新生隐球菌荚膜基因CAP60对菌体荚膜形成的影响

目的 :研究新生隐球菌荚膜相关基因 CAP6 0对菌体荚膜形成的影响。 方法 :用 PCR方法分离 CAP6 0基因并测序鉴定 ,将该基因导入转化载体并转化 cap6 0 ura- 菌株 ,乳胶凝集试剂盒筛选转化分子。 结果 :部分转化子恢复荚膜的表型 ,表明得到的片段具有荚膜基因功能。 结论 :荚膜基因对新生隐球菌的荚膜形成都是必须的 。

三种糖类对新生隐球菌荚膜相关基因CAP10启动活性的影响

目的：研究葡萄糖、甘露糖、半乳糖对新生隐球菌荚膜相关基因CAP10启动活性的影响。方法：用含CAP10编码区上游5’侧翼序列（-951～0bp）和报告基因的重组体转化酵母，分别用不同浓度（10、20、40、60、80mg／ml）的葡萄糖、甘露糖、半乳糖对其进行干预，用ELISA方法检测CAT表达值，比较各组间CAT表达活性的不同。结果：不同浓度的葡萄糖和甘露糖对CAT的表达强弱无明显的影响；而不同浓度的半乳糖对CAT的表达强弱有明显的影响，而且这种正向诱导作用在实验所用的剂量范围内具有剂量依赖关系。结论：葡萄糖和甘露糖对CAP10启动活性无明显影响；半乳糖对CAP10的启动活性有明显的诱导作用，推测CAP10基因可能与新生隐球菌中半乳糖的代谢有关。

新生隐球菌CAP64荚膜缺陷株ura5突变株的筛选和鉴定

目的 :筛选和鉴定新生隐球菌 CAP6 4荚膜缺陷株 ura5突变株。方法 :(1 )用体外基因重组技术将 G4 1 8抗性基因插入到新生隐球菌 1 .2 kb的 ura5基因中 ;(2 )用电转化方法将体外重组片段导入受体菌 ;(3)利用 5 -氟乳清酸 (5 - FOA)反筛选法筛选 ura5突变株 ;(4 )用遗传学鉴定营养缺陷株的方法鉴定突变体。结果 :1株突变株 ura5基因的序列与重组片段相同 ;其Southern杂交显示在 2 0 kb和 7kb处出现 2条杂交条带 ;该突变株能在 SDU、SDU和 YEPD/ G4 1 8平板上生长 ,不能在 SD平板生长 ;其生长曲线显示突变株生长速度依赖于尿嘧啶的提供量。 结论 :获得了 1株新生隐球菌 CAP6 4荚膜缺陷株 ura5突变株 ,建立了新生隐球菌 CAP6 4荚膜缺陷株转化系统 ,为 CAP6

新型隐球菌与荚膜相关蛋白基因

隐球菌病是一种可在人和多种动物中发生的严重的真菌病，通常多由存在于泥土中的腐生物、鸽子的排泄物和环境中其他物质中的新型隐球菌所引起。本病属于外源性感染，经呼吸道侵入人体，而由肺经血行播散时可侵犯所有脏器组织，主要侵犯肺、脑及脑膜，也可侵犯皮肤、骨和关节。据报道在HIV高度感染的患者中，隐球菌病的患病率是6％～8％；在肾移植受者中．患隐球菌病的终身危险率接近10％。

CAP59荚膜相关基因最大外显子序列用于新生隐球菌分型的探讨

目的 探讨CAP5 9基因最大外显子序列对新生隐球菌进行分型的可行性。方法 根据CAP5 9基因最大外显子序列设计 1对引物 ,对新生隐球菌 5个血清型菌株进行PCR扩增和测序 ,用GenBank数据库分析序列的差别 ,Phylip3.6a3软件处理数据并绘制种系进化树 ,选择一定数量的新生隐球菌临床分离株和其他致病真菌进行临床验证。结果 新生隐球菌不同血清型菌株的CAP5 9最大外显子序列存在差别 ,临床验证显示CAP5 9基因最大外显子对受试菌株分型结果与免疫学分型结果全部符合。结论 以所设计引物扩增的基因可以作为新生隐球菌分型和检测的分子生物学工具。

新生隐球菌荚膜相关基因CAP10启动序列的活性研究

目的筛选具启动活性的新生隐球菌荚膜相关基因CAP10编码区上游5′侧翼序列(启动子序列),为进一步研究其调控机制打下基础。方法利用氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的编码基因为报告基因,构建了含不同长度的新生隐球菌荚膜相关基因CAP10编码区上游5′侧翼序列和报告基因的重组体,转化酵母,ELISA方法检测各转化子的CAT表达活性,并通过比较找到CAP10启动序列。结果发现含CAP10编码区上游303bp、390bp、500bp、951bp的转化子具有明显的CAT表达活性,而含202bp、102bp的转化子无明显的CAT表达活性。结论CAP10上游5′侧翼端303bp～0bp是具完整启动活性的最小单位。CAP10上游5′侧翼端202bp～303bp内含CAP10启动所必需的序列。

荚膜在新生隐球菌对人角质形成细胞黏附与通过细胞层中的作用

原发性隐球菌皮肤感染已经作为独立的疾病在近年来受到了公认。荚膜是新生隐球菌目前已知的最重要的毒力因子，目前确定了4个独立的荚膜形成相关基因。HaCaT细胞是目前应用比较成熟的人角质形成细胞（KC）的体外研究模型。利用这一模型，我们对荚膜在隐球菌对KC的黏附和通过过程中的作用进行了探讨。

新型隐球菌Cap10蛋白的重组表达及多克隆抗体制备

目的:重组表达新型隐球菌Cap10蛋白并制备特异抗体,为新型隐球菌的检测和诊断提供特异抗原和抗体。方法:选择CAP10基因开放阅读框架(ORF)抗原表位集中、保守性高的片段,经过大肠杆菌偏嗜的密码子优化后进行基因合成,将目的片段克隆至原核表达载体pQE30中构建重组蛋白表达载体pQE30-CAP10并鉴定,IPTG诱导重组蛋白在M15中表达,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定;镍柱纯化后,免疫家兔制备抗血清。结果:在大肠杆菌中成功表达Cap10,其纯度大于95%;二免后家兔血清抗体效价达到200万以上。结论:获得了高纯度的Cap10蛋白及高效价的多克隆抗体,为新型隐球菌的检测和致病机制研究奠定了基础。