C型产气荚膜梭菌β_2毒素基因的克隆与表达

利用PCR技术,从C型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了0.72kb的β2毒素基因,将纯化的PCR产物与载体pGEM-T连接,转化至受体菌JM109中,经NcoI/BamHI和BamHI/EcoRI酶切鉴定及核苷酸序列测定证实,重组质粒pXCPB2中含有β2毒素基因。随后用NcoI/BamHI酶切质粒pXCPB2,回收β2毒素基因片段,插入到事先经同样酶切处理的载体pET-28c中相应酶切位点,构建了表达质粒pETXB2,经NcoI/BamHI和NcoI/HindⅢ/BamHI酶切鉴定及核苷酸序列测定证实,表达质粒含有β2毒素基因且基因序列和阅读框架正确。重组菌株BL21(DE3)(pETXB2)表达产物经ELISA检测和SDS-PAGE分析,重组菌株表达的β2毒素蛋白能够被β2毒素抗体识别,其表达量占菌体总蛋白相对含量的13.26%。