bulge区毛囊组织块培养结合酶消化法分离大鼠毛囊隆突部细胞的生物学特征

背景：目前毛囊隆突部细胞的分离培养方法多存在细胞分离纯度不高、活力差等缺点，采用组织块法和酶消化法分离培养大鼠毛囊隆突部细胞能否克服上述缺点？目的：本实验采用组织块法和酶消化法分离培养大鼠毛囊隆突部细胞并对其进行鉴定。设计、时间及单位：单一样本设计，体外细胞培养实验。于2007—03／08在中国医科大学组织工程学实验室完成。材料：选用15只雌性Wistar大鼠，由中国医科大学实验动物中心提供。实验用表皮生长因子、Hoechst33342购白美国Sigma公司，SAB-小鼠IgG抗体免疫组化试剂盒、SABC—Cy3免疫荧光组织化学试剂盒、DAB显色剂、SABC—FITC免疫荧光组化试剂盒均购白武汉博士德公司。方法：利用显微分离的方法将大鼠触须部皮肤分离，剪开真皮和皮下组织，将毛囊与周围组织钝性分离取出毛囊，剪开结缔组织鞘，用显微外科镊取出毛囊外根鞘bulge区，移入培养板中进行组织块培养，应用0．25％胰酶＋0．02％EDTA消化分离大鼠毛囊bulge区细胞，倒置相差显微镜下观察其增殖能力，免疫荧光法检测毛囊隆突部细胞K15、β1整合索和P63的表达情况。主要观察指标：①大鼠隆突部细胞增殖能力。②毛囊隆突部细胞K15、β1整合索和P63的表达。结果：①大鼠隆突部细胞胞体积较大，胞核大，核仁明显，细胞生长迅速，活力好，3-4d即可传代，具有增殖能力强、细胞纯度高等特性。②细胞免疫荧光结果显示培养的细胞胞浆角蛋白15阳性，细胞的胞膜β1整合索阳性，细胞的胞核P63阳性。结论：组织块法结合酶消化法可成功分离培养毛囊隆突部细胞，细胞可同时表达K15、β1整合索和P63，纯度高，活力好。

钛丝张力带内固定治疗胫骨髁间隆突部撕脱骨折39例

胫骨髁间隆突部撕脱骨折在膝关节损伤中非常多见，由于前交叉韧带的牵拉，骨折块往往移位明显，是膝关节较严重损伤，影响关节稳定性。欲达到解剖复位，需手术复位内固定。大多数学者认为，伴有撕脱骨折块的韧带损伤，应一期复位固定。我院自2008年1月至2012年1月共收治此类病人39例，钛丝张力带内固定治疗髁间隆突骨折取得良好结果。现总结报告如下。

关节镜下缝线轴心固定治疗胫骨髁间隆突部骨折

严重的胫骨髁间骨折采用保守治疗常致骨折不愈合或者畸形愈合，最终导致关节功能障碍。既往的关节切开复位固定创伤大，常造成关节僵硬或活动受限。骨折的固定，可采用钢丝、缝线、克氏针和螺丝钉等方法，一般的缝线固定采用横跨或者斜跨骨折块的方法，但如果缝线过于靠前，有可能固定松脱，过于靠后则骨折块前缘可能翘起，骨块较小或者粉碎则难以进行固定。现将笔者自2001—07～2006-01采用关节镜下不吸收缝线轴心固定骨折块治疗胫骨髁间隆突部骨折的临床资料报告如下。

经鼻支气管插管用于隆突部肿瘤患者的急救护理

气管插管术已被广泛应用于抢救危重患者。支气管插管在我国还很少应用于临床抢救,1992年1月我科收治了1例气管隆突部位鳞癌,引起双主支气管堵塞,造成呼吸衰竭的患者,为此采取加长气管导管的方法。

山羊毛囊干细胞分离、培养及鉴定

采用2.4 U/mL Dispase酶消化和机械切割法分离毛囊隆突部,经胰酶(0.5 mg/mL胰酶+0.2 mg/mLEDTA)消化从山羊耳部皮肤分离得到毛囊干细胞,用自制无血清培养基培养,并用形态学观察、细胞生长曲线、克隆形成率及免疫组化染色检测,探讨毛囊干细胞体外分离培养方法及生物学特性。结果表明,所分离细胞具备毛囊干细胞特征:体积较小、表面光滑、立体感强,呈现未分化细胞特征;K19、integrin-β1以及p63免疫组化染色阳性;第3、5、7代干细胞克隆形成率分别为25.6%±2.6%、31.8%±1.9%和27.0%±3.9%,极显著高于对照组角质细胞克隆形成率(P<0.01)。采用配制的无血清条件培养液可使山羊毛囊干细胞体外维持未分化状态并传代至19代。

山羊毛囊干细胞的分离及体外培养

试验采用2．4U／mL Dispase酶消化和机械切割法分离毛囊隆突部，经胰酶（0．5mg／mL胰酶＋0．2mg／mL EDTA）消化从山羊耳部皮肤分离得到的毛囊干细胞，然后进行形态学观察、细胞生长曲线测定、克隆形成率及免疫组化染色检测，并对毛囊干细胞的基础培养基进行了筛选。结果表明：DMEM／F12是一种适合毛囊干细胞体外增殖培养的培养基；在以DMEM／F12为基础培养液的培养体系中细胞可传代至19代。

用两种毛囊细胞构建细胞团以再生毛囊的初步研究

目的:探索体外制备毛乳头细胞和隆突部细胞复合而成的细胞团在体内构建毛囊的可行性。方法:分别分离培养毛囊毛乳头细胞、隆突部细胞,利用毛乳头细胞混合I型胶原制作细胞团包裹隆突部细胞团,移植于大鼠肾被膜下。结果:移植后的混合细胞团内有毛囊样结构产生。结论:毛乳头细胞和隆突部细胞复合形成的细胞团有生成毛囊的潜力,为组织工程皮肤中构建毛囊做了进一步铺垫。

Carinal Resection and Reconstruction for Primary Carinal Tumors—Report of 9 Cases

From Oct.1989 to Cec.1998,9 patients aged 12-67 years underwent carinal resection and reconstruction through right or left intercostal space thoraotomy.No important postoperative complications occurred and there were no perioperative deaths.Leiomyoma,neurofibroma,carcioid and squamous cell carcinoma was found in one patient respectively,adenocarcioma in 2 patients,adenoid cystic carcinoma in 3 patients.The actuarial 3-year survival rate for patients with malignant tumors was 42.9%.In order to diagnose early and correctly,bronchoscopy and computed tomography should be used.The end-to-end anastomosis of trachea with bilateral bronchi is the optimal choice among the modes of carinal reconstruction.Some principles of surgery and perioperative care are discussed.

气管、肺

气管隆突部肿瘤的手术体会（附14例报告）;58例细支气管肺泡癌患者手术治疗结果分析；中国人非小细胞肺癌EGFR基因突变的研究；应用FISH和组织芯片方法研究肺癌组织中Ets1 mRNA的表达硬意义；Canstafin分泌增强体系的建立夏其抗肺癌作用；非小细胞肺癌组织中caslmse-3硬其底物PARP、DFF45蛋白表达的意义；

气管、肺

氨力农改善肺癌病人术后心脏功能的临床研究；电视胸腔镜辅助下小切口肺切除术；原发性气管支气管肿瘤的外科治疗方法；气管隆突部肿瘤的手术体会（附14例报告）；袖式肺叶切除术联合肺动脉成形术治疗中央型支气管肺癌。

小鼠毛囊干细胞向心肌细胞的诱导分化及其鉴定

目的探究小鼠毛囊隆突部分离培养的毛囊干细胞,诱导分化成为心肌细胞的能力。方法显微镜下剥离结构完整的小鼠毛囊,只保留隆突部,Ⅳ型胶原黏附法分离、培养隆突部细胞,对其进行形态学和分子免疫荧光检测;第二代细胞的单细胞克隆通过有限稀释法纯化,并筛选K15、K19强阳性的细胞;加入心肌细胞诱导液进行诱导分化并做心肌细胞标志物肌红蛋白的免疫荧光鉴定。结果小鼠毛囊隆突部干细胞经成心肌诱导后,细胞呈现典型的心肌细胞样形态,K15、K19呈阳性;诱导后的细胞能特异表达心肌细胞的标志物肌红蛋白。结论小鼠毛囊干细胞有分化成为心肌细胞的能力。

家猪毛囊上段自体移植动物模型的构建

目的探讨家猪皮肤、毛囊组织学结构特点及其毛囊上段自体移植的方法,以实现毛囊扩增动物模型的构建。方法选择3月龄黑白毛相间的家猪,使用全功能环切式电动毛囊移植笔在毛球部上方2~3 mm处进行切割,将毛囊上段行自体移植;定期取材,观察毛囊重建情况。结果家猪皮肤及毛囊组织结构均与成人相似;毛囊上段移植后2周取材,在显微镜下观察可见毛囊上段向下生长,重新形成完整毛囊。结论家猪是批量进行毛囊自体片段扩增移植实验的较理想模型的构建动物。