泛耐药鲍曼不动杆菌的随机扩增DNA多态性分析

目的 通过泛耐药鲍曼不动杆菌（PDR-AB）随机扩增DNA多态性（RAPD）同源性分析,以用于医院感染控制和流行病学的调查研究.方法 从ICU病房分离的10株鲍曼不动杆菌,提取DNA后行RAPD分型,同时进行抗菌药物敏感试验和流行病学分析.结果 感染ICU、外科ICU分离的PDR-AB菌株在随机扩增DNA多态性（RAPD）分型中为同一克隆株,敏感菌株与泛耐药菌株的同源性差异明显.结论 ICU存在泛耐药鲍曼不动杆菌的局部流行.

波氏假阿利什菌和尖端赛多孢子菌随机扩增DNA多态性分析

为了解波氏假阿利什菌和尖端赛多孢子菌的基因学特征，研究其DNA分型与菌种来源的关系。采用随机扩增多态性DNA分析（RAPD）方法。发现3种引物可将来自5个国家的13株波氏假阿利什菌和18株尖端赛多孢子菌分为31个基因型。

波氏假阿利什菌和尖端赛多孢子菌随机扩增DNA多态性分析

目的了解波氏假阿利什菌和尖端赛多孢子菌的基因学特征,研究DNA分型与菌种来源的关系。方法采用随机扩增多态性DNA分析(RAPD)方法。结果3种引物可将来自5个国家的13株波氏假阿利什菌和18株尖端赛多孢子菌分为31个基因型。多引物聚类分析所得树状图显示,除来自哥伦比亚土壤的3株波氏假阿利什菌外,其他受试菌株无地域性群集分布特点。但受试菌株中的多数波氏假阿利什菌和尖端赛多孢子菌株分别聚集成一群。结论波氏假阿利什菌和尖端赛多孢子菌存在较大株间差异,致病菌没有明显的地域性分布趋势,RAPD分型聚类分析结果与形态学分类之间具有一定一致性。

中国对虾一种C型杆状病毒随机扩增多态性DNA分析

于1994和1995两年的7月从青岛崂山上马镇养虾场中染病的中国对虾中分离纯化出一种C型杆状病毒。为建立中国对虾病毒的鉴别和检测技术，利用随机扩增多态性DNA技术对电泳纯化的病毒DNA进行分析和研究。将病虾匀浆、经差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化获得完整病毒粒子；从病毒中提取DNA后再进行电泳纯化，收集长度完整、均一的病毒DNA；在其他参数保持不变的情况下，对Operon生产的10碱基随机引物K试剂盒进行扩增试验。结果显示：1．病毒DNA有两种存在形式；2．K试剂盒中有2个引物能将病毒DNA扩增出长度不同的产物，其中编号为OPK—01的随机引物可产生多态性DNA片段；3．1995年中国对虾杆状病毒的RAPD分析结果与1994年相同，证实1994和1995两年度引起中国对虾疾病的病原是同一种杆状病毒。由此可以认为：随机扩增多态性DNA技术能将中国对虾C型杆状病毒扩增出多态性DNA片段而达到病毒鉴别和诊断的目的。

俄罗斯“和平”号空间站搭载的番茄随机扩增多态性DNA分析

目的从分子水平证实长时间航天搭载的番茄种子后代的遗传物质发生变异。方法利用俄罗斯“和平”号空间站搭载6年的番茄种子地面种植,进行随机扩增多态性DNA(randomamplifiedpoly morphicDNA,RAPD)检测。结果空间搭载的番茄和地面对照经RAPD分析,40个随机引物中,31个引物扩增的DNA带型一致,9个引物扩增的DNA带型表现多态性。共扩增出269条带,多态性带29条,多态性百分率为10.8%。空间搭载的番茄和对照相比扩增带型均出现差异,且空间搭载的番茄之 间的带型也不同。和地面对照相比,空间搭载的番茄中5号植株的DNA变异程度最大,3号植株变异程度最小。结论长时间航天飞行可引起番茄遗传物质DNA水平上的变异。

随机引物扩增DNA多态性技术在分析金黄色葡萄球菌和肺炎杆菌多态性中的应用

金黄色葡萄球菌和肺炎杆菌是医院内感染的主要条件致病菌 ,常常引起院内感染及暴发流行。本实验以一条含 10bp的随机引物将 5 2株肺炎杆菌和 2 8株金黄色葡萄球菌的DNA进行随机引物扩增DNA多态性 (RAPD)扩增 ,进行多态性分析 ,得到不同的带谱 ,在肺炎杆菌中存在很强的多态性 ,出现了 41种带型 ,通过肺炎杆菌间相似系数计算 ,绘制出表达菌株亲缘关系的系统树 ,图中可见各菌间的相似系数 ,5 2株菌分成 7个型 ;金黄色葡萄球菌出现了三条特征带。本实验说明RAPD技术能够追溯传染源 。

金铁锁三个居群的随机扩增多态性DNA分析

目的 :为金铁锁种质资源保护、种源质量标准研究奠定基础。方法 :采用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析方法对来自昆明、鹤庆、中甸的三个不同金铁锁PsammosilenetunicoidesW .C .WuerC .Y .Wu居群进行了居群遗传研究。结果 :金铁锁居群内遗传多样性较为丰富 ,同时居群间有较大的分化。结论 :在进行种质资源保护时 。

外源DNA导入水稻的变异材料随机扩增多态性分析

以小麦、玉米、小米、高粱、狼尾草五个不同属的材料为外源ＤＮＡ供体，经减压渗透转导受体紫稻，从获得的变异材料中各选一份进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析。共用２０个随机引物，其中６个引物扩增出了有差异的多态性ＤＮＡ片段，１个引物可以区分受体材料与变异材料及变异材料间的差异。在以材料两两间的相似率进行的聚类分析中，发现聚类结果与材料变异性状一致，变异材料与受体材料间相似率高达９０．７％，认为变异材料为受体材料在“减压渗透”处理后的真实变异；ＲＡＰＤｓ是检测材料间差异的有效方法。

幽门螺杆菌临床分离株的随机扩增多态性DNA指纹图分析

目的 :建立武汉及周边地区幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染病人胃内分离的Hp的DNA指纹图谱 ,并进行数理统计分析 ,探讨Hp基因型与疾病的相互关系 ,为临床诊断、防治及致病机制提供理论与实践基础。方法 :采取随机扩增多态性DNA指纹法 (RandomamplifiedpolymorphicDNA ,RAPD)对 4 8例病人Hp基因组DNA进行PCR反应 ,其随机引物为 :12 90 5’ GTGGATGCGA 3’。反应产物经 2 %琼脂糖凝胶电泳 ,成像存盘。用统计分析软件 (Statisticanalysissoftware,SAS)对HpDNA指纹图的相似性以及与疾病的相关性进行分析。结果 :每个菌株都有其独特的DNA指纹图 ,显示其基因的多态性 ;计算机聚类分析显示 :HpDNA指纹图可分为两大类 ,其与宿主疾病之间有一定程度的相关性 (P <0 0 5 )。结论 :(1)RAPD对HpDNA扩增结果是稳定、可靠的 ,是一种较好的分型方法。 (2 )幽门螺杆菌感染所致疾病可能与其基因型相关。

佛手种质资源遗传多样性的随机扩增多态性DNA分析

目的研究佛手种质资源多样性和遗传关系。方法采用随机扩增多态性随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析了佛手13份种质材料的亲缘关系。结果从110条引物中筛选出16条多态性高的引物,共扩增出185条DNA带,其中多态性带有168条,多态率为90.8%。通过聚类分析,在相似系数0.67的水平上将13份材料分为3类。结论佛手种质间存在较丰富的遗传多样性,聚类结果与以产地为依据对佛手进行品种类群划分较为一致。

随机扩增多态性DNA和同工酶分析鉴别金银花品系

目的 采用多态基因研究新技术鉴定金银花品系。方法 用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术和过氧化物酶同工酶(POD)电泳分析技术对大毛花忍冬和鸡爪花忍冬两品系进行鉴别。结果 大毛花忍冬共扩增DNA谱带 2 4条 ,鸡爪花忍冬共扩增DNA谱带 2 6条 ,POD的谱带数目分别为 5条和 2条。

铜绿假单胞菌随机扩增DNA多态性基因分型研究

利用微量液体稀释法进行药敏检测和RAPD技术进行基因分型,调查了铜绿假单胞菌在临床各科中的流行情况,以期建立稳定的临床检测系统,在控制院内感染的流行病研究中发挥更大的作用.结果表明耐药谱分6型,Ⅰ型占44.5%,Ⅱ型占18.5%,Ⅲ型占7.4%,Ⅳ型占7.4%,Ⅴ型占11.1%,Ⅵ型(不定型)占11.1%;RAPD分9型,A型占51.9%,B型占7.4%,C型占7.4%,D型占7.4%,E型占7.4%,F型占3.7%,G型占3.7%,H型占7.4%,I型占3.7%.说明基因型A型、耐药谱Ⅰ型的铜绿假单胞菌是此次ICU医院感染暴发流行的菌株,其他型别为非流行相关菌株.比较结果还说明RAPD基因分型的灵敏性、特异性及可靠性优于耐药谱分型,在医院感染流行病学调查中具有较大的应用价值.

随机扩增多态性DNA分析技术及其应用

随机扩增多态性DNA分析技术是90年代发展起来的一项以PCR为基础的基因分析方法。本文介绍了该技术的原理、特点,并综述了其在生物物种分类鉴定、世系发育及基因分析等生命科学领域中的应用。

随机扩增多态性DNA分析法在幽门螺杆菌鉴定中的应用

目的探讨随机扩增多态性DNA（RAPD）分析法在在幽门螺杆菌（HP）菌株鉴定中的应用价值。方法选取该院65例HP感染的慢性胃炎或消化性溃疡患者,获取胃窦、胃体部黏膜进行HP培养,提取及纯化HP DNA后进行PCR反应,并采用RAPD分析HP基因指纹图谱;以同一HP菌株验证RAPD可重复性;65例患者均进行6个月以上的HP治疗,治疗后4∽6周评估HP治愈情况;对复发病例再次进行RAPD分析,观察RAPD指纹图谱变化。结果 65株菌株PAPD指纹图谱各不相同,但同一菌株传4代后,原代株与传代株进行PCR扩增,RADP指纹图谱完全一致。6例HP治疗后复发,3例RAPD指纹图谱与治疗前基本一致;3例产生不同RAPD指纹图谱。结论 RAPD分析法适用于HP基因多态性鉴定,是临床研究HP感染的实用方法,可用于HP复发和再感染鉴定。

随机扩增的多态性DNA分析在Hp菌株鉴定中的应用

目的:建立一种快速准确鉴定不同Hp菌株的RAPD分析方法,并评价其在区分Hp复发和再感染中的应用价值。方法:用苯酚—氯仿方法提取Hp DNA,以一个10nt的寡核苷酸为引物,建立Hp PCR扩增体系,所得PCR产物以2％琼脂糖凝胶电泳分析(RAPD分析),以50株临床分离的Hp菌株检测该方法的重复性。对4例十二指肠溃疡伴Hp感染者在三联治疗前后及根除后一年内再现的Hp菌株进行RAPD分析,鉴别复发和再感染。结果:(1)同-Hp菌株于不同时间进行的2次RAPD分析,所得的PCR产物完全一致,说明该方法具有良好的可重复性。(2)50株不同的Hp菌株各产生不同的RAPD图谱,可按此图谱的不同将它们区分开来。(3)对4例十二指肠溃疡伴Hp感染者在治疗前及治疗后1年再现的菌株的RAPD分析,发现3例患者的菌株具有相同的RAPD图谱,证实为原菌株的复发,而1例患者的菌株则产生不同的RAPD图谱,推测为新菌株的再感染。4例患者随访1年均为十二指肠溃疡复发。结论:RAPD分析只需单一的随机引物,方法简便、快速、经济、重复性好,可用于区分不同来源的Hp菌株,特别对治疗前后再现的菌株复发和再感染的鉴别更具临床应用价值。

铜绿假单胞菌随机扩增DNA多态性基因分型研究

目的:调查铜绿假单胞菌在临床各科中的流行情况,以期建立稳定的临床检测系统,在控制院内感染的流行病研究中发挥更大的作用。方法:用微量液体稀释法进行药敏检测,用RAPD技术进行基因分型。结果:耐药谱分6型,Ⅰ型占44·5%,Ⅱ型占18·5%,Ⅲ型占7·4%,Ⅳ型占7·4%,Ⅴ型占11·1%,Ⅵ型(不定型)占1·1%;RAPD分9型,A型占51·9%,B型占7·4%,C型占7·4%,D型占7·4%,E型占7·4%,F型占3·7%,G型占3·7%,H型占7·4%,I型占3·7%。结论:基因型A型、耐药谱Ⅰ型的铜绿假单胞菌是此次ICU医院感染暴发流行的菌株,其它型别为非流行相关菌株。RAPD基因分型的灵敏性、特异性及可靠性优于耐药谱分型,在医院感染流行病学调查中具有较大的应用价值。铜绿假单胞菌对哌拉西林、头孢唑啉、头孢呋肟耐药率高;对喹诺酮类抗生素较敏感;对氨基糖甙类抗生素有一定的耐药性;亚胺培南的耐药率最低。

吐鲁番果蝇随机扩增DNA多态性初步分析

由于吐鲁番地区独特的气候特点,对吐鲁番果蝇和实验室野生型果蝇进行随机引物扩增DNA多态性的初步研究。结果表明:吐鲁番果蝇与野生型果蝇在DNA水平上的有差异性,并且优化出一种提取果蝇基因组DNA的方法。文章研究的目的在于探讨吐鲁番果蝇在DNA水平上的遗传多样性。

鸭不同品种的随机扩增多态性DNA分析

随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡＳ，ＲＡＰＤ）是利用含有１０个（或９个）碱基的随机引物（单引物）通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对模板ＤＮＡ进行随机扩增，根据扩增的某一ＤＮＡ片段的有无来比较不同基因组ＤＮ...

随机扩增多态性DNA分析技术及其在蚊虫分类研究中的应用

经典的蚊虫分类主要依靠形态特征,但对于形态特征相似的亲缘种的分类鉴定则需要其它方法。DNA探针、限制性片段长度多态性。

细菌随机扩增DNA多态性反应体系优化

目的:对RAPD的反应体系进行优化,以期建立稳定的临床检测系统,在控制院内感染的流行病研究中发挥更大的作用。方法:用RAPD技术进行基因分型。结果:引物浓度:浓度为0·5μmol/L时扩增最好。DNA模板:浓度在0·50ng/μl、2ng/μl均得到了良好的扩增效果。镁离子浓度:在2·0mmol/L、4mmol/L时扩增效果较好。退火温度:在30℃时扩增条带最清晰。循环参数:在35、45个循环时扩增效果均好。结论:本试验对RAPD反应条件进行优化,建立了较稳定的临床检测体系。