寡核苷酸表达谱揭示异烟肼耐药对结核分支杆菌致病性的影响

目的研究结核分支杆菌异烟肼耐药菌株与H37Rv异烟肼敏感菌株感染巨噬细胞后差异表达的基因。方法利用高密度cDNA芯片检测巨噬细胞U937感染结核分支杆菌异烟肼耐药菌株与H37Rv后的基因表达谱的差异。结果两者诱导巨噬细胞的差异表达基因有53条,异烟肼耐药菌株比敏感菌株诱导多种趋化因子和细胞免疫增强的细胞因子表达上调和免疫抑制细胞因子IL10等表达下调。结论异烟肼耐药对细菌毒力有明显的影响,异烟肼耐药菌株的致病力下降,异烟肼耐药菌株容易被宿主免疫系统清除;结果为耐多药结核病控制提供依据;骨桥接素和巨噬细胞趋化因子等,在抗异烟肼耐药结核分支杆菌感染免疫中的作用值得深入研究。

DNA序列分析与PCR-SSCP分析结核分支杆菌利福平敏感性的比较

目的 了解DNA序列分析与PCR -SSCP法分析利福平敏感性的价值。方法 应用DNA序列分析与PCR -SSCP法检测利福平敏感的结核分支杆菌临床分离株 2 5株、耐药株 4 1株的利福平耐药相关基因rpoB基因核心区域的突变情况。 结果 2 5株利福平敏感株DNA序列分析未检测到rpoB基因突变 ,4 1株耐利福平株中 38株发生突变 ,突变率为 92 .7% (38/ 4 1) ;2 5株利福平敏感的结核分支杆菌菌株PCR -SSCP带型与对照H37Rv株相同 ,4 1株耐利福平结核分支杆菌菌株中38株SSCP带型不同于对照株 ,提示有突变存在。与DNA序列分析相比 ,PCR -SSCP检测准确率为 93.9% (6 2 / 6 6 ) ,敏感度为 92 .1% (35 / 38) ;特异度是 96 .4 % (2 7/ 2 8)。结论 DNA序列分析对判断结核分支杆菌耐利福平非常有价值 ;PCR -SSCP可用于利福平耐药结核分支杆菌的初步筛选。

聚合酶链反应-单链构象多态性技术检测耐多药结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL突变的研究

目的 应用PCR SSCP技术快速检测耐INH ,RFP ,SM结核分支杆菌分离株KatG、rpoB、rpsL基因突变 ,评价其在检测结核分支杆菌耐药性方面的价值。方法 32株耐INH、RFP、SM结核分支杆菌临床分离株及 2 5株结核分支杆菌敏感分离株用PCR SSCP方法分别检测 ,rpoB、KatG、rpsL基因突变。结果 32株耐多药结核分支杆菌分离株中 ,rpoB、KatG、rpsLPCR扩增产物PCR SSCP分别有 2 8株 (87.5 % )rpoB基因 ,19株 (5 9.3% )KatG基因和 2 3株 (71.9% )rpsL基因电泳条带与结核分支杆菌标准株H3 7Rv电泳条带相比有明显差异 ,而 2 5株结核分支杆菌敏感株的PCR SSCP条带与结核分支杆菌H3 7Rv相似 ,特异性为 10 0 %。结论 PCR SSCP方法敏感、特异 ,可快速检测结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL耐药基因突变 。

结核分支杆菌药物敏感性测定

药物敏感性试验为结核病化疗及控制的重要依据之一,早在1961年WHO召集的结核病细菌学专家会议就正式确立结核病人化疗时结核分支杆菌药物敏感性测定的基本原则,将结核分支杆菌药物敏感性试验的目的定为三项:(1)指导开始治疗的药物选择;(2)

结核分支杆菌的初始、获得性耐药及复治后MDR-TB研究

目的 :了解本地近 10年活动性结核病病人的初始、获得性耐药及复治后耐多药结核 (MDR -TB)分布情况 ,为临床制定有效抗结核方案、防痨机构流行病学调查及制定宏观控制方案提供参考。方法 :分临床及结核菌监测两部分。临床资料主要针对有流行病学意义的住院结核菌阳性病人 ,对不同地区及年龄段的结核菌阳性病人的治疗、预后、复治原因及死亡率作分析 ;耐药菌检测主要对门诊及住院病人的痰及其他标本作结核菌培养及NAP区分试验。结果 :住院活动性结核病人 96 0 5例 ,结核菌阳性 32 82例 ,占 34.16 % ,15～ 6 0岁年龄段占 85 %以上。复治结核菌阳性组合并症及药物毒副反应、死亡率均高于初治组 ;8984份标本作分支杆菌培养 ,阳性 36 97份 (41.15 % ) ;3373株结核菌作耐药监测 ,总耐药率 5 5 .70 % ,初始耐药 4 12株 ,占 12 .2 1% ;初始MDR -TB菌 15 4株 ,占初始耐药菌的 37 37%。复治菌株耐药率 4 3.4 9% ,复治MDR -TB菌 82 2株 ,占复治耐药菌的 5 6 .0 3%。结论 :临床工作中 ,结核菌阳性病人占 1/ 3左右 ,青壮年组占 85 %以上 ,复治及复治后组毒副反应及死亡率高。耐药率 10年来有逐年增高趋势 ,初始耐药及获得性耐药率均高于全国平均水平 ,并趋于MDR -TB。

热杀死结核分支杆菌H37Ra诱导的SD大鼠佐剂性关节炎模型研究

目的对热杀死结核分支杆菌H37Ra(Mtb)诱导SD大鼠关节炎模型的血液学、T细胞功能、关节滑膜细胞凋亡及病理变化进行分析,以评价该模型与临床RA类疾病的相似性。方法 SD大鼠尾根部一次性皮下注射Mtb-矿物油诱导剂,定期检测大鼠外周血液常规、血液流变学改变;采用流式细胞术测定外周血淋巴细胞凋亡率及调节性T细胞比例;TUNEL法检测关节滑膜细胞凋亡,镜下观察关节滑膜病理改变。结果 SD大鼠经Mtb免疫后,外周血血红蛋白含量下降,血小板总数、红细胞压积上升,全血黏度、血浆黏度上升;外周血淋巴细胞凋亡率明显降低;CD4+CD25+FOXP3+T细胞占CD4+T细胞的比例、CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例均下降;关节滑膜细胞凋亡减少;关节滑膜组织异常增生,有大量炎性细胞浸润,并有肉芽组织形成。结论由Mtb诱导的SD大鼠佐剂性关节炎模型临床表现及组织学改变与临床RA相似,免疫学指标存在明显的细胞免疫异常;该模型制作方法简单、复制成功率高、经济实用,可广泛用于RA的医学研究及抗RA新药筛选。

结核分支杆菌耐药基因检测对获得性耐药性的研究

了解不同年龄段肺结核病人的结核分支杆菌获得性耐药情况 ,比较两种耐药性检测方法的检测效果 ,评价它们的临床应用价值。用药敏试验 (绝对浓度法 )检测了结核分支杆菌株对RFP、INH、SM、PZA和EMB耐药情况 ,采用聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR -SSCP)检测结核分支杆菌耐药rpoB、katG、rpsL、pncA和em bB基因突变 ,用绝对浓度法作药物敏感试验。青年组、中年组和老年组获得性耐药率分别为 89.2 %、85 .3%和6 7.6 % ,耐药基因突变率分别为 76 .2 %、81.3%和 6 3.2 % ,青年组耐药率和耐多药率显著高于其他组。结核杆菌耐药基因突变与耐药水平联系密切 ,多数结核分支杆菌耐药基因突变易发生在高耐药区 ,也有少数基因突变发生在低耐药区。不规律用药时间越长耐药率越高。不同年龄组获得性耐药情况有差别 ,应重视不同年龄组 ,特别是青年组耐药率检测。PCR -SSCP是一种快速检测结核杆菌rpoB、katG、rpsL、pncA和embB基因突变敏感、特异的方法。

随机扩增多态性DNA技术对结核分支杆菌菌株鉴别及其耐药相关性分析

用引物G1和L1扩增的 16S～ 2 3SrDNA间隔区作为模板DNA ,再用引物AP5 0进行随机扩增多态性DNA(RandomAmplifiedPolymorphicDNA ,RAPD)分析 .经AP5 0扩增出的各菌株DNA片段 ,用 1.2 %的琼脂糖凝胶电泳EB染色 ,可获得 1或 2个大小不同的DNA片段 (390～ 10 31bp) ,各株间差异明显 .结果表明 ,不同菌株有不同的DNA多态性 ,药物敏感株与耐药株之间多态性差异明显 ,耐药株中耐药谱相似或相同的菌株间其多态性也相似 ,RAPD有助于简便、快速、有效地了解菌株间的克隆相关性及耐药性传播 .

耐多药结核分支杆菌基因突变在老年结核病病人耐药性检测中的应用

目的探讨耐多药结核病(MDR-TB)临床分离株rPOB、KatG和rpsL基因突变在结核病耐药性检测中的应用价值。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析了同时耐异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)的多耐药临床分离株和35株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变。结果以结核分支杆菌H37RV为对照,35株药物敏感株的rPOB、rpsL基因SSCP图谱正常,其特异性为100%;KatG基因有2株图谱异常,特异性为94.3%。71株结核分支杆菌临床分离株均未发现rPOB、KatG、rpsL基因缺失,其PCR扩增产物SSCP分析结果表明36株多耐药临床分离株中,32株rPOB基因图谱异常;21株KatG基因图谱异常;26株rpsL基因图谱异常。其敏感性分别为rPOB(88.9%)、KatG(58.3%),rpsL(72.2%)。结论结核分支杆菌耐RFP、INH、SM耐药性的产生主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。PCR-SSCP技术有望成为结核分支杆菌耐药性检测的方法之一。

耐多药结核分支杆菌基因突变在耐药性检测中的应用

目的 探讨耐多药结核病 (MDR -TB)临床分离株rpoB ,KatG和rpsL基因突变在耐药性检测中的应用价值。方法 采用聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)技术分析了同时耐异烟肼 (INH)、利福平 (RFP)、链霉素(SM)的多耐药临床分离株和 3 5株药物敏感株的rpoB ,KatG ,rpsL基因突变。结果 以结核分支杆菌H3 7RV为对照 ,3 5株药物敏感株的rpoB ,rpsL基因SSCP图谱正常 ,其特异性为 10 0 % ;KatG基因有 2株图谱异常 ,特异性为 94%。 71株结核分支杆菌临床分离株均未发现rpoB ,KatG ,rpsL基因缺失 ,其PCR扩增产物SSCP分析结果表明 ,3 6株多耐药临床分离株中 ,3 2株rpoB基因图谱异常 ,2 1株KatG基因图谱异常 ,2 6株rpsL基因图谱异常 ;其敏感性分别为rpoB(89% ) ,KatG(5 8% ) ,rpsL(72 % )。结论 结核分支杆菌耐RFP ,INH ,SM耐药性的产生主要是由于rpoB ,KatG和rpsL基因突变所致 ;PCR -SSCP技术有望成为结核分支杆菌耐药性检测的方法之一。

结核分支杆菌早期分泌性抗原靶ESAT-6研究新进展

结核分支杆菌的多种分泌蛋白已成为现今对该菌研究的热点,如Ag85复合物、MPT64、ESAT-6及Mtb8.4等,其中结核分支杆菌早期分泌性抗原靶(ESAT-6)是从结核杆菌短期培养滤波(ST-CF)中分离的一种低分子量分泌性蛋白,具有较强的细胞免疫活性,在卡介苗(BCG)各菌株中缺乏其编码基因,可望成为人和动物结核病的特异性诊断试剂、抗结核病亚单位疫苗的侯选抗原和结核病DNA疫苗的侯选目的基因。

两种不同测试方法对结核分支杆菌异烟肼耐药性结果的比较

目的:探讨在新疆地区应用比例法测试结核杆菌药物敏感性的可行性。方法:用比例法和绝对浓度法测试了56株结核分支杆菌对异烟肼的敏感性。结果:两种方法检出的耐药率无显著性差异,比例法测试指标明显高于绝对浓度法。结论:比例法和绝对浓度法结果的差别主要是两种方法的临界药物不同,但是均可以满足药敏实验的要求。

第四次全国结核病流行病学抽样调查分支杆菌药物敏感性测定的方法学探讨

目的 探讨比例法和绝对浓度法测试分枝杆菌耐药性的一致性可比性，对乙胺丁醇的效价计算方法进行分析探讨。方法 对第四次全国流调分离的453株分支杆菌用比例法和绝对浓度法同时进行4种抗结核药物（INH、SM、RFP、EMB）的耐药性测定，并用二种效价计算方法对乙胺丁醇的耐药性进行对比试验。结果 402株结核分支杆菌用二种方法检出的四种药物的耐药率均无统计学显著性差异（P>0.05)，在51株非结核分枝杆菌中，除EMB用比例法检出的耐药率明显高于绝对浓度法外（P<0.01)，其余3种药物二种方法的耐药率无显著性差异。H、S、R、E二种方法检测结果的一致率分别为96.2%,97.1%,98.7%,96.9%。EMB用二种效价计算方法检测结果的一致率为99.1%。结论 用比例法和绝对浓度法进行结核分支杆菌耐药性测定的一致性较高，药敏试验方法向比例法转轨，不会影响与我国既往资料的连续性和可比性。建议今后苛作中对EMB的效价计算方法加以改进。

非结核性分支杆菌的致病性及其鉴定方法

非结核性分支杆菌属于放线菌目,分支杆菌科,分支杆菌属,其分布广泛,可传染家畜及人类。近年来随着越来越多的非结核性分支杆菌疾病被发现并报道出来,已经引起人们的广泛关注和学者的研究兴趣。由于非结核性分支杆菌其临床表现与结核性分支杆菌极为相似,诊断起来有一定的困难。根据国内外近几年的报道,对非结核性分支杆菌从易感人群、感染部位及长期慢性生长等角度综述其致病性,举例说明其临床症状,再总结比较了传统分析鉴定法、噬菌体分析法、聚合酶链式反应技术和核酸探针等几种非结核性分支杆菌的鉴定方法,建议在临床表征相似时,不仅仅采用传统方法进行分离鉴定,应该采用多种分离方法相结合来进行细菌的分离鉴定,减少时间,节约成本,同时继续研发新的分类方法。

不同年龄复治肺结核患者结核分支杆菌耐药性的研究

目的分析不同年龄组复治肺结核患者结核分支杆菌的耐药情况,探讨当前结核病耐药性发展趋势。方法将691例痰结核分支杆菌培养阳性的复治肺结核患者分为青年组149例、中年组255例和老年组215例,采用绝对浓度法进行INH、SM、EMB和RFP等4种抗结核药物耐药性测定。结果青年组、中年组和老年组获得性耐药率分别为73.8%、58.4%和45.1%,中年组高于老年组(P<0.01),青年组高于老年组(P<0.001);获得性耐多药率青年组、中年组和老年组分别为44.1%、31.4%和19.5%,青年组高于中年组(P<0.01)和老年组(P<0.001),中年组高于老年组(P<0.005);对RFP的获得性耐药率青年组和中年组均高于老年组(P<0.001)。结论不同年龄组获得性耐药率差异较大,建议应重视不同年龄组复治肺结核患者耐药率的监测,为修订结核病控制规划提供依据。