限进介质固相萃取及其应用

系统地介绍了限进介质固相萃取的原理、特点、发展现状及其发展趋势,并对该技术在生物和环境样品前处理中的应用作了较详细的综述。引用文献58篇。

限进介质烷基-二醇基硅胶(ADS)的制备

烷基 二醇基硅胶 (ADS)系限进介质的一种 ,可用于含生物大分子的复杂生物样品的直接进样与分析。一种新的、非常经济的方法可用于烷基 二醇基硅胶的制备。首先 ,将γ 环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷基键合至微孔硅胶上 (粒度 5 μm ,孔径 6nm)以制备环氧基硅胶 ,再令环氧基硅胶与硬脂酸在有机溶液中进行反应以制备酯型十八烷基反相填料。将制得的反相填料填充至色谱柱中 ,并令含有酯酶的溶液通过色谱柱。通过酶解作用可将硅胶表面的酯基除去 ,而硅胶的内孔表面仍保持疏水特性不变 ,这是由于硅胶上的小孔对酶分子具有体积排除作用。色谱评价证实了所制备填料的限进色谱行为。

限进介质色谱柱高效液相色谱法测定动物源性食品中对乙酰氨基酚残留量

将血药分析中使用的限进介质色谱柱的高效液相色谱法引入食品分析领域,简化动物源性食品分析中的样品处理过程,对肉类食品中对乙酰氨基酚残留量进行测定。使用苯基键合型限进介质色谱柱(150 mm×2.0 mm,5μm),流动相为0.1%乙酸-0.05 mol/L乙酸铵水溶液(A)-乙腈(B)条件下进行等度洗脱,流量为0.3 mL/min,柱温为30℃,样品只需进行液液萃取,然后直接进行液相色谱分析。猪肉、牛肉、羊肉样品中对乙酰氨基酚色谱峰分离良好,对乙酰氨基酚质量浓度在10~1000μg/L范围内标准曲线线性相关系数为r=0.9999。样品加标回收率为91.8%~99.3%,相对标准偏差小于5.9%(n=6)。该方法简便易行,能够大幅简化动物源性食品分析样品处理过程。

限进介质作为柱切换填料的高效液相色谱法测定人血中羟基喜树碱含量及其药动学研究

目的 建立一个简单、快速、灵敏的柱切换高效液相色谱法(HPLC)测定人血清中l0-羟基喜树碱(HCPT)含量。方法 生物样品首先在装有限进介质(RAM)填料的预柱中净化和富集，然后转移到C18分析柱分析待测物，用荧光检测。结果 整个分析时间8min。在l～l000ng／ml浓度范围内，HCPT显良好的线性关系，日内、日间变异<5％，最低检测限为O．1ng／ml。结论 本法应用于临床病人注射HCPT后的药代动力学研究，结果符合一房室模型并计算出它的药动学参数。

使用限进介质色谱柱的柱切换高效液相色谱法直接进样测定大鼠血浆中舒必利

提出一种直接进样测定大鼠血浆中舒必利浓度的高效液相色谱方法，使用限进介质色谱柱作为预柱在线去除血浆蛋白后，将舒必利通过柱切换转移到分析柱中进行分析。限进介质色谱柱为CAPCELLPAKMFSCX阳离子交换柱（20×4．0mmi．d．，5μm），分析柱为Kromasil C18柱（150×4．6mm i．d．，5μm），限进介质柱预分离时流动相为PH=6．88的50mmol／L磷酸盐缓冲液乙腈（100：5，V／V），切换后分析流动相为PH=6．83的50mmol／L磷酸盐缓冲液-乙腈（100：10，V／V）。流速均为1mL／min，检测波长为240nm。该方法检出限为17ng／mL，定量限为50ng／mL。舒必利在50～1400ng／mL之间线性良好（r=0．9997），高中低浓度的日内、日间相对标准偏差分别为1．5％～4．2％及2．0％～5．2％，方法回收率为98．8％～104．1％．

限进介质-分子印迹聚合物在药物分析样品前处理中的应用

限进介质-分子印迹聚合物(RAM-MIPs)作为一种新型功能材料,由于其能同时实现生物大分子(蛋白、核酸、腐殖酸)的排阻和待测物的选择性富集,现已广泛地应用于药物分析样品前处理中。本文系统地介绍了限进介质-分子印迹聚合物合成、分类及其在药物分析的样品前处理应用中的装置,并通过介绍其在药物分析样品前处理的应用实例,对其应用范围及发展现状进行分析。

限进介质-HPLC法与荧光偏振免疫法测定人血浆中卡马西平浓度的比较

目的：建立以限进介质-高效液相色谱（RAM—HPLC）法测定患者血浆中卡马西平（CBZ）浓度的方法，并与荧光偏振免疫（FPIA）法测定结果进行比较。方法：血浆样品离心后，静脉血浆用FPIA法和RAM—HPLC法测定，指端血浆仅用RAM—HPLC法测定。其中，色谱柱为Hisep shielded hydrophobic phase分析柱，流动相为醋酸铵缓冲液-乙腈（88：12），流速为1．5mL·min^-1，检测波长为280nm，进样量为20μL，柱温为室温。结果：FPIA法测定静脉血浆CBZ的结果与RAM—HPLC法分别测定静脉和指端血浆CBZ的结果有良好的相关性（r分别为0．989、0．995），但有显著性差异（P〈0．05）；RAM—HPLC法测定静脉和指端血浆CBZ的结果亦有良好相关性（r=0．998），但无显著性差异（P〉0．05）。结论：RAM—HPLC法和FPIA法均可测定CBZ浓度，FPIA法更适合常规监测，RAM—HPLC法更适合相关研究和特殊病例监测。2种测定方法均不需样品前处理，有良好的重现性。

新型限进色谱在临床药物分析中的应用

限进填料属于特殊萃取介质之一,允许复杂生物基质样品直接进样分析,结合液相色谱系统可以实现生物样品自动化直接进样,简化并加速了样品预处理过程。本文简要介绍了限进填料固相萃取原理及分类,并对该技术在临床药物分析及药代动力学领域中的应用现状及发展趋势作了详细的综述。

在线柱切换RP-HPLC测定人血清中卡马西平浓度

目的:通过在线样品预处理柱切换技术建立测定人体血清中卡马西平血药浓度的高效液相色谱法。方法:样品预处理采用 LiChroCART(25 mm×4 mm,25μm)预柱,分析柱为 Microsorb-MV C_(18) column(150 mm×4.6 mm,4μm);以水-乙醇(95:5,v/v)为血清蛋白冲洗流动相(流速2 mL·min^(-1)),水-乙醇(40:60,v/v)为分析流动相,流速0.8 mL·min^(-1);柱温:室温;检测波长285 nm。结果:本方法线性范围为2.0～40.0μg·mL^(-1),r=0.9997,定量下限为2μg·mL^(-1),日内、日间精密度 RSD 小于5%,方法回收率均大于95%。结论:该方法准确、稳定,灵敏度高,适用于卡马西平临床治疗药物监测的需要。

RAM-HPLC测定人血清及房水中丝裂霉素的浓度

目的:建立一种快捷、灵敏的高效液相色谱法测定肿瘤病人血清及青光眼患者手术后房水中丝裂霉素(MMC)浓度的方法。方法:使用 Waters HPLC 仪,配有限进介质填料(RAM)直接进样固定相,甲醇-水为10:90,流速为0.8 mL·min^(-1)的流动相,紫外二极管阵列检测器,测定了胃癌、胆囊癌及肝癌病人化疗后的血清及青光眼患者手术后房水中 MMC 的浓度。结果:MMC 与血清及房水中的蛋白质有良好的分离,保留时间为5.6 min。在40～200μg·L^(-1)水中及50～2000μg·L^(-1)血清中浓度范围内均显良好的线性关系,r 分别为0.9912与0.9991,日内变异<4%,日间变异<8%,回收率近100%。结论:RAM-HPLC 法,样品不经前处理,简单快速,精密度好,用此法可用于包含 MMC 的化疗方案的监测及药动学的研究。

高灵敏度孔雀石绿选择电极的研制

基于限进介质-分子印迹聚合物二维功能材料（RAM-MIPs）对孔雀石绿离子通量的抑制、特异性识别和排除基体干扰能力,以孔雀石绿—四苯硼钠离子缔合物为电活性物质,构建成PVC为基质膜的高灵敏度孔雀石绿选择电极。在pH 3pH 7.5溶液中,电极的线性范围为3.2×10-81×10-3mol/L,斜率为54.2 mV/pC,检出限为约7×10-9mol/L,选择性、精密度和准确度好。可用于水体、水产品中孔雀石绿的含量测定。

不同血样处理对高效液相色谱法测定血清丝裂霉素含量的影响

目的:考查不同的血样处理方法对血清中丝裂霉素(mitomycin C,MMC)含量的影响。方法:使用Waters HPLC仪,配有限进填料(RAM)直接进样固定相,流动相:甲醇水(10∶90);流速:0.8 mL·min-1;紫外二极管阵列检测器,比较了血清样品不同处理方法的重现性、稳定性,并与血清直接进样进行比较。结果:不同的血清样品处理方法对MMC含量的影响不同,在萃取法中用氯仿异丙醇较醋酸乙酯萃取率高,沉淀法用乙腈沉淀对MMC含量影响较小。直接进样中MMC与血清中的蛋白质有良好的分离。结论:在MMC的血清样品处理方法中,用RAM HPLC法直接进样,样品不经前处理,简单快速,精密度好,但对一些取样量较大且含量较低的样品,萃取法为一种有效的方法。

RAM-HPLC法测定肝癌病人血浆中丝裂霉素浓度

目的建立一种快捷、灵敏的高效液相色谱法测定肝转移癌病人血浆中丝裂霉素(MMC)浓度的方法。方法用HPLC仪,配有限进介质(RAM)直接进样固定相及紫外二极管阵列检测器,测定肝转移癌病人动脉灌注丝裂霉素后血药浓度,用3P97软件进行模拟,计算其药代动力学参数。结果MMC在50～2000ug·L-1内线性关系良好,日内变异<4%,日间变异<8%,回收率近100%。在肝癌病人中,Cmax为1.19μg·mL-1,AUC为60.51μg·min·mL-1。结论本方法样品不经前处理,简单快速,精密度好,可用于肝动脉灌注MMC化疗方案的药代动力学研究。

烷基-二醇基硅胶填料的合成及对莠去净类除草剂的在线分离

三步合成了烷基-二醇基硅胶(ADS)色谱材料,首先用γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷把功能基团键合到硅胶基体上,再把该环氧化硅胶与硬脂酸反应以制备酯型十八烷基反相填料,最后在20MPa压力下装成色谱预柱(35×4.6mmI.D)。用该预柱通过六通阀后接ODS分析柱(250×4.6mmI.D),构成中心切割二维HPLC。该系统能对具有一定疏水性的化合物进行在线富集,实现环境及生物复杂样品直接进样分离分析。使用该系统对尿中的莠去净和西玛津残留进行了分离分析,以含有0.1%乙酸的酸性水缓冲液对加标尿液中莠去净类化合物保留在预柱上,干扰分析的大分子被排阻而无保留通过,其它干扰分子保留小而通过,再切换六通阀,以乙腈和0.1%乙酸水溶液进行梯度洗脱,进而在下一级ODS分析柱上进行分离(紫外检测225nm),两种除草剂的分离分析取得了良好的定性定量结果。

液相色谱法测定羟基喜树碱含量及药动学研究

目的：建立一个简单、快速、灵敏的柱切换高效液相色谱法测定人血清中10-羟基喜树碱（HCPT）含量。方法：生物样品首先在装有限进介质（RAM）填料的预柱中净化和富集,然后转移到C18分析柱分析待测物,用荧光法检测。结果：整个分析时间8 min。在1~1000 ng/mL浓度范围内,HCPT显良好的线性关系,日内、日间变异小于5%,最低检测限为0.1 ng/mL。结论：本法已应用于临床病人注射HCPT后的药代动力学研究,结果符合一房室模型并计算出它的药动学参数。

硅胶整体柱的研磨与表面修饰制备新型高效液相色谱固定相

研究以聚乙二醇(PEG)为致孔剂,以四甲氧基硅烷(TMOS)为硅源,在醋酸和尿素的催化作用下水解缩合成硅胶整体柱;将此整体柱研磨、煅烧和浮选,制备了不定型介孔硅胶颗粒。控制反应时间为48 h、反应温度为先40℃再120℃、研磨速度为150 r/min、研磨时间为1 h,可得到孔径为16 nm左右、粒径范围在4~6μm的支架型硅胶颗粒。在此基础之上,通过不同的表面修饰方法,制备了表面键合的含双键C8反相色谱固定相,通过巯基-烯点击反应和表面聚合反应进一步制备了2种新型反相色谱固定相,以及通过巯基-环氧反应制备了限进介质色谱固定相。进行了针对塑化剂和牛血清中药物的色谱分离测试,结果显示,基于上述方法得到的高效液相色谱填料具有一定的实际应用潜力。