铜绿假单胞菌随机启动子库的构建及受铁调控基因的筛选和鉴定

【目的】针对铁这种几乎所有微生物都必需的,对病原菌尤为重要的营养元素,在全基因组水平上检测铜绿假单胞菌的铁感应基因。【方法】采用含LuxCDABE报道子的质粒pMS402为载体,构建了铜绿假单胞菌的随机启动子库,建立了特定条件下研究铜绿假单胞菌全基因组基因表达变化的高通量平台。【结果】验证了2个已知的受铁调控的基因,并发现了尚未报道的二氢叶酸还原酶,磷酸葡萄糖脱水酶和柠檬酸铁转运蛋白受铁调控的现象,发现与铁相关的四个功能未知的基因和3个假定蛋白的基因。【结论】研究结果对于阐明铁在铜绿假单胞菌中的调控作用,揭示铁对细菌生理及致病性的作用机制提供了理论基础。随机启动子库的构建也为细菌基因组水平研究基因表达提供了一个有用的工具。

氧化葡萄糖酸杆菌启动子的筛选及鉴定

利用缺乏启动子的绿色荧光蛋白TFP作为报告基因,与广宿主型质粒pBBR1MCS-5相结合,构建了可在氧化葡萄糖酸杆菌中稳定存在的探针质粒pBBR1MCS5-TFP。利用构建的启动子探针质粒从氧化葡萄糖酸杆菌中分离到多个具有启动子功能的DNA片段——G12、G65、G69和G78,序列测定结果显示G12片段上具有典型的细菌启动子保守序列(-35和-10区)和核糖体结合位点(RBS),将其命名为Lhp启动子。鉴定Lhp在氧化葡萄糖酸杆菌中的启动活性,结果显示该启动子能有效启动异源基因绿色荧光蛋白以及NADH脱氢酶Ⅱ基因的表达。