人胎儿腭扁桃体隐窝上皮超微结构研究

以电镜观察第４～８月龄人胎儿腭扁桃体的超微结构。第４月龄扁桃体上皮开始形成上皮芽并长入其下的结缔组织形成隐窝；隐窝上皮内出现淋巴细胞、交错突细胞、巨噬细胞等浸润。随胎龄增长浸润细胞数量增多并渐扩展到上皮表层。第８月龄胎儿隐窝上皮表层有少数Ｍ细胞，具有较一般上皮细胞为多的微绒毛并以胞质突起包绕和覆盖淋巴细胞。隐窝上皮下结缔组织中常见淋巴细胞、巨噬细胞等；毛细血管较丰富，有的血管紧贴上皮基膜分布。扁桃体固有层中初级淋巴小结在第４月龄已渐形成，此后增大并成熟，小结间弥散淋巴组织区窄小，可见呈立方内皮的毛细血管后微静脉。

胎儿腭扁桃体隐窝上皮超微结构研究

胎儿腭扁桃体隐窝上皮超微结构研究张健宁，周丽玲，郭仁强（南京医科大学电镜室、组织胚胎学教研室，南京２１００２９）腭扁桃体是人体重要的免疫器官，隐窝上皮是该器官中最先接触和摄取抗原，并引起免疫应答的部位，其结构较特殊。以往研究￣［１］［２］证明扁桃体隐...

发酵奶对二甲基肼诱发小鼠大肠隐窝上皮细胞微核和凋谢的影响

近交系C_(57)BL小鼠分别饮用发酵奶、牛奶和自来水。7天后给各组小鼠腹腔注射二甲基肼。24h后处死动物,取大肠固定,按卷帘法石蜡包埋,切片油镜观察20个纵切完整的隐窝,计数上皮细胞中出现微核和凋谢率。经统计学处理,发酵奶组的微核和凋谢率明显低于饮水和饮牛奶组。结果提示Shahani菌株发酵奶能明显抑制二甲基肼对小鼠大肠隐窝上皮细胞的诱变作用。

放射增效剂9402号对小鼠小肠隐窝上皮细胞增敏作用的研究

研究目的：9402号是以烟酰胺为母体化合物合成的烟酰氨基酸类化合物，其放射增敏作用比母体化合物烟酰胺效果更好，而且毒性更低。为了观察9402号对正常组织是否有增敏作用，我们研究了9402号对小鼠小肠隐窝上皮细胞的增敏作用。材料与方法：实验动物：昆明种小鼠，由中国医学科学院实验动物研究所提供，体重18-22g。许可证号：SCXK京2004—0001。药物：9402号药（N-烟酰基-L-天门冬氨酸），为白色块状晶体，含量大于99％，熔点182～191℃。由中国医学科学院放射医学研究所药物室合成。照射条件：60Coγ射线，全身照射，剂量率81．79cGy／min。给药及实验分组：实验分为单纯照射组，加药照射组和正常对照组。

扁桃体隐窝上皮屏障功能研究进展

目前认为慢性扁桃体炎有3种学说,一是细菌感染,二是自身变态反应,三是免疫功能低下。一般认为发病多由急性扁桃体炎反复发作或隐窝引流不畅,窝内细菌或病毒滋生繁殖而演变为慢性炎症。近年来,国内外研究扁桃体隐窝上皮屏障功能,认为扁桃体隐窝上皮的屏障作用是决定扁桃体能否发生慢性扁桃体炎的重要原因,扁桃体隐窝上皮屏障功能的恢复,在慢性扁桃体炎的治疗中作用尤为重要。隐窝上皮是腭扁桃体中最先接触和摄取抗原,并引起免疫应答的部位,隐窝的特殊结构决定了扁桃体的功能主要是潴留过路的抗原,供免疫系统处置,因此隐窝上皮结构是扁桃体行使免疫功能的重要组织保障。慢性炎症病变使扁桃体隐窝上皮发生进行性破坏,使扁桃体产生的免疫球蛋白减少,因而不能发挥有效的免疫保护作用,所以任何治愈慢性扁桃体炎的保守措施,从组织学上首先必须恢复隐窝上皮的屏障结构。近几年来,有关慢性扁桃体炎的发病机制研究发展迅速,文献检索表明,现在还没有同类方法表明扁桃体隐窝上皮屏障功能改变对慢性扁桃体炎有影响的研究报道。文章就扁桃体隐窝上皮屏障功能作一综述。

参苓白术散通过自噬调节肠隐窝上皮细胞损伤的作用机制

目的探究参苓白术散通过细胞自噬调节脂多糖(LPS)诱导的肠隐窝上皮细胞(IEC-6)损伤的作用与机制。方法 IEC-6细胞分组:空白组、LPS模型组、LPS+参苓白术散含药血清低、中、高(5%、10%、20%)剂量组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(3-MA)、自噬诱导剂雷帕霉素靶蛋白(mTOR)阻断剂雷帕霉素组(Rapamycin)。采用MTT方法检测LPS的细胞毒性、检测参苓白术散含药血清浓度梯度活性;通过ELISA试剂盒测定IEC-6细胞上清液中白介素1β(IL-1β)、白介素8(IL-8)、白介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度;通过RT-PCR法检测ATG5、ATG12、ATG13、ATG16的mRNA水平;使用RFP-GFP-LC3腺病毒转染IEC-6细胞,测定IEC-6细胞自噬体的数目。结果 LPS浓度为100μg·mL-1时,IEC-6细胞抑制率为29.3%,以该浓度进行后续实验;不同浓度参苓白术散含药血清对细胞活力均无明显作用;模型组与空白组比较,促炎因子IL-1β、IL-8和TNF-α浓度上升,抑炎因子IL-10浓度下降,ATG5、ATG13、ATG16L2 mRNA水平上升(均P <0.05),模型组中没有明显的自噬体斑点形成;含药血清组与模型组比较,促炎因子IL-1β、IL-8和TNF-α浓度下降,抑炎因子IL-10浓度上升,ATG5、ATG13、ATG16L2 mRNA水平下降(均P <0.05),ATG12和ATG16L1 mRNA水平无显著性差异(P> 0.05),含药血清组和自噬诱导剂Rapamycin组自噬斑点的形成明显增多;自噬抑制剂3-MA组与模型组比较,自噬体斑点没有差别。结论参苓白术散含药血清能抑制促炎症因子IL-1β、IL-8和TNF-α的释放,增加抑炎症因子IL-10的释放,减轻IEC-6细胞的炎症损伤,这一过程可能与调控自噬相关通路Beclin1有关。

CpG-ODN对辐射所致人小肠隐窝上皮细胞微核形成的影响

研究了CpG-ODN(CpG oligonucleotides)对非免疫细胞人小肠隐窝上皮细胞(HIEC)照射后微核变化的影响。采用MTT法检测不同浓度的CpG-ODN对HIEC的细胞毒性,检测CpG-ODN预处理后的HIEC细胞在不同剂量辐射后微核率和微核细胞率的变化。结果表明,CpG-ODN在0.00-1.25μmol/L浓度范围内对细胞的存活率没有显著影响,CpG-ODN能显著降低微核率和微核细胞率。实验结果提示CpG-ODN对HIEC有较小的毒性且能减少细胞辐照后的微核形成,具有一定的辐射保护作用。

扁桃体及隐窝上皮结构的研究进展

扁桃体结构的主要特点是具有复杂而特殊的隐窝管道网络系统,不仅有分支,而且分支间广泛吻合。隐窝上皮是该器官中最先接触和摄取抗原,并引起免疫应答的部位,隐窝的特殊结构决定了扁桃体的功能主要是潴留过路的抗原,供免疫系统处置,因此隐窝上皮结构是扁桃体行使免疫功能的重要组织保障。

人扁桃体隐窝上皮细胞的分离、原代培养与鉴定

目的:建立高效、稳定的人扁桃体隐窝上皮细胞原代培养方法。方法:收集80例3~5岁儿童手术切除的扁桃体组织,分别采用组织块贴壁法和Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25%胰蛋白酶-EDTA消化法提取扁桃体隐窝上皮细胞并比较两种方法的提取效果;应用无血清角化细胞培养基进行细胞纯化及原代培养;用相差显微镜观察细胞形态和生长特点、免疫细胞化学染色及免疫荧光技术鉴定细胞来源。结果:Ⅱ型中性蛋白酶联合消化法在分离扁桃体隐窝上皮细胞成功率、细胞密度以及细胞融合时间方面均高于组织块贴壁法(P<0.05),细胞接种后第2天开始贴壁,外观呈现多边形,岛状生长,培养12 d左右,细胞连成单层,呈现铺路石样生长。免疫细胞化学染色显示广谱角蛋白表达阳性,波形蛋白阴性;免疫荧光鉴定角蛋白8/18染色阳性。结论:应用Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25%胰蛋白酶-EDTA消化法以及无血清角化细胞培养基可建立高效稳定的人扁桃体隐窝上皮细胞原代分离方法和体外培养体系。

参苓白术散含药血清抗脂多糖(LPS)诱导的肠隐窝上皮细胞 (IEC-6)通透性变化机制的研究

目的:探讨参苓白术散抗脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导肠上皮隐窝细胞(intestinal crypt cel ls,IEC-6)通透性变化的机制研究。方法:将IEC-6细胞分为空白组、LPS模型组、LPS+参苓白术散含药血清低、中、高剂量组、10%FBS。对以下指标进行检测:IEC-6细胞凋亡、细胞内钙离子浓度、IEC-6电阻值变化、检测各组中磷酸化Rho激酶(ROCKⅡ)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)以及凋亡因子Caspase-3表达。结果:LPS显著引起IEC-6细胞凋亡而参岺白术散的含药血清明显抑制细胞凋亡。与空白组比较,模型组IEC-6细胞跨膜电阻的TEER值显著下降(P<0.01);与LPS模型组比较,参苓白术散含药血清低、中、高剂量组IEC-6细胞跨膜电阻的TEER值显著升高,实验结果具有统计学意义(P<0.01)。LPS模型组的钙离子浓度明显高于空白组(P<0.01);不同浓度的参苓白术散含药血清组的钙离子浓度明显低于LPS模型组(P<0.01)。与空白组比较,模型组中磷酸化ROCKⅡ、MLCK蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,不同剂量参苓白术散含药血清组中磷酸化ROCKⅡ、MLCK蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:参苓白术散含药血清对LPS诱导的IEC-6细胞损伤具有明显地抑制作用,与抑制细胞凋亡及IEC-6细胞通透性的改善有关。

醋制降低京大戟对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6毒性研究

目的:比较京大戟醋制前后对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6的毒性差异,初步探讨京大戟醋制减毒机制。方法:以大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6为研究对象,采用MTT法检测京大戟醋制前后对IEC-6细胞活性的影响,采用倒置显微镜观察醋制前后对细胞形态的影响;采用高内涵细胞成像系统(HCS)分析醋制降低肠细胞线粒体凋亡通路。结果:与阴性对照组比较,增殖抑制实验显示京大戟生品具有较强的肠细胞毒性(P<0.01),HCS分析结果显示京大戟可显著降低细胞核Hoechst荧光强度、线粒体膜电位荧光强度(P<0.05,P<0.01),并显著增加Annexin V-FITC和PI荧光强度、细胞膜通透性荧光强度(P<0.01,P<0.01,P<0.01);醋制后与京大戟生品各剂量组比较,京大戟醋品可显著降低京大戟生品对肠细胞的增殖抑制作用,增加细胞核Hoechst荧光强度、线粒体膜电位荧光强度(P<0.05,P<0.05),降低Annexin V-FITC和PI荧光强度、细胞膜通透性荧光强度(P<0.01,P<0.01,P<0.05),且呈一定的剂量相关性。结论:醋制可降低京大戟对肠细胞的毒性,其可能机制为通过降低京大戟对IEC-6细胞膜通透性,从而为进一步阐明京大戟醋制减毒机制提供了一定的依据。

肠隐窝上皮细胞Myd88稳定沉默体外模型的建立及早期凋亡研究

肠道炎症性疾病临床常见,发病率逐年上升而病因不清。现已证实Toll样受体4(TLR4)信号通路与肠道炎性疾病密切相关。髓样分化蛋白88(Myd88)是TLR4炎症信号通路上游关键调控点,对肠道炎性疾病的研究具有重要价值,但目前尚缺乏Myd88稳定调控表达的体外模型。本实验利用慢病毒三质粒包装系统,构建特异靶向Myd88基因RNA干扰(RNAi)病毒载体。采用改良病毒离心法结合离心孵育法(MVC-S)行肠隐窝上皮细胞(IEC-6)转导,采用Real-time PCR及Western blot检测Myd88mRNA及蛋白水平,Annexin V染色、流式细胞术检测Myd88沉默后对IEC-6细胞早期凋亡影响。结果显示正确构建的慢病毒shRNA载体,可通过改良MVC-S法成功转导IEC-6细胞,转导后的IEC-6细胞Myd88表达明显下调,同时早期凋亡减少。本实验成功构建了慢病毒载体介导的RNAi的Myd88稳定沉默细胞系,并总结分享了实验中的关键技术条件及要点,同时描述了沉默Myd88后IEC-6细胞早期凋亡明显减少的特征,为肠道炎性疾病的发病机制及靶向治疗研究提供了一个新的、稳定的、可重复的细胞模型。

慢性扁桃体炎患儿扁桃体抗隐窝上皮角蛋白的免疫组化观察

目的 :探讨慢性扁桃体炎患儿扁桃体隐窝上皮的变化。方法 :将摘除的 2 30例扁桃体均以 10 %福尔马林固定 ,常规石蜡包埋切片 ,HE染色 ,并行抗隐窝上皮角质蛋白 (CK)免疫组化检测 ,观察小儿慢性扁桃体炎症变化。结果 :2 30例扁桃体隐窝上皮明显角化 2 0 9例 (90 .9% ) ,未见角化 2 1例 (9.1% ) ;3例隐窝底部有霉菌菌丝和细菌 ;扁桃体隐窝上皮抗广谱和高分子 CK均呈阳性反应 ,全组隐窝内角化物抗广谱 CK亦均呈阳性反应。结论 :小儿扁桃体每次炎症病变 ,都使扁桃体上皮进行性破坏 ,扁桃体产生免疫球蛋白的物质减少 ,因而不能有效发挥保护作用 ,而细菌、病毒等物质却可顺利通过化生性上皮向上皮下侵犯 ,这种周而复始的恶性循环 。

参苓白术散通过自噬调节脂多糖诱导的肠隐窝上皮细胞通透性变化

目的:探究参苓白术散通过细胞自噬调节脂多糖(LPS)诱导的肠隐窝上皮细胞(IEC-6)通透性变化研究。方法:细胞分组:空白组、LPS(100μg/ml)模型组、LPS+参苓白术散1 g/kg含药血清5%、10%、20%剂量组、胎牛血清(FBS)组及各阻断剂组。Western blotting检测LC3-II/LC3-I、p62、p-Akt、p-4Ebp1、p-p70s6k、p-Ulk1及磷酸化与非磷酸化mTOR蛋白的表达量;罗丹明-鬼笔染色法检测骨架蛋白F-actin的分布;电阻仪检测细胞电阻值。结果:模型组与空白组比较,LC3-II/LC3-I蛋白比值明显降低,信号通路蛋白mTOR、pho-mTOR、p-4Ebp1表达量上调,p-p70s6k、p-Ulk1表达下调,P-P62/P62、P-AKT/AKT比值升高。肌动蛋白丝出现紊乱、拉长,且F-actin量明显变少,TEER值明显下降;与模型组比较,参苓白术散各含药血清组LC3-II/LC3-I蛋白比值明显升高。信号通路相关蛋白mTOR、pho-mTOR、p-4Ebp1表达明显下调,p-p70s6k、p-Ulk1蛋白表达量明显上调,P-P62/P62、P-AKT/AKT比值明显降低,F-actin排列紧密,蛋白量明显增多,TEER值明显增加。结论:参苓白术散1 g/kg含药血清组能通过调控自噬相关通路促进IEC-6细胞自噬蛋白表达,同时改变IEC-6细胞骨架蛋白F-actin,减小细胞通透性,而这一过程与调控自噬相关通路PI3K/AKT/mTOR有关。

依达拉奉对氧剥夺引起的大鼠肠隐窝上皮细胞损伤的保护效应研究

[目的]研究依达拉奉对氧剥夺导致的IEC-6细胞株损伤的保护效应。[方法]将预先培养好的细胞分为3组:正常组(N组),氧剥夺组(OGD,IR组)和依达拉奉治疗组(OGD+依达拉奉,E组)。本研究中所用氧剥夺模型是将细胞株换无糖无血清的培养基后放入含5%CO2和95%N2的密闭培养箱中2 h,后重新复氧复糖。在复氧复糖的同时,将依达拉奉盐溶液(10 mg/mL)加入细胞培养基中。在复氧复糖2 h,收集细胞用DHE荧光探针进行氧自由基(ROS)测定;伤后12 h,富集细胞用于超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的测定;伤后24 h收集细胞,用流式细胞仪测定细胞凋亡和Alamar Blue测定细胞活力。[结果]DHE荧光探针结果显示OGD导致的ROS,E组比IR组减少;OGD刺激后,IEC-6细胞内的MDA浓度上升为(1.52±0.21)mmol/mg,而E组的含量为(1.21±0.16)mmol/mg,P<0.05。OGD后,IEC-6细胞内的SOD活力下降至(7.35±0.84)U/mg,而E组的SOD活力为(8.25±1.12)U/mg,P<0.05。OGD后细胞活力下降为0.48±0.081,而E组的细胞活力为0.56±0.049,P<0.01。同时,流式细胞仪的结果显示,依达拉奉抑制了OGD导致的细胞过度凋亡。[结论]依达拉奉可以减轻OGD造成的IEC-6细胞的损伤。

角质细胞生长因子联合低氧诱导因子1α对低氧应激大鼠小肠隐窝上皮细胞的保护作用及其机制

目的探讨角质细胞生长因子(KGF)联合低氧诱导因子1α(HIF-1α)对低氧应激大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)的保护作用及其机制。方法(1)取常规培养大鼠IEC-6细胞,根据随机数字表法分为常氧空白组、常氧KGF组、常氧HIF-1α组和常氧联合组,分别更换DMEM培养基、含0.5ng/mLKGF培养基、含10.0ng/mLHIF-1α培养基及同时含0.5ng/mLKGF和30.0ng/mLHIF-1α培养基,放入氧气体积分数为21%的细胞培养箱培养24h。(2)另取常规培养大鼠IEC-6细胞,根据随机数字表法分为常氧对照组、低氧对照组、低氧KGF组、低氧HIF-1α组及低氧联合组。常氧对照组细胞更换DMEM培养基,并常规培养24h;低氧对照组、低氧KGF组、低氧HIF-1α组及低氧联合组细胞分别更换DMEM培养基、含0.5ng/mLKGF培养基、含10.0ng/mLHIF-1α培养基及同时含0.5ng/mLKGF和30.0ng/mLHIF-1α培养基,并置于氧气体积分数为5%的三气培养箱中低氧培养24h。取常氧及低氧处理各组细胞,样本数为3,光学显微镜下观察细胞形态学变化。取常氧及低氧处理各组细胞,样本数为3,细胞计数试剂盒8检测细胞存活率。取常氧对照及低氧处理各组细胞,样本数为3,流式细胞仪检测细胞周期变化及凋亡水平,紫外分光光度计和蛋白质印迹法分别检测细胞ATP含量和p53蛋白表达水平。对数据行单因素方差分析及LSD检验。结果(1)培养24h后,常氧处理各组细胞均生长良好,细胞呈圆形或椭圆形,胞质清晰;低氧处理各组细胞均出现梭形、星形等不规则形态,胞质有黑色颗粒沉着。(2)培养24h后,常氧空白组、常氧KGF组、常氧HIF-1α组及常氧联合组细胞存活率分别为(107.4±8.7)%、(109.8±2.9)%、(115.8±7.4)%、(112.8±10.6)%,组间总体比较,差异无统计学意义(F=0.685,P=0.586)。培养24h后,低氧对照组、低氧KGF组、低氧HIF-1α组及低氧联合组细胞存活率分别为(35.1±4.6)%、(52.9±6.8)%、(56.2±3.1)%、(71.2±9.6)%,均显著低于常氧对照组的(106.3±12.3)%,P<0.001。低氧KGF组、低氧HIF-1α组及低氧联合组细胞存活率均明显高于低氧对照组(P=0.023、0.009、<0.001),低氧联合组细胞存活率明显高于低氧KGF组和低氧HIF-1α组(P=0.017、0.045)。(3)培养24h后,低氧对照组G1期细胞百分比显著高于常氧对照组(P=0.030),低氧对照组、低氧KGF组、低氧HIF-1α组S期细胞百分比显著低于常氧对照组(P=0.020、0.031、0.026),其余各组各期细胞百分比与常氧对照组相近(P=0.516、0.107、0.052、0.985、0.637、0.465、0.314、0.591)。培养24h后,低氧对照组、低氧KGF组及低氧HIF-1α组G1期细胞百分比明显高于低氧联合组(P=0.001、0.030、0.014),且S期细胞百分比显著低于低氧联合组(P=0.001、0.012、0.010)。(4)培养24h后,与常氧对照组比较,低氧对照组细胞凋亡率明显升高(P=0.018),低氧联合组细胞凋亡率明显降低(P=0.008)。培养24h后,与低氧对照组比较,低氧KGF组和低氧联合组细胞凋亡率明显降低(P=0.004、0.001);低氧联合组细胞凋亡率明显低于低氧KGF组和低氧HIF-1α组(P=0.032、0.002)。(5)培养24h后,与常氧对照组比较,低氧联合组细胞ATP含量无明显变化(P=0.209),其余各组细胞ATP含量均明显降低(P=<0.001、0.001、0.002);与低氧对照组比较,低氧HIF-1α组和低氧联合组细胞ATP含量明显升高(P=0.044、0.001);低氧联合组细胞ATP含量明显高于低氧KGF组和低氧HIF-1α组(P=0.011、0.020)。(6)培养24h后,与常氧对照组比较,低氧对照组、低氧KGF组、低氧HIF-1α组细胞p53蛋白表达量明显升高(P<0.001),低氧联合组细胞p53蛋白表达量显著低于低氧对照组、低氧KGF组和低氧HIF-1α组(P=0.001、0.001、0.002)。结论KGF联合HIF-1α对低氧应激大鼠IEC-6细胞具有显著的保护作用,可通过降低其细胞周期阻滞程度及凋亡水平,提高细胞的能量代谢水平,从而促进低氧环境下细胞的存活。

黄连素对大鼠结肠隐窝细胞钾通道的影响

目的:探讨黄连素对结肠上皮隐窝细胞基底膜cAMP依赖的钾通道[IK(cAMP)]的影响,以研究其治疗分泌性腹泻的机制.方法:用EDTA溶液分离结肠上皮隐窝细胞,以-60mV为钳制电压钳制细胞,20mV为阶跃,用EPC10膜片钳放大器测量全细胞模式下50、100、500μmol/L的黄连素对结肠上皮细胞基底膜IK(cAMP)的影响.结果:50、100、500μmol/L的黄连素可显著抑制大鼠结肠上皮隐窝细胞基底膜IK(cAMP)(P<0.05),且抑制效应具有浓度依赖性.当阶跃刺激为+80mV时,其IK(cAMP)分别为生理盐水对照组的78.55%±5.72%,60.42%±6.33%,43.78%±6.47%(P<0.05).结论:黄连素能抑制大鼠结肠隐窝细胞基底膜cAMP依赖的钾通道开放,这可能是其治疗分泌性腹泻的机制之一.

白术内酯Ⅲ介导的肌动蛋白相关蛋白2/3抑制肠上皮间质转化以缓解溃疡性结肠炎的研究

目的:探寻白术内酯Ⅲ(AT-Ⅲ)的关键靶点,探究肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)抑制溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:采用有限酶切-质谱法(lip-SMap)筛选大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)特征蛋白,进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,确定AT-Ⅲ的关键靶点。脂多糖(LPS)与IEC-6共孵育模拟UC模型,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;划痕实验测定IEC-6迁移速率;蛋白质印迹法测定上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Arp2/3含量;分子对接评估AT-Ⅲ与关键靶点的结合能力。结果:基于lip-SMap获得的特征蛋白参与调控磷脂酰肌醇3激酶-丝苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号通路和紧密连接(TJ)信号通路;与对照组比较,LPS组中IL-6和TNF-α释放量升高(均P<0.05),迁移速率变快(P<0.05),E-cadherin和Vimentin的表达都有不同程度的影响(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+CK666+AT-Ⅲ组显著降低IL-6和TNF-α含量(均P<0.01),有效逆转LPS诱导的细胞迁移变化及E-cadherin和Vimentin表达(均P<0.05);分子对接显示,Arp2/3与AT-Ⅲ有较好的结合活性。结论:Arp2/3作为AT-Ⅲ的关键靶点,可通过上皮细胞-间充质转化(EMT)缓解LPS诱导的UC。

桃叶珊瑚苷修复辐射诱导的小肠上皮细胞损伤

目的本研究旨在探讨桃叶珊瑚苷(Aucubin)对辐射性肠损伤(RIII)的保护作用。方法我们将大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)分为对照组、辐射损伤组和辐射损伤+治疗组,后两组经受10Gy X射线照射以构建RIII的体外模型,其中对照组和辐射损伤组加入正常培养基,而辐射损伤+治疗组则加入桃叶珊瑚苷。采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)方法来确定桃叶珊瑚苷的最佳有效浓度。比色法被用来检测各组细胞培养基中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的活性,同时采用ELISA试剂盒来测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白介素66(IL-6)以及白介素10(IL-10)的表达水平。流式细胞技术用于检测细胞凋亡。结果桃叶珊瑚苷的最佳剂量为1.0μmol/L。与对照组和辐射损伤组相比,经过桃叶珊瑚苷干预后,辐射损伤+治疗组的过氧化指标MDA、促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平,以及细胞凋亡水平显著降低(P<0.05),而抗氧化指标SOD、CAT和Gpx、抗炎因子IL-10以及细胞凋亡水平显著提高(P<0.05)。结论桃叶珊瑚苷可能通过抑制氧化应激、炎症反应以及细胞凋亡修复辐射损伤的小肠隐窝上皮细胞,这为辐射防护提供了有前途的药物。

小檗碱对大鼠结肠上皮细胞钙依赖钾通道的影响

目的研究小檗碱对结肠上皮隐窝细胞基底膜钙依赖钾通道(IK(Ca))的影响,以探讨其治疗分泌性腹泻的机制。方法用EDTA溶液分离结肠上皮隐窝细胞,运用EPC10膜片钳放大器测量全细胞模式下50、100、500μmol/L的小檗碱对结肠上皮细胞基底膜IK(Ca)的影响。结果50、100、500μmol/L的小檗碱均可抑制大鼠结肠上皮隐窝细胞基底膜IK(Ca)(P<0.05),当阶跃刺激为+80 mV时,其IK(Ca)分别为生理盐水(PSS)对照组的(71.43±3.61)%、(54.56±5.13)%、(38.66±3.85)%(n=8,P<0.05)。结论小檗碱能抑制大鼠结肠上皮细胞基底膜钙依赖钾通道的开放,这可能是其治疗分泌性腹泻的机制之一。