多聚酶链式反应随机引物扩增的DNA多态指模技术在幽门螺杆菌菌株鉴别中的应用

本文利用多聚酶链式反应随机引物扩增的DNA(RAPD)多态指模技术研究其在HP菌株鉴别的应用。对47例株HP进行RAPD多态指模分析。结果发现:①40株由不同病人分离的HP菌株有不同的DNA指模;②同一菌株多次培养后其DNA指模无改变;③HP根除疗法后3个月4例、6个月1例(分离的HP菌株分与治疗前相同,提示可能是HP复发;④HP根除疗法后6个月及24个月各1例)与治疗前分离的菌株DNA指模不同,提示可能是HP再感染。结果提示RAPD多态指模技术对HP菌株的鉴别有价值。

聚合酶链反应用于现症间日疟和恶性疟病人的检测

本文选择种特异性引物MPV、PF检测采自云南混合流行区门诊病人的滤纸干滴血119例,并与传统镜检法比较。MPV引物根据P.v.线粒体细胞色素C氧化酶基因序列设计,扩增产物片断为374bp,PF引物根据p.f.中度重复序列PBK1-14基因序列设计,扩增产物片段为206bp。MPV引物系国内首次应用。血样本处理采用1％Tritonx-100裂解煮沸法,并作了改进。其研究结果显示:PCR法与镜检法符合率为86.6％。PCR法:P.v.阳性率为64.7％,P.f.阳性率为29.4％,混合感染率为7.6％,误诊为0,漏诊率为2.5％;镜检法:P.v.阳性率为58.8％,P.f.阳性率为2.7％,混合感染率为3.4％,误诊为2.5％,漏诊率为8.4％。本PCR诊断疟疾方法具有准确、敏感、快速、简易等特点,有潜在的现场应用价值。

聚合酶链反应技术在乙肝病毒DNA检测中的应用

PCR（Polymeras Chain Reafion）即聚合酶链反应，于1985年就有报道，是一种模拟特异天然DNA复制过程的核酸扩增法。以DNA为模拟的特异靶序列，在引物介导下酶促扩增，可以从极少量基因组DNA合成百万拷贝数的某DNA片段。我们应用PCR测试法，对肝病患者及体检的青年工人血清中的乙肝病毒DNA进行有关血清分析及临床研究，获得了可靠数据和临床效果。

应用PCR法检测小鼠沙门氏菌

本文根据沙门氏菌保守基因序列合成一对寡核苷酸引物，建立一种聚合酶链反应检测小鼠沙门氏菌的方法。通过对１４株沙门氏菌和８株非沙门氏菌的检测，发现只有沙门氏菌才能扩增出４９５ｂｐ的特异性条带，检测灵敏度可达５０条沙门氏菌水平。该法检测小鼠粪便中沙门氏菌的阳性率高于培养法，且整个实验过程仅需６～８ｈ。可见，该法是一种特异、敏感、简便、快速的沙门氏菌检测方法，对实验动物质量控制将发挥积极的作用。

RAPD技术分析嗜人按蚊种型方法的建立

目的 建立用RAPD-PCR技术鉴别中国不同纬度地区嗜人按蚊,特别是海南岛嗜人按蚊与大陆嗜人按蚊间有无种型差异的新方法。方法 收集海南、四川、江苏三地嗜人按蚊标本并传代培养,优化蚊基因组DNA的提取纯化及RAPD-PCR扩增和产物检测的条件,筛选5条RAPD引物。结果 筛选出1条适合三地嗜人按蚊的引物并制定出了稳定的RAPD图谱,建立了RAPD-PCR分析嗜人按蚊种型的方法。结论 不同纬度三地嗜人按蚊大部分谱带是相同的,但它们的谱带数不一定相同,且少数谱带是完全不同的。初步表明我国嗜人按蚊存在一定的种型差异,从而为解释海南嗜人按蚊在生态习性和传疟作用方面为何与大陆嗜人按蚊不同从分子水平提供了一定的科学依据。

TB-CPA法、液体培养法及传统PCR法诊断结核性胸膜炎的临床价值探讨

目的探讨交叉引物恒温扩增(TB-CPA)法、液体培养法及传统聚合酶链反应(PCR)法在结核性胸膜炎临床诊断中的应用价值。方法选取该院2017年6月至2019年6月接收的119例胸腔积液患者为研究对象,其中经生化、超声波检查及胸膜活检等确诊为结核性胸膜炎患者101例,分别采用TB-CPA法、液体培养法及传统PCR法进行诊断,以受试者工作特征曲线(ROC曲线)为依据,对3种方法结核性胸膜炎阳性检出率、诊断准确性、灵敏度、特异度等情况进行分析。结果TB-CPA法的结核性胸膜炎阳性检出率较液体培养法、传统PCR法均更高,差异有统计学意义(P<0.05)。TB-CPA法诊断准确性、灵敏度、特异度较液体培养法及传统PCR法均更高,差异有统计学意义(P<0.05)。TB-CPA法、液体培养法、传统PCR法诊断ROC曲线下面积分别为0.837、0.715、0.809,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TB-CPA法诊断结核性胸膜炎更具优势,可准确、快速检出疾病。

PCR在变形链球菌基因分型中的初步应用

目的探索利用PCR法来对变形链球菌进行基因分型。方法:采用两组针对变形链球菌的随机引物,于不同的反应体系中,研究不同条件下进行聚合酶链反应的结果,寻找满意的聚合酶链反应条件。并对变形链球菌群(血清型c、e、f、d、g)及3个临床分离株进行PCR扩增,对变形链球菌的电泳图谱进行分析,鉴定其基因型的多态性。结果运用两组随机引物均可鉴别不同血清型的变形链球菌,对同一血清型的链球菌还可鉴别其不同的基因型。结论两组随机引物均能对变形链球菌进行基因分型。随机引物PCR法简便、快速、分辨率较高,是鉴定变形链球菌基因型的有效方法。

变黑普里沃菌基因多态性及其在成人牙周炎患者龈下菌斑中的分布

目的 了解变黑普里沃菌 (P .n)的基因多态性及其在成人牙周炎 (AP)病变部位与正常部位是否存在基因型的差异。方法 采用随机引物多聚酶链扩增法 (APPCR)用引物OPA - 0 3和OPA - 13对来自 2 1例AP的 4 7株P .n作基因型分析。结果 同一患者口内有 1～ 3种基因型 ,以 1种和 2种为主 ;同一患者病变部位 (P)与正常部位 (H)有 1～ 2种基因型 ,以 1种为主 ;未发现与牙周正常状态相关的特定基因型P .n。结论 变黑普里沃菌是口腔的正常菌群。

呼吸道标本的采集、储存和运送规范

流感病毒检测最常见的是采集呼吸道标本,可采用拭子、刷子、吸出物和灌洗液获取呼吸道标本,可以采集鼻咽、口咽、鼻孔等.曾使用培养法或直接法荧光抗体法进行检测[1,2],现以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法,可以通过样本中少量的病毒核酸扩增而提高检测率[3].急性严重呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染流行期间,RT-PCR是SARS-CoV-2感染确诊的首选方法[4,5].检测准确性最高的标本是下呼吸道标本,但属于有创性操作.由于核酸扩增检测可以检测更低浓度的病毒,并且不需要细胞的存在,因此喉部拭子或唾液样本可能是进行分析的合适样本[6],但其检出率低于83%[7].

中国若干考古遗址古DNA样本的初步探索

古代DNA的研究方兴未艾,作为地域和人口大国,中国在这方面有着得天独厚的优势.我们利用遗传学手段对中国若干考古遗址进行了初步研究,并对两类古代DNA的提取方法进行了比较,同时,也尝试了模拟古代DNA条件的全基因组的随机引物预扩增的实验方法.对中国古代DNA研究提出了自己的思路及展望.