从水稻Ac/Ds插入突变体扩增Ds侧翼序列的最适TAIL-PCR引物(英文)

温度非对称交互PCR(TAIL PCR)技术已广泛应用于从多种生物体系克隆侧翼于已知序列的DNA片段的分子操作中 ,并极大地促进了反向遗传学研究。但是 ,可能由于不同物种间基因组大小和序列存在显著差异 ,在采用该技术进行转座元件Ds水稻插入突变体鉴定过程中 ,常因TAIL PCR反应的稳定性差而影响突变体筛选效率。有鉴于此 ,根据Ds核苷酸序列设计了分别对应或互补于Ds插入元件两端长度不同的 12个特异引物组成 32个组合 ,在大量预试验基础上与 6个不同简并性 (32～ 2 5 6 )的随机简并引物分别组合进行TAIL PCR反应 ,较系统地研究了引物特性对以水稻基因组DNA为模板的TAIL PCR反应效率的影响。结果发现 ,第一反应采用长序列特异引物(36～ 4 0mer)可显著提高扩增特异性 ,随机简并引物的简并度对反应的影响显著。还选择出两个适于从水稻Ds插入突变体基因组高效扩增出Ds插入侧翼片段的最优特异引物组合和最适简并引物。应用本研究结果可显著地提高TAIL

一株宽宿主谱大肠埃希菌噬菌体的RNA比较分析及其环境微生物杀灭效应观察

目的通过比较研究一株分离自医院污水的宽宿主范围大肠埃希菌(E.coli)噬菌体与野生型单一宿主谱E.coli噬菌体的核酸序列和微生物杀灭效应等生物学特性的改变探讨噬菌体识别特异性机制和将噬菌体作为生物消毒剂应用于环境污水净化的可行性。方法采用抗体沉淀盐酸胍一步法分别提取单一宿主谱E.coli噬菌体f2株及宽宿主谱E.coli噬菌体株的RNA,通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其纯度;采用简并引物逆转录聚合酶链反应(RTPCR)及随机引物随机扩增多态性DNA(RAPD)PCR比较分析噬菌体宿主谱改变时核酸序列组成的变化;通过以上两噬菌体对环境样本中活菌和E.coli的杀灭效果的观察,比较分析宿主谱改变对噬菌体的微生物杀灭效应这一生物学特性的影响。结果噬菌体核酸分析试验证实,f2噬菌体及宽噬噬菌体均为6000bp左右的单链RNA噬菌体。RAPDPCR结果显示,两噬菌体基因cDNA扩增出的RAPDDNA片段有明显的差异,其中26条为可区分的DNA带型。利用简并引物进行的RTPCR反应显示,噬菌体f2cDNA在450bp附近出现重复性较好的扩增片段,而宽噬噬菌体cDNA在相同条件下未出现扩增产物。环境水样本微生物杀灭试验结果显示,宽宿主谱株噬菌体对环境水样本中的E.coli杀灭率为36.75%～56.28%,对水样本中活菌杀灭率为30.84%～47.96%;而噬菌体f2对环境水?