苜蓿基因组总DNA提取及RAPD反应条件优化

采用CTAB改良法,从苜蓿成熟叶片中提取到高质量、高纯度的DNA。对RAPD反应程序的重要参数进行摸索和优化试验,建立的适合苜蓿RAPD分析应用的体系组成为:反应液总体积25μL,模板DNA浓度135 ng.μL-1,10×缓冲液浓度2.5 mmol.L-1,10碱基引物浓度15pmol,Taq DNA聚合酶1U,dNTP浓度1.5mmol.L-1,Mg2+浓度2.5 mmol.L-1。

一种新的梨基因组DNA提取方法及其应用

摸索出一种新的DNA提取方法——CTAB改良法,从梨成熟叶片中提取到高质量、高纯度的DNA。同时,分析了模板DNA和dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶用量等对RAPD反应体系的影响,建立了一套适合梨基因组RAPD分析的技术体系。

平菇基因组DNA的提取及RAPD体系的优化

应用SDS与β-SH乙醇结合的方法对平菇菌丝体、原基、菇蕾和成熟子实体4种材料的基因组DNA进行了提取,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,20μL反应体系中,模板加入量为6～10ng,引物加入量10pmol,dNTPs(各2.5 mmol)加入量为1.5～2μL,Taq酶加入量为0.5U,退火温度设置在略低于引物Tm值的范围。

分子标记在牡丹遗传多样性分析与品种鉴定中的应用

分子标记技术的实用性越来越受到人们的重视,在牡丹种质资源遗传多样性分析和品种鉴定等研究方面,TRAP、SRAP、SCoT、EST-SSR和CDDP等新型目的基因分子标记方法的应用为以RAPD、AFLP、ISSR、SSR等传统随机DNA分子标记的研究成果提供了强有力的补充。此文分别对随机DNA分子标记和目的基因分子标记技术在牡丹遗传多样性及品种鉴定中的应用现状作了综述,指出了目前相关研究中存在的主要问题及其解决措施与方法,以期为牡丹种质资源的整理、亲缘关系的分析和品种鉴定工作提供研究基础和科学依据。

多子领春木RAPD反应体系的研究

利用RAPD(随机扩增多态性DNA)技术对濒危植物多子领春木进行了RAPD反应体系的研究。以多子领春木叶片为材料,采用改良的CTAB法提取其基因组DNA,进行RAPD反应条件的优化。通过单因子试验,分别研究了模板DNA用量、Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq酶的用量和引物浓度对RAPD反应的影响,建立了适于多子领春木RAPD分析的有效稳定的反应体系,即在25μL总反应体系中,模板DNA的最适用量为10 ng、Mg2+的适宜浓度为2·0 mmol·L-1、dNTPs的适宜浓度2·2 mmol·L-1、Taq酶的用量为1U、随机引物的浓度以2·5μmol·L-1为佳。

孔雀石绿对小鼠睾丸基因组随机扩增DNA多态性的影响

目的:探讨孔雀石绿(malachite green,MG)对小鼠睾丸基因组随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)分子标记扩增图谱的影响。方法:24只成年雄性BALB/c小鼠随机均分为8组,MG浓度为:A1(0mg/L)、B1(100mg/L)、C1(400mg/L)、D1(800mg/L);A2(0mg/L)、B2(100mg/L)、C2(300mg/L)、D2(600mg/L)。A1～D1组连续经灌胃给药30d,A2～D2连续给药90d。取睾丸组织,提取睾丸基因组DNA,检测RAPD分子标记扩增图谱的基因组模板稳定性值(genometemplate stability,GTS)。结果:MG染毒各剂量组均可见睾丸基因组RAPD分子标记扩增图谱发生改变。MG染毒30d实验组中,GTS值B1组与A1组间无统计学差异(P>0.05),C1、D1组均显示低于A1组(P<0.05)。MG染毒90d,GTS值B2组与A2组间也无统计学差异(P>0.05),C2、D2组与A2组比较GTS值均显著降低(P<0.05)。D2组与D1组比较GTS值有显著降低(P<0.05)。GTS值与MG的剂量呈显著负相关(rs=-0.699,P<0.01)。结论:MG染毒能使小鼠睾丸GTS值降低,可能对睾丸基因组DNA造成损伤。

广西产鸡血藤遗传多样性的RAPD与ISSR标记方法的比较研究

目的:比较随机扩增多态性DNA分子标记技术(RAPD)和简单重复序列间区扩增技术(ISSR)两种标记方法,研究广西不同居群鸡血藤遗传多样性的优劣。方法:分别采用RAPD和ISSR标记方法,利用POPGENE 32软件、Ntsys软件、SPSS 17.0软件,对广西不同采集地的9份鸡血藤的遗传多样性进行研究。结果:筛选出的3条RAPD引物及4条ISSR引物扩增后,共得到198和315个位点,多态性位点37和80个,多态性位点比率为18.7%和25.4%,有效等位基因数为1.416 8、1.584 0,基因多样性指数为0.269 4、0.351 3,Shannon多样性指数为0.431 6、0.529 9。ISSR标记均高于RAPD标记,RAPD和ISSR的平均遗传相似系数为0.757 64、0.683 80,表明ISSR检测遗传多样性更灵敏。二者的聚类结果相近,相关系数r为0.847,说明其在0.001水平呈极显著正相关。结论:ISSR标记方法比RAPD标记反映出更多的遗传多样性信息,更适合于广西产不同居群鸡血藤的遗传多样性研究。

怀菊花种质资源品质评价

目的:对怀菊花种质资源品质评价,分析不同地域菊花的遗传关系及其药材的质量差异。方法:实地观察、走访药农等方法调查分析怀菊花种质资源;以2015年版《中国药典》中方法对绿原酸,木犀草苷,3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸的含量测定;紫外-可见分光光度法总黄酮测定,2015年版《中国药典》中方法对水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、挥发油测定为主要评价指标,对不同产地的菊花药材的质量进行评价;采用随机扩增多态性DNA分子标记(RAPD)法分析不同产地菊花的遗传关系。结果:通过对菊花6项指标的分析,其有效成分含量均符合2015年版《中国药典》标准,表明温县、武陟县适合怀菊花的生长,是道地产区;7条引物共扩增出50条带,其中46条呈多态性,多态性比率为92.00%,怀菊和杭菊、贡菊、野菊都未能聚类,表明它们之间的亲缘关系较远,也证明在菊花种质资源中存在较丰富的遗传多样性,怀菊花聚为一大类,表明怀菊花栽培品种的遗传纯度较高。结论:对怀菊花种质资源分析研究,为怀菊花的规范化种植提供科学的参考依据;保护怀菊花资源、合理开发利用药材提供了科学依据。