARγC161T多态性的基因型及等位基因频率分布。结果阴虚阳亢型与痰湿壅盛型基因频率及等位基因频率相近。结论PPARγC161T基因多态性在EH阴虚阳亢型与痰湿壅盛型两种证型中分布相近。

维生素D受体基因BsmⅠ多态性与北方汉族成人慢性肾功能不全骨密度的关系

目的:探讨维生素D受体(VDR)基因BsmⅠ位点多态性与北方汉族成人慢性肾功能不全骨密度的关系,探讨影响骨密度的遗传易感因素。方法:选取211名河北联合大学附属医院连续收治的汉族成人(年龄≥18岁)慢性肾功能不全患者并根据血肌酐(Scr)水平分为肾功能不全组和肾功能衰竭组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)的方法检测VDR基因BsmⅠ多态性位点,对慢性肾功能不全相关的因素进行问卷调查,同时检测入院24 h内肝肾功能、血钾、钠、氯、钙、磷、甲状腺功能、血甲状旁腺激素水平,及腰椎L2～4、颈椎、Wards三角部位骨密度。用Pearson相关分析进行年龄及体质指数(BMI)与骨密度关系的研究,用协方差分析的方法比较年龄、BMI校正后各部位骨密度与VDR基因型之间的关系。结果:肾功能不全组和肾功能衰竭组VDR基因BsmⅠ多态性分布无统计学意义(χ2=0.088,P=0.591)。年龄、BMI与骨密度的Pearson相关分析发现,年龄与各部位的骨密度呈负相关(P<0.01),BMI与骨密度值呈正相关(P<0.01)。采用协方差分析对年龄与BMI进行校正后,对不同部位的骨密度值与VDR基因型相关性进行分析,发现VDR不同基因型间腰椎的骨密度值差异有统计学意义(P<0.05),aa基因型具有较低骨密度(P<0.05)。结论:VDR基因BsmⅠ位点多态性与慢性肾功能不全患者骨密度存在关联,可能是影响骨密度的遗传易感因素。

限制性酶切片段长度多态性分析用于乙型流行性感冒病毒巴拿马株与维多利亚株的快速鉴定

利用限制性酶切片段长度多态性分析 (RFLP)鉴别乙型流行性感冒 (流感 )病毒的巴拿马株与维多利亚株 ,对乙型流感病毒血凝素 (HA)基因采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增后 ,用HindⅢ做酶切反应并进行琼脂糖凝胶电泳。结果显示 :乙型流感病毒维多利亚株或巴拿马株HA基因均能被特异性引物所扩增 ,且与甲1与甲3 型流感病毒无交叉反应。该片段经HindⅢ酶切后 ,乙型流感病毒巴拿马株在电泳谱上出现 6 0 3bp与 2 4 2bp的 2个片段 ,而乙型流感病毒维多利亚株在该片段无 HindⅢ酶切位点 ,仍呈 872bp的一个片段。表明该方法不仅可作为常规血清学方法的补充 ,对乙型流感病毒维多利亚株与巴拿马株作出正确判定 。

应用PCR/RFLP对山东地区恙虫病东方体的基因型分析

目的 鉴定山东地区恙虫病东方体的基因型。方法 采用聚合酶链反应 /限制性片段长度多态性分析 (PCR/RFLP)技术对恙虫病东方体山东分离株、小盾纤恙螨匀浆及恙虫病病人全血中提取的DNASta5 6基因进行分析研究 ,并与NestedPCR基因分型的结果进行比较。结果 山东地区 35份标本 ( 2 3株恙虫病东方体山东分离株、2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及 10份恙虫病人全血 )提取的DNA群引物扩增产物经HinfⅠ、HhaⅠ、SnaBⅠ酶切后呈现 2种不同的RFLP图谱 ,经与已知序列的Ot内切酶图谱相比 :33份Ot内切酶图谱与文献报告的日本地方株—Kawasaki株具有相似的酶切图谱 ,但缺乏HhaⅠ的酶切位点 ;另 2份与Karp参考株具有相同的酶切图谱。该结果与NestedPCR基因分型的结果相一致。结论 山东地区恙虫病东方体流行株主要基因型与日本地方株Kawasaki型类似 ,但与日本地方株存在遗传差异 ;同时还有Karp型Ot存在。采用PCR/RFLP方法可以准确对Ot-Sta5 6基因分型。

运用限制性片段长度多态性分析方法鉴别麻疹疫苗株和野毒株病毒

目的应用和验证快速鉴别麻疹疫苗株与野毒株病毒的方法。方法采用逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,RT-PCR-RFLP)方法,对四川省2009～2011年分离的麻疹疫苗株和野毒株病毒进行鉴定,同时与序列分析进行对比验证。结果 5株RT-PCR扩增阳性产物,经AflⅡ酶切后,1株麻疹疫苗株病毒被切成两个片段,分别为287碱基对(Base Pair,bp)和151bp;4株麻疹野毒株病毒均不能被AflⅡ酶切,仍呈单一条带。结论 RT-PCR-RFLP是一种快速、简便的鉴别麻疹疫苗株与野毒株病毒的方法。