斜纹夜蛾谷胱甘肽S-转移酶SlGSTS4对拟除虫菊酯和有机磷类杀虫剂代谢和抗氧化活性

【目的】探究斜纹夜蛾Spodoptera litura谷胱甘肽S-转移酶SlGSTS4在拟除虫菊酯和有机磷类杀虫剂抗性中的作用。【方法】构建pET-26b(+)/SlGSTs4表达载体,将其在大肠杆菌Escherichia coli中异源表达,获得SlGSTS4重组蛋白,测定其对模式底物1-氯-2,4-二硝基苯(1-chlom-2,4-dinitrobenzene,CDNB)的米氏常数(K_(m))和最大反应速度(V_(max));采用超高效液相色谱(ultra-performance liquid chromatography,UPLC)测定重组蛋白SlGSTS4和表达SlGSTS4的大肠杆菌对拟除虫菊酯类杀虫剂(氰戊菊酯、高效氯氰菊酯和功夫菊酯)和有机磷类杀虫剂(毒死蜱和辛硫磷)的代谢率,并通过滤纸片抑菌圈试验测定SlGSTS4在过氧化氢异丙苯胁迫下的抗氧化活性。【结果】重组蛋白SlGSTS4对CDNB的V_(max)和K_(m)值分别为(13.8±2.3)nmol/(min·mg)和(1.66±0.1)mmol/L。UPLC结果表明,与对照相比,SlGSTS4重组蛋白仅对功夫菊酯有一定的代谢率(4.9%),而对氰戊菊酯、高效氯氰菊酯、辛硫磷和毒死蜱无代谢活性;转化SlGSTS4的大肠杆菌对氰戊菊酯、高效氯氰菊酯、功夫菊酯、毒死蜱和辛硫磷的代谢残留量峰面积均无明显变化,并且可以显著降低抑菌圈直径。【结论】SlGSTS4对拟除虫菊酯和有机磷类杀虫剂无直接代谢活性,具有明显的抗氧化活性。本研究结果丰富了对斜纹夜蛾GSTs Sigma家族基因的功能认知,有助于阐明SlGSTS4在斜纹夜蛾对拟除虫菊酯和有机磷类杀虫剂抗性中的功能。

QuEChERS结合高效液相色谱串联质谱检测苹果与白菜中拟除虫菊酯类杀虫剂的研究

建立了一种苹果与白菜样品中5种拟除虫菊酯类杀虫剂的QuEChERS结合高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)的检测方法。根据拟除虫菊酯质谱裂解规律,优化了色谱-质谱条件;考察了不同盐析剂、缓冲体系及净化剂条件下的平均回收率,优化了QuEChERS前处理方法。结果表明,该方法可在9 min内完成氯菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯的检验,5种目标物在各自线性范围内线性关系良好(R2≥0.995),检出限(LOD)为0.05~1.0μg/kg,定量限(LOQ)为0.1~2.0μg/kg;在10、50和100μg/kg 3个添加水平下的加标回收率(RE)为81.6~103.4%,基质效应(ME)为75.9%~97.8%,日间、日内精密度在2.62%~13.20%范围内。该方法灵敏度高、线性范围宽、绿色安全,适用于苹果、白菜样品中拟除虫菊酯的常规检验与残留检测。

拟除虫菊酯杀虫剂对水生态系统的毒性作用

拟除虫菊酯杀虫剂主要用于防治棉田、菜地、果树和茶叶上的农业害虫以及卫生害虫,也用于渔业生产上杀灭寄生虫。近几年来其使用量越来越大,是传统有机磷农药的替代品。它具有高效广谱、低残留的特点,对光稳定,在哺乳动物体内代谢、排泄迅速,但是对水生态系统危害较大。报道了拟除虫菊酯杀虫剂对水生生物的急、慢性毒性和中毒机理的研究进展,阐述了有待研究的方向。

板兰根中三种拟除虫菊酯杀虫剂的残留分析

研究了板蓝根中3种拟除虫菊酯杀虫剂残留分析方法。以石油醚为萃取溶剂，分别用索氏抽 提法、浸渍振荡法、超声波法提取。提取液经100 mL丙酮∶0.05 mol/L氯化钙溶液(1∶1)液 -液分配净化后，以弗罗里硅土柱净化，5%乙酸乙酯-石油醚淋洗，气相色谱法电子捕获检 测器测定。结果表明，方法的线性范围为0.4×10-10～4×10-10g，氯氰菊酯 、氰戊菊酯、溴氰菊酯最低检测浓度分别为5×10-3、5×10-3、2×10-3 mg/kg。3种提取方法对板蓝根的添加回收率、变异系数符合农药残留分析的要求。

烟粉虱对拟除虫菊酯杀虫剂的抗性机理

通过增效剂生物测定、生化分析以及钠离子通道基因ⅡS4-6cDNA片段的RT-PCR扩增,探讨了烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)对拟除虫菊酯杀虫剂的抗性机理。结果表明:对于采自田间的6个烟粉虱抗性品系,磷酸三苯酯(TPP)和胡椒基丁醚(PBO)对氯氰菊酯、溴氰菊酯、氯氟氰菊酯和甲氰菊酯均有显著的增效作用,而DEM对4种拟除虫菊酯杀虫剂均无明显的增效作用。烟粉虱抗性品系的α-NA羧酸酯酶和β-NA羧酸酯酶活性分别是敏感品系的2.16～2.65倍和1.22～1.41倍,抗性品系的谷胱甘肽S转移酶活性与敏感品系没有差异,表明羧酸酯酶和多功能氧化酶在烟粉虱对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性中具有重要的作用,而谷胱甘肽S转移酶与抗性无关。通过RT-PCR克隆了6个烟粉虱田间抗性品系的钠离子通道结构域ⅡS4-6cDNA片段的序列(420bp),发现与敏感品系相比,有2个位点发生突变,分别为L925I突变和I917V突变,L925I突变在所有6个烟粉虱田间抗性种群中均有发生,该位点突变已被证实与拟除虫菊酯类杀虫剂密切相关,表明神经不敏感性可能是烟粉虱对拟除虫菊酯产生抗性的另一个重要因子。

致倦库蚊及大劣按蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性测定

目的掌握海南省致倦库蚊和大劣按蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性发生及发展趋势。方法采用幼虫浸渍法,测定其对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性倍数。结果五指山市、澄迈县和海口市的致倦库蚊对溴氰菊酯抗性倍数分别为7.50、6.67、8.00倍,对氟氯氰菊酯的抗性倍数分别为5.31、6.00、6.23倍;琼中县大劣按蚊对溴氰菊酯和氟氯氰菊酯的抗性倍数分别为1.12和1.31倍。结论海南省致倦库蚊对这2种拟除虫菊酯类杀虫剂均产生了低抗药性;而大劣按蚊尚未产生。

马铃薯桃蚜对拟除虫菊酯类杀虫剂的敏感性及其体内羧酸酯酶活性研究

为明确内蒙古马铃薯主要种植区马铃薯桃蚜的抗药性水平及抗性形成机制,采用室内生物测定方法,检测了内蒙古呼和浩特市及呼和浩特武川县马铃薯桃蚜田间种群（分别简称为呼市种群和武川种群）和室内饲养未接触任何药剂的马铃薯桃蚜敏感种群对7种拟除虫菊酯类杀虫剂的敏感性,并对供试各种群桃蚜的羧酸酯酶（CarE）活性进行了研究。结果表明：相对于敏感种群,呼市种群和武川种群对氯氰菊酯均产生了高水平抗性（抗性倍数为74.11和549.4）;呼市种群对联苯菊酯产生了中等水平抗性（16.03倍）,对氰戊菊酯、高效氯氰菊酯和高效氯氟氰菊酯仍保持敏感（1.00~4.00倍）;武川种群对溴氰菊酯（10.14倍）、甲氰菊酯（26.46倍）和联苯菊酯（33.74倍）处于中等抗性水平,对高效氯氰菊酯、氰戊菊酯和高效氯氟氰菊酯仍较为敏感（〈5.00倍）。CarE比活力测定结果显示：武川和呼市种群马铃薯桃蚜CarE活力均显著高于敏感种群;三唑磷对武川及呼市种群和敏感种群桃蚜CarE均有较强的抑制作用,IC_（50）值分别为0.54、1.07和0.93 nmol/L。三唑磷分别与高效氯氰菊酯和溴氰菊酯联用可显著增强其毒力,表明三唑磷与这两种拟除虫菊酯类药剂复配在武川和呼市马铃薯桃蚜防治中具有很好的应用潜力。

快速溶剂萃取-气相色谱法同时测定含脂羊毛中的28种有机氯拟除虫菊酯杀虫剂的残留量

建立了快速溶剂萃取-气相色谱法同时测定含脂羊毛中28种有机氯、拟除虫菊酯杀虫剂残留量的方法。在80℃、10.34MPa条件下用正己烷饱和的乙腈快速提取样品,提取物经冷冻除脂、浓缩、固相萃取净化处理后直接用气相色谱分析。结果表明:16种有机氯杀虫剂在0.005～1.0mg/L范围内,9种拟除虫菊酯杀虫剂及三氯杀螨醇、三氯杀螨砜在0.01～2.0mg/L范围内,氟氯苯菊酯在0.02～4.0mg/L范围内,其峰面积与质量浓度呈良好的线性关系。28种有机氯、拟除虫菊酯杀虫剂的平均回收率为67.2%～107.7%,相对标准偏差为2.6%～29.0%。结果表明:该方法具有操作简便、快速方便、灵敏度高等特点,完全可满足含脂羊毛中28种有机氯拟除虫菊酯杀虫剂残留量初筛检测的要求。

昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的代谢抗性机制研究进展

随着拟除虫菊酯类杀虫剂在卫生和农业害虫防治中的广泛应用,昆虫对此类杀虫剂产生抗性的报道越来越多。目前已明确昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性机制包括表皮穿透率下降、靶标抗性以及代谢抗性,其中代谢抗性机制较为普遍,而且其与昆虫对多种杀虫剂的交互抗性关系密切。目前,随着基因组、转录组以及蛋白质组学等新技术的发展及应用,昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的代谢抗性机制研究也取得了很多新进展。昆虫体内细胞色素P450酶(P450s)、羧酸酯酶(Car E)及谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)等重要解毒酶系的改变均与昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的代谢抗性有关,其中这3类解毒酶的活性及相关基因表达量的变化是昆虫对此类杀虫剂产生代谢抗性的主要原因。明确昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的代谢抗性机制,对合理使用此类杀虫剂及延缓抗药性的产生均具有重要意义。本文在总结拟除虫菊酯类杀虫剂代谢路径及相关生物酶研究概况的基础上,综述了近年来有关昆虫对此类杀虫剂代谢抗性机制研究的主要进展。

四种拟除虫菊酯类杀虫剂对枸杞蚜虫的毒力及对三磷酸腺苷酶和谷胱甘肽S-转移酶活性的影响

为寻找防治枸杞蚜虫的适用药剂，采用玻璃管药膜法，测定了4种拟除虫菊酯类杀虫剂对枸杞蚜虫的毒力及对其三磷酸腺苷酶（ ATPase）和谷胱甘肽S-转移酶（ GSTs）活性的影响。结果表明：枸杞蚜虫对联苯菊酯最敏感，LC50值为4.34 mg/L；氯菊酯、高效氯氰菊酯和甲氰菊酯的LC50值分别为17.08、40.50和184.84 mg/L。4种杀虫剂对枸杞蚜虫两种ATPase活性均有抑制作用，药剂浓度为1×10－4 mol/L 时，4种药剂对 Na＋-K＋-ATPase 活性的抑制率均高于对 Ca2＋-Mg2＋-ATPase的抑制率，其中对Na＋-K＋-ATPase活性的抑制率从高到低依次为：联苯菊酯＆gt;高效氯氰菊酯＆gt;氯菊酯＆gt;甲氰菊酯，而对Ca2＋-Mg2＋-ATPase的抑制率则是联苯菊酯最高（46.41％），高效氯氰菊酯最低（33.04％）。4种药剂对枸杞蚜虫GSTs活性的影响差异较大：联苯菊酯在低浓度时对GSTs具有诱导作用，高浓度时则表现为一定的抑制作用；不同浓度高效氯氰菊酯和氯菊酯对GSTs活性均表现为抑制作用，抑制率最高达85.02％；而甲氰菊酯处理后 GSTs 的活性则升高了193.07％~249.96％。

毛细管柱气相色谱法测定水中痕量拟除虫菊酯杀虫剂

采用石油醚萃取水样 ,萃取液经氮气吹扫浓缩后 ,用气相色谱仪对水样中拟除虫菊酯杀虫剂——甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯 (功夫 )、高效氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯进行了定量测定。由于毛细管柱的高柱效和微池 ECD的高灵敏度 ,使得上述目标组分与水样中的其它杂质能达到较好的分离 ,即使含量极低也能被检出。本方法省去了样品萃取液的净化处理这一步骤 ,可较快地测定拟除虫菊酯杀虫剂 ,在污染事故应急监测方面具有实用性。

新烟碱类与拟除虫菊酯类杀虫剂对蚜虫的联合作用研究

研究比较了噻虫嗪、噻虫啉、烯啶虫胺、氯噻啉等4个新烟碱类杀虫剂与高效氯氟氰菊酯、联苯菊酯等2个拟除虫菊酯类杀虫剂的联合作用,为复配制剂的研发提供科学依据。室内采用浸渍法对蚕豆蚜进行毒力测定,采用等效线法和共毒系数法评价联合作用类型。结果表明:8个新烟碱类杀虫剂对蚜虫的活性从高到低依次为噻虫嗪、吡虫啉、噻虫啉、烯啶虫胺、啶虫脒、噻虫胺、氯噻啉、呋虫胺,4个拟除虫菊酯类杀虫剂对蚜虫的活性从高到低依次为高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、高效氯氰菊酯、联苯菊酯。18个组合的联合作用表现出增效、相加或拮抗等,并未发现明显规律。从18个组合中优先推荐烯啶虫胺+高效氯氟氰菊酯(5∶1)、噻虫嗪+联苯菊酯(5∶1)。在复配研发时,切不可盲目模仿,必须以实际筛选试验结果为依据,也希望复配具有科学性和实用性,并在抗性治理和减量使用中发挥应有的作用。

HPLC法检测蔬菜中拟除虫菊酯类杀虫剂方法的改进

对蔬菜组织富含多酚类和色素等杂质的特点,对高效液相色谱法HPLC分析蔬菜中拟除虫菊酯测类波杀长虫剂24的2n前m处条理件方下法,用进配行备了Z改or进ba,x在R流x-S动il相柱溶、紫剂外正检己测烷器-乙的酸高乙效酯液(相95色︰谱5,仪V︰进V行)及待流测速组1分m的l/m分i离n,检和测定。结果表明该方法适合蔬菜中拟除虫菊酯类杀虫剂的分析测定。

试论拟除虫菊酯类杀虫剂在水稻田中的应用

拟除虫菊酯杀虫剂具有高效、安全、广谱及对人畜低毒等特点,在农业上得以广泛应用,已成为杀虫剂市场的支柱之一。但由于其对鱼毒性高,我国禁止其在水稻田使用。随着我国高毒农药的禁用以及水稻害虫对常用药剂抗性的发展,水稻田用药将出现“缺口”。本文介绍了日本、菲律宾和越南等国家应用拟除虫菊酯杀虫剂防治水稻害虫的情况,推荐了一些稻田防虫的拟除虫菊酯品种,并提出了在我国拟除虫菊酯杀虫剂用于水稻田的几点建议。

常用拟除虫菊酯类杀虫剂对海口市居民区白纹伊蚊的杀灭效果

目的了解2.5%高效氯氟氰菊酯、50 g/L顺式氯氰菊酯、8.5%高效氯氰菊酯·6.5%残杀威、2.5%溴氰菊酯4种常用的拟除虫菊酯杀虫剂对海口市居民区白纹伊蚊的杀灭效果。方法 2016年1—5月在海口市四季华庭、滨海北胜、海虹宿舍、裕丰公寓4个居民区大量采集白纹伊蚊幼虫,经实验室获得子一代试虫,使用玻璃药膜法抗药性检测4种常用的拟除虫菊酯杀虫剂对其杀灭效果。结果根据推荐的稀释倍数,8.5%高效氯氰菊酯·6.5%残杀威(悬浮剂)对4个居民区白纹伊蚊杀灭效果最显著,30 min击倒率和24 h死亡率均为100%;其次为2.5%高效氯氟氰菊酯(悬浮剂),对四季华庭、海虹宿舍、滨海北胜居民区白纹伊蚊杀灭效果显著,30 min击倒率分别为97.33%、97.33%、93.33%;24 h死亡率分别为97.33%、96%、96%。结论4种杀虫剂对不同居民区杀灭效果不同,其中溴氰菊酯和氯氰菊酯杀虫剂商品效果最不明显,在未来的蚊虫控制中,应加强对杀虫剂的抗药性监测,合理使用杀虫剂。

拟除虫菊酯类杀虫剂对二化螟的生物活性研究

通过室内试验,研究了10种菊酯类农药对水稻二化螟幼虫的生物活性,以及高效氯氟氰菊酯5种剂型对二化螟幼虫的生物活性差异。结果表明:高效氟氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、S-氰戊菊酯、溴氰菊酯、甲氰菊酯、顺式氯氰菊酯、高效氯氰菊酯、乙氰菊酯、醚菊酯、氟硅菊酯对水稻二化螟幼虫均有较高的活性,LD50(μg/头)分别为0.0017,0.0039,0.0043,0.0070,0.0071,0.0116,0.0119,0.714,0.1779,0.3858,其活性分别是对照药剂三唑磷的0.3￣141.59倍,是甲胺磷的2.07￣469.06倍。高效氯氟氰菊酯5剂型对二化螟3龄幼虫的生物活性略有差异,LC50(mg/L)值分别为:0.0945(EW),0.1089(EC),0.1174(ME),0.1232(SC),0.1591(WP)。

拟除虫菊酯类杀虫剂对鱼类的毒性研究

本文从急性毒性、生化指标、亚急性毒性及组织病理学等方面介绍丁拟除虫菊酯类杀虫剂对鱼类的毒性研究概况,指出了其对渔业生产和水环境的影响。

气相色谱-质谱法测定含脂羊毛中有机氯和拟除虫菊酯杀虫剂残留量

采用气相色谱-质谱联用法测定含脂羊毛中有机氯和拟除虫菊酯杀虫剂的残留量。样品经二氧化碳超临界萃取仪萃取后，所得提取液先后经过自动凝胶渗透色谱仪和Bond Elut Si固相萃取柱净化浓缩，所得洗脱液经氮气吹干后定容至1．0mL，于气相色谱和气相色谱一质谱分析仪测定，外标法定量。11种有机氯和5种拟除虫菊酯杀虫剂的工作曲线呈较好线性关系，检出限（3S／N）在0．022-0．32mg·kg^-1之间，测定下限（IOS／N）在0．0731．07mg·kg^-1之间。在3个标准加入水平下进行了回收率和精密度试验，所得回收率在74．8％～135．2％之间，相对标准偏差（n=6）小于10％。

气相色谱法测定烟气中拟除虫菊酯杀虫剂在卷烟滤嘴中的残留量

用符合ISO 30008标准要求的吸烟机按标准条件抽吸卷烟样品,抽吸完毕后,取下滤嘴,用乙酸乙酯-环己烷(1+1)混合溶剂超声提取30min。将提取液经无水硫酸钠干燥后旋转蒸至近干,残渣溶于正己烷2mL中,所得溶液经石墨炭黑小柱进行净化。小柱用丙酮-正己烷(2+8)混合溶剂淋洗2次,收集洗脱液,旋转蒸发浓缩后,将溶液用上述混合溶剂定容至1.5mL,供气相色谱分析,采用Agilent HP-5色谱柱进行分离和电子捕集检测。测定了4种拟除虫菊酯,相对标准偏差(n=5)均小于6%,于20个滤嘴样品中加入相当于20μg的4种拟除虫菊酯混合标准溶液,回收率均大于92%。