雄激素应答元件陷阱DNA诱导前列腺癌细胞LNCaP凋亡

目的:研究雄激素应答元件陷阱DNA(AREdecoyDNA)对前列腺癌细胞LNCaP生长活性和凋亡的影响。方法:人工合成双链硫代AREdecoyDNA并提取LNCaP细胞核蛋白,应用电泳迁移率变动分析(electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA)检测AREdecoyDNA与雄激素受体的特异结合。2μg/mlAREdecoyDNA转染LNCaP细胞,48h后相差显微镜观察细胞超微结构变化;MTT比色法检测细胞生长活性;DNALadder检测细胞凋亡;流式细胞技术(FCM)测定细胞凋亡率。结果:EMSA显示,AREdecoyDNA能特异与核蛋白中雄激素受体结合。LNCaP细胞转染AREdecoyDNA后,镜下可见部分细胞出现凋亡形态学的改变,有凋亡小体形成,细胞体外生长受到抑制,DNALadder可见明显梯形条带。转染后48h的凋亡率为22.5%。结论:AREdecoyDNA能竞争结合雄激素受体(androgenreceptor,AR),阻断AR的作用而诱导LNCaP细胞凋亡。

E2F陷阱DNA对人肺癌细胞中stathm in mRNA表达的影响及促进肿瘤细胞凋亡的作用

目的:观察转录因子E2F陷阱DNA对stathmin的表达影响及抑制肿瘤细胞增生情况。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将E2F Decoy ODNs转染入人肺癌A549细胞中,用RT-PCR检测转染细胞中stathmin基因mRNA表达水平变化,通过细胞生长曲线观察转染细胞的增殖能力,Tunel法观察转染细胞凋亡情况。结果:E2F Decoy ODNs被成功转染入肿瘤细胞中,RT-PCR检测结果显示实验组stathmin mRNA表达水平明显低于对照组,而且显著抑制了A549细胞的增殖,空白对照组无明显变化,Tunel凋亡染色可见凋亡细胞。结论:E2F Decoy ODNs能特异性下调stathmin mRNA表达,明显抑制A549细胞的增殖,为肿瘤的基因治疗提供了新的手段。