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隐花色素CRY2基因片段克隆及RNAi植物表达载体的构建 被引量:5
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作者 周波 孙梅 +1 位作者 阎淑滑 李玉花 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第6期1182-1186,共5页
隐花色素是植物向光反应的主要的光受体,介导蓝光/近紫外光调控的反应。在拟南芥中CRY2调节去黄化反应并控制开化时间。我们根据在GenBank中已经发表的拟南芥(NM_100320)、中国大白菜(AY176689)、油菜(AJ889779)CRY2基因的cDNA保守序列... 隐花色素是植物向光反应的主要的光受体,介导蓝光/近紫外光调控的反应。在拟南芥中CRY2调节去黄化反应并控制开化时间。我们根据在GenBank中已经发表的拟南芥(NM_100320)、中国大白菜(AY176689)、油菜(AJ889779)CRY2基因的cDNA保守序列设计并合成同源引物。通过RT-PCR方法从"津田"芜菁(Brassica rapa L.subsp.rapa"Tsuda")总RNA中扩增出CRY2基因的cDNA部分片段,采用gateway技术中的BP反应将其克隆到pDONR221中。测序表明,该片段与拟南芥具有87%的同源性,与油菜和中国大白菜的同源性达97%以上。采用gateway技术中的LR反应,以植物表达载体pH7GWIWG2(I)为基础,构建了由组成型启动子35S调控的CRY2基因的ihpRNAi植物表达载体。 展开更多
关键词 隐花色素cry2基因 RNAI 植物表达载体
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大豆隐花色素CRY2基因表达对马铃薯抗逆性的影响 被引量:3
2
作者 张丽 吴英英 +4 位作者 刘斌 巩檑 甘晓燕 宋玉霞 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第8期2472-2479,共8页
隐花色素相关基因对植物发育过程起着重要的调控作用,是改良作物农艺性状及抗逆性等性状的基因资源。基于已建立的马铃薯遗传转化体系,将携带大豆隐花色素CRY2基因植物表达载体(pearlygate104-Glyma.10G180600, pearlygate104-Glyma.20G... 隐花色素相关基因对植物发育过程起着重要的调控作用,是改良作物农艺性状及抗逆性等性状的基因资源。基于已建立的马铃薯遗传转化体系,将携带大豆隐花色素CRY2基因植物表达载体(pearlygate104-Glyma.10G180600, pearlygate104-Glyma.20G209900)转化马铃薯栽培种‘大西洋’,经PCR、RT-PCR检测获得阳性株系25个,研究三种不同光照周期(长日照,中日照,短日照)和旱、盐胁迫处理对转基因株系生长的影响。结果表明,随着光照时间的增加,转基因株系株高显著降低,叶片数量、叶面积、茎粗均显著增加,与对照相比,外源大豆隐花色素基因CRY2的表达提高了马铃薯对光信号的反应能力;以10%PEG和120 mmol/L NaCl分别模拟旱、盐处理,获得了株高、根长等生长指标显著优于对照的转基因株系,脯氨酸、丙二醛等生理检测结果进一步验证了隐花色素基因CRY2能够显著提高马铃薯的抗逆性。研究结果为利用基因工程技术培育马铃薯抗逆种质材料提供了重要理论指导与技术支撑。 展开更多
关键词 马铃薯 大豆花色素基因 抗逆性
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水稻隐花色素基因Cry1a/Cry2/Cry1b RNAi表达载体构建及遗传转化研究
3
作者 李毓 戴飞 +3 位作者 王乃元 杨小飞 庄伟建 仇秀丽 《热带作物学报》 CSCD 2011年第10期1843-1848,共6页
构建一个包含3个水稻隐花色素基因片段的RNAi表达载体pSC1301-347-Cry1aCry2Cry1b并转化水稻,以期导致Cry1a、Cry1b与Cry2集体沉默,观察它们对水稻重要农艺性状的影响。结果表明,转基因水稻开花期显著延迟,结实率骤降,株高增加,剑叶变短... 构建一个包含3个水稻隐花色素基因片段的RNAi表达载体pSC1301-347-Cry1aCry2Cry1b并转化水稻,以期导致Cry1a、Cry1b与Cry2集体沉默,观察它们对水稻重要农艺性状的影响。结果表明,转基因水稻开花期显著延迟,结实率骤降,株高增加,剑叶变短,谷粒变长、变宽;而剑叶宽、穗长与对照无显著差异。 展开更多
关键词 水稻 花色素基因 RNAI 载体构建 遗传转化
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二化螟隐花色素基因cryptochrome1和cryptochrome2的克隆与表达谱分析
4
作者 刘苏 张胜利 《安徽科技学院学报》 2014年第5期29-33,共5页
隐花色素基因(cryptochrome,简称cry)是一类生物钟基因,参与生物体昼夜节律调控。本实验克隆了二化螟2个隐花色素基因,分别命名为Cs-cry1和Cs-cry2(Genbank登录号分别为HG780135和KF977409),其分别包含1605 bp和2289 bp的开放阅读框,分... 隐花色素基因(cryptochrome,简称cry)是一类生物钟基因,参与生物体昼夜节律调控。本实验克隆了二化螟2个隐花色素基因,分别命名为Cs-cry1和Cs-cry2(Genbank登录号分别为HG780135和KF977409),其分别包含1605 bp和2289 bp的开放阅读框,分别编码由534和762个氨基酸组成的蛋白;Cs-cry1与其它鳞翅目昆虫cry1的相似性较高,而Cs-cry2与其它鳞翅目昆虫cry2的相似性较高,这与系统进化分析结果相一致;半定量RT-PCR研究表明Cs-cry1和Cs-cry2基因在二化螟成虫触角、头、雄、腹、足和翅等不同组织中均有表达。实验结果为二化螟昼夜节律分子机制研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 二化螟 花色素 生物钟基因 分子克隆 组织分布
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茶树隐花色素基因CsCRY1和CsCRY2的克隆及表达模式分析 被引量:3
5
作者 唐千惠 王佳欣 +2 位作者 孙康 曾亮 吴致君 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期11-22,共12页
通过同源比对茶树〔Camellia sinensis(Linn.)Kuntze〕基因组和转录组数据,获得2个茶树隐花色素(CRY)基因。利用PCR克隆技术,从茶树品种‘福鼎大白茶’(‘Fuding Dabaicha’)中克隆得到这2个隐花色素基因,分别命名为CsCRY1和CsCRY2。采... 通过同源比对茶树〔Camellia sinensis(Linn.)Kuntze〕基因组和转录组数据,获得2个茶树隐花色素(CRY)基因。利用PCR克隆技术,从茶树品种‘福鼎大白茶’(‘Fuding Dabaicha’)中克隆得到这2个隐花色素基因,分别命名为CsCRY1和CsCRY2。采用生物信息学方法,对茶树CsCRY1和CsCRY2基因编码蛋白的结构域、系统进化关系、二级结构和PHR结构域的三级结构进行分析,对CsCRY1和CsCRY2基因的启动子顺式作用元件及其功能进行了预测分析。结果显示:茶树CsCRY1基因开放阅读框长度为2055 bp,编码684个氨基酸;CsCRY2基因开放阅读框长度为1944 bp,编码647个氨基酸;CsCRY1和CsCRY2蛋白均在N端含有保守的PHR结构域,在C端含有保守的CCE结构域,这2个结构域在拟南芥〔Arabidopsis thaliana(Linn.)Heynh.〕中具有传导蓝光信号的功能。系统进化分析结果显示:CsCRY1和CsCRY2蛋白属于Plant CRY类隐花色素,其进化树分支距离与同目(杜鹃花目)植物滇山茶(Camellia reticulata Lindl.)和中华猕猴桃(Actinidia chinensis Planch.)较近,与单子叶植物距离较远。CsCRY1和CsCRY2基因的启动子顺式作用元件与光照和激素条件密切相关。实时荧光定量PCR分析结果显示:茶树根中CsCRY1和CsCRY2基因的相对表达水平最高,其后依次为叶、花、茎;蓝光能显著诱导CsCRY1和CsCRY2基因上调表达;0.1 mmol·L^-1脱落酸(ABA)以及1.0 mmol·L^-1吲哚乙酸(IAA)、茉莉酸甲酯(MeJA)和赤霉素(GA3)均能刺激CsCRY1和CsCRY2基因上调表达。研究结果显示:茶树CsCRY1和CsCRY2基因可能在组织发育、蓝光信号传导和激素调控中发挥重要作用。 展开更多
关键词 茶树 花色素 CsCRY1基因 Cscry2基因 表达模式
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山羊隐花色素2基因真核表达载体的构建及生物信息学分析
6
作者 马白荣 张海森 +3 位作者 高登科 李超 靳亚平 陈华涛 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第5期1-9,共9页
为了构建山羊隐花色素2(CRY 2)基因的真核表达载体,分析CRY2蛋白的基本特性,本试验采用逆转录PCR扩增山羊CRY 2基因的编码序列(CDS),并以同源重组的方式将其连接至pcDNA3.1-Puro-N-3HA载体,获得pcDNA3.1-3HA-gCRY2重组质粒。酶切和测序... 为了构建山羊隐花色素2(CRY 2)基因的真核表达载体,分析CRY2蛋白的基本特性,本试验采用逆转录PCR扩增山羊CRY 2基因的编码序列(CDS),并以同源重组的方式将其连接至pcDNA3.1-Puro-N-3HA载体,获得pcDNA3.1-3HA-gCRY2重组质粒。酶切和测序鉴定后将重组质粒转染至HEK293T细胞,采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测山羊CRY 2基因在mRNA和蛋白水平的表达变化;同时利用生物信息学软件对CRY2蛋白的基本理化性质和功能进行预测和分析。结果显示:pcDNA3.1-3HA-gCRY2重组质粒的酶切和测序结果与预期一致;转染HEK293T细胞后,pcDNA3.1-3HA-gCRY2转染组CRY 2 mRNA的相对表达量比pcDNA3.1-Puro-N-3HA转染组高600倍左右(P<0.001),CRY2蛋白成功表达;山羊、小鼠和人等哺乳动物CRY 2基因CDS区具有较高的相似性;CRY2蛋白不存在信号肽和跨膜区,预测显示其可能与ARNTL、CLOCK、PER1和PER2等蛋白互作。结果表明,本试验成功构建了山羊CRY 2基因的真核表达载体,并预测分析了山羊CRY2蛋白的基本理化特性,为探究山羊CRY 2基因及其编码蛋白的生物学功能提供了科学依据。 展开更多
关键词 山羊 花色素2 昼夜节律 载体构建 生物信息学
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抑制水稻隐花色素基因OsCRY1a表达对水稻农艺性状的影响 被引量:3
7
作者 李毓 庄伟建 +2 位作者 王乃元 洪国琴 戴飞 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期575-579,共5页
利用已公布的OsCRY1a基因的序列设计引物,扩增部分基因片段,构建RNAi植物表达载体并转化水稻,导致该基因表达水平下降和功能缺失。根据转基因植株重要农艺性状的表现,分析该基因的功能。结果表明,抑制OsCRY1a基因的表达,水稻开花期推迟1... 利用已公布的OsCRY1a基因的序列设计引物,扩增部分基因片段,构建RNAi植物表达载体并转化水稻,导致该基因表达水平下降和功能缺失。根据转基因植株重要农艺性状的表现,分析该基因的功能。结果表明,抑制OsCRY1a基因的表达,水稻开花期推迟16d,株高和粒长明显增加,而其他重要农艺性状如剑叶长、宽和穗长等无明显变化。 展开更多
关键词 水稻 花色素基因 OsCRY1a 农艺性状 基因表达
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干扰隐花色素Cry1a与Cry1b基因的表达对水稻若干农艺性状的影响 被引量:1
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作者 李毓 庄伟建 +2 位作者 庄春红 王乃元 戴飞 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2012年第2期153-158,共6页
利用已公布的水稻Cry1a与Cry1b基因序列设计引物,PCR扩增基因部分片段,构建了一个包含2个隐花色素基因片段的ihpRNA表达载体pSC1301-347-Cry1aCry1b,并通过农杆菌介导转化水稻,以期同时导致这2个基因功能缺失.根据转基因植株主要农艺性... 利用已公布的水稻Cry1a与Cry1b基因序列设计引物,PCR扩增基因部分片段,构建了一个包含2个隐花色素基因片段的ihpRNA表达载体pSC1301-347-Cry1aCry1b,并通过农杆菌介导转化水稻,以期同时导致这2个基因功能缺失.根据转基因植株主要农艺性状的表现,初步分析了Cry1a与Cry1b对水稻重要农艺性状的影响.结果表明,转基因水稻开花期推迟16 d,株高增加明显,粒型显著变长,而其他所观察的性状无明显改变. 展开更多
关键词 水稻 花色素 Cry1a/Cry1b基因 ihpRNA 农艺性状
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生物钟基因隐花色素-1与精神分裂症核心家系的单体型相对风险分析
9
作者 彭子文 陈晓岗 +2 位作者 唐劲松 徐西嘉 谭立文 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期476-477,共2页
目的探讨精神分裂症与生物钟基因隐花色素-1(Cryptochrome-1,Cry1)的关系。方法检测100个精神分裂症核心家系的Cry1基因上的rs2300448-rs1921135和rs1056560三个多态性位点,并进行单体型相对风险分析(HHRR)。结果HHRR结果显示,rs230044... 目的探讨精神分裂症与生物钟基因隐花色素-1(Cryptochrome-1,Cry1)的关系。方法检测100个精神分裂症核心家系的Cry1基因上的rs2300448-rs1921135和rs1056560三个多态性位点,并进行单体型相对风险分析(HHRR)。结果HHRR结果显示,rs2300448多态性由父母传递给患病子女的等位基因(G/A)频率差异有统计学意义(P<0.05),等位基因G优先传递给患病子女;而rs1056560和rs1921135的等位基因传递频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论Cry1基因可能与中国汉族精神分裂症相关联。 展开更多
关键词 精神分裂症 花色素-1 基因 单体型相对风险分析
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马铃薯块茎花色素苷合成相关R2R3 MYB蛋白基因的克隆和功能分析 被引量:9
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作者 谈欢 刘玉汇 +3 位作者 李丽霞 王丽 李元铭 张俊莲 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1021-1031,共11页
植物花色素苷的合成代谢受转录因子的调控,其中R2R3 MYB为最主要的转录调控因子。本研究以彩色四倍体马铃薯为试材,克隆了R2R3 MYB基因家族里调控马铃薯块茎花色素苷合成R2R3 MYB-St AN1的3个同源基因,并利用生物信息学分析、稳定烟草... 植物花色素苷的合成代谢受转录因子的调控,其中R2R3 MYB为最主要的转录调控因子。本研究以彩色四倍体马铃薯为试材,克隆了R2R3 MYB基因家族里调控马铃薯块茎花色素苷合成R2R3 MYB-St AN1的3个同源基因,并利用生物信息学分析、稳定烟草遗传转化、q PCR等方法对这3个同源基因的结构和功能进行分析和鉴定,结果表明,这3个同源基因均含有R2和R3保守结构域,其主要差别在于C端由10个氨基酸序列组成的重复结构(R)数目不同,根据R数目将其分别命名为St AN1-R0、St AN1-R1和St AN1-R3,其蛋白分子量分别为28 047.91、29 458.35和31 527.60 Da,等电点(p I)分别为6.14、6.90和8.39,均为亲水蛋白。通过转化烟草发现,转入St AN1-R0、St AN1-R1和St AN1-R3后,烟草叶片叶色变化明显,其中转St AN1-R1烟草叶色呈深红色,其叶片花色素苷含量最高。进一步利用q PCR分析表明,外源St AN1使烟草叶片花色素苷合成代谢途径的关键基因(Nt CHS、Nt CHI、Nt F3H、Nt F3’H、Nt DFR、Nt ANS、Nt UFGT)上调表达,同时烟草内源Ntb HLH基因的表达显著上升;St AN1-R1可以高效地调控烟草内源Ntb HLH基因和结构基因Nt DFR和Nt ANS的表达。结果表明,St AN1的3个同源蛋白均可以调控花色素苷的合成,而只含一个重复序列R的St AN1调控花色素苷合成的能力最强。 展开更多
关键词 马铃薯 花色素 R2R3 MYB 基因克隆 生物信息学分析 烟草转化 基因表达分析
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雨生红球藻植物类型隐花色素基因克隆与序列分析 被引量:1
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作者 杭伟 张宏江 +5 位作者 马浩天 王晓丹 许文鑫 赵春超 李润植 崔红利 《山西农业科学》 2020年第5期677-682,共6页
为了从雨生红球藻中获得感知蓝光信号的植物类型隐花色素(CRY)序列,采用同源克隆和RACE相结合的方法获得了雨生红球藻编码植物类型Hae-P-CRY的cDNA全长,并对其序列进行生物信息学分析。结果表明,Hae-P-CRY基因的cDNA全长为3608 bp,包含... 为了从雨生红球藻中获得感知蓝光信号的植物类型隐花色素(CRY)序列,采用同源克隆和RACE相结合的方法获得了雨生红球藻编码植物类型Hae-P-CRY的cDNA全长,并对其序列进行生物信息学分析。结果表明,Hae-P-CRY基因的cDNA全长为3608 bp,包含开放阅读框全长2988 bp,编码995个氨基酸,预测等电点6.19,理论分子质量为107.7 ku。经Blast P分析发现,Hae-P-CRY氨基酸序列与莱茵衣藻来源植物类型CreCRY氨基酸序列的相似性达到66.6%,与拟南芥CRY氨基酸序列相似性为46.94%。系统进化分析表明,Hae-P-CRY与其他真核绿藻来源的植物型CRY聚在一支,属于植物类型CRY。结构域分析表明,Hae-P-CRY基因含有光感知PHR结构域和信号转导CCT结构域,暗示具有感知和转导光信号功能。试验从雨生红球藻得到植物类型Hae-P-CRY基因序列,可为其表达、功能及互作蛋白研究奠定基础,同时为进一步解析雨生红球藻在蓝光响应中的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 雨生红球藻 花色素 基因克隆 生物信息学分析
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杉木ClCRY2基因克隆及表达特性分析
12
作者 郭胜周 廖文海 +3 位作者 李婧姝 邓煜钊 曹光球 曹世江 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第3期620-627,共8页
【目的】通过克隆杉木隐花色素CRY2基因,研究其在不同组织和不同光质处理下的表达特性,为探索CRY2基因在杉木生长发育过程中的调控作用提供参考。【方法】以1 a生杉木优良无性系061扦插苗为试验材料,基于课题组杉木全长转录组测序的结果... 【目的】通过克隆杉木隐花色素CRY2基因,研究其在不同组织和不同光质处理下的表达特性,为探索CRY2基因在杉木生长发育过程中的调控作用提供参考。【方法】以1 a生杉木优良无性系061扦插苗为试验材料,基于课题组杉木全长转录组测序的结果,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,设计基因特异性引物,从无性系杉木苗嫩叶中克隆CRY2基因,命名为ClCRY2(登录号为PP400318)。对其进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR技术分析其表达情况。【结果】生物信息学分析结果显示,杉木的ClCRY2基因CDs区全长2 151 bp,共编码716个氨基酸,与拟南芥中AtCRY2蛋白序列的同源一致性为68.93%。进化树分析发现ClCRY2蛋白与日本柳杉(Cryptomeria japonica)CjCRY2的亲缘性最近。ClCRY2蛋白二级结构主要以无规则卷曲(random curls)和α-螺旋(alpha helix)为主,分别为51.26%和34.78%。ClCRY2蛋白分子式为C3 620H5 573N1 033O1 063S27,理论等电点为6.46,占比最大的氨基酸为亮氨酸(leucine)占9.8%,其次是丝氨酸(serine),占8.0%。ClCRY2蛋白为亲水性蛋白,不具有跨膜区,无信号肽。实时荧光定量PCR分析结果:ClCRY2基因在杉木苗木根茎叶中均有表达,其中茎中的表达量最高,叶中次之,根中表达量最低;蓝光能显著增加ClCRY2基因的表达。【结论】通过对ClCRY2基因所编码的蛋白的理化性质和结构的研究,推测其在杉木茎和叶片发育进程中起重要的调控作用,参与蓝光信号的传导过程。 展开更多
关键词 杉木 花色素 Clcry2基因 生物信息学 表达分析
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蓝光照射对生物钟基因表达的影响:黄疸新生儿外周血单核细胞中的Bmall和隐花色素1
13
作者 王一飞 《世界核心医学期刊文摘(儿科学分册)》 2006年第A10期50-51,共2页
The purpose of this study was to investigate the effect of blue light phototherapy on the expression of circadian genes in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and plasma melatonin levels in neonates. Real- time ... The purpose of this study was to investigate the effect of blue light phototherapy on the expression of circadian genes in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and plasma melatonin levels in neonates. Real- time reverse- transcriptase polymerase chain reaction (RT- PCR) was used to determine the expression of Bmall and Cry1 in PBMC, and an enzyme linked immunosorbent assay was used to determine plasma melatonin levels in 32 breast- mi- lk jaundiced neonates before and after phototherrapy, compared with 29 control neonates. The results showed that the expression of Bmall was decreased and Cry1 increased significantly after phototherapy. Plasma melatonin levels were decreased after phototherapy. There was no statistical difference in Bmall and Cry1 gene expression and plasma melatonin levels in the control group. In conclusion, phototherapy does affect the expression of the circadian genes Bmall and Cry1 in PBMC and plasma melatonin concentration in jaundiced neonates. Our results suggest that phototherapy should be timed according to circadian rhythms when treating jaundiced neonates. 展开更多
关键词 蓝光照射 Bmall 外周血单核细胞 生物钟基因 花色素 褪黑激素 生物钟节律 光照治疗 母乳喂养
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侵染青海辣椒的辣椒隐症病毒2基因组克隆与分析
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作者 罗海林 袁雷 +1 位作者 闫佳会 郭青云 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期1368-1374,共7页
辣椒隐症病毒2(Pepper cryptic virus 2,PCV2)是近年来发现的辣椒新病毒之一,常与其他病毒复合侵染,影响辣椒的产量和品质。2021年从青海海东市采集疑似病样叶片,采用RT-PCR和基因克隆等方法,获得PCV2青海分离物的两条dsRNA,序列全长分... 辣椒隐症病毒2(Pepper cryptic virus 2,PCV2)是近年来发现的辣椒新病毒之一,常与其他病毒复合侵染,影响辣椒的产量和品质。2021年从青海海东市采集疑似病样叶片,采用RT-PCR和基因克隆等方法,获得PCV2青海分离物的两条dsRNA,序列全长分别为1579、1435 bp。核苷酸相似性比对发现,PCV2青海分离物两条RNA序列与已报道的其他地区PCV2分离物的序列相似性高于95%,系统进化分析结果显示,PCV2青海分离物的两条RNA均与PCV2分离物Chiltepin 53处于独立的分支,结果表明,青海辣椒上检测得到的病毒为辣椒隐症病毒2。将其与PCV2-QH和PCV2-XJ的核苷酸序列进行分析,结果显示,二者存在多位点差异。本研究首次报道PCV2在青海发生。 展开更多
关键词 辣椒 辣椒症病毒2(PCV2) 基因 序列分析
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应用RNAi技术探讨CAP10基因在新型隐球菌感染小鼠中对Th1-Th2型免疫的影响
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作者 吴赞艺 林旎 +4 位作者 林梨平 欧启水 林东红 陈敏 徐建萍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期893-897,共5页
目的设计siRNA表达质粒干扰CAP10基因的合成,将siRNA干扰前与干扰后的新型隐球菌菌液经呼吸道感染小鼠分别建立动物模型,行组织病理学检查与细胞因子检测,探讨CAP10基因对Th1/Th2免疫应答的影响。方法建立小鼠吸入感染隐球菌模型,在感... 目的设计siRNA表达质粒干扰CAP10基因的合成,将siRNA干扰前与干扰后的新型隐球菌菌液经呼吸道感染小鼠分别建立动物模型,行组织病理学检查与细胞因子检测,探讨CAP10基因对Th1/Th2免疫应答的影响。方法建立小鼠吸入感染隐球菌模型,在感染后第7d(急性期),PAS染色观察小鼠肺组织病理变化,并采用酶联免疫吸附试验定量检测小鼠血液中的Th1(IFN-γ、TNF-α)、Th2细胞因子(IL-10)水平。结果急性期小鼠血液内IFN-γ、TNF-α及IL-10浓度测定分别为:对照组(uninfected组)(19.24±1.31)pg/mL,(36.94±2.04)pg/mL及(18.32±3.00)pg/mL,新型隐球菌未干扰组(WT组)(14.34±1.26)pg/mL,(25.37±1.37)pg/mL及(72.96±8.83)pg/mL,新型隐球菌干扰组(siRNA-CAP10组)(14.63±0.95)pg/mL,(26.22±1.55)pg/mL及(38.73±4.61)pg/mL。与对照组相比,WT组和siRNA-CAP10组Th1因子IFN-γ及TNF-α水平明显降低(P<0.01),Th2细胞因子IL-10水平明显增高。WT组与siRNA-CAP10组相比,IFN-γ及TNF-α水平未见明显增高而IL-10水平明显增高(P<0.01)。IFN-γ/IL-10及TNF-α/IL-10的比率分别为:对照组1.08±0.21,2.07±0.34,WT组0.20±0.03,0.35±0.05,siRNA-CAP10组0.38±0.04,0.69±0.09。WT组和siRNA-CAP10组IFN-γ/IL-10及TNF-α/IL-10的比率较对照组明显减少(P<0.01);WT组IFN-γ/IL-10及TNF-α/IL-10的比率亦明显低于siRNA-CAP10组(P<0.01)。结论在新型隐球菌感染小鼠中,CAP10基因的表达与抗真菌的免疫反应有关,其下调有利于控制新型隐球菌播散,有利于Th1/Th2比率趋于平衡,在调节炎症反应方面有重要作用,有望成为新的分子治疗靶点。 展开更多
关键词 新型球菌 CAP10基因 SIRNA Th1Th2细胞因子
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新生隐球菌ITS与IGS2基因的分类比较研究
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作者 康颖倩 王和 《贵州医药》 CAS 2009年第11期973-975,共3页
目的探讨ITS及IGS2基因片段对新生隐球菌各变种及基因型分类与鉴定的应用价值。方法根据本课题前期研究结果及GenBank发表的基因序列资料,研究新生隐球菌3个变种的ITS和IGS2基因片段信息,用CLUSTERW软件构建以上两种基因的系统发育进化... 目的探讨ITS及IGS2基因片段对新生隐球菌各变种及基因型分类与鉴定的应用价值。方法根据本课题前期研究结果及GenBank发表的基因序列资料,研究新生隐球菌3个变种的ITS和IGS2基因片段信息,用CLUSTERW软件构建以上两种基因的系统发育进化树并进行分析,了解其亲缘关系。结果对新生隐球菌各菌株ITS基因型的IGS2区域片段分析结果显示,IGS2基因片断具有丰富的变异和信息位点。同ITS基因序列比较显示,IGS2基因在亚种内也具有同步进化和变异的特征。结论IGS2基因序列分析可作为新生隐球菌种间及种内基因分类鉴定有效的分子生物学方法;多种基因分类鉴定方法的联合应用,可更有效和准确地鉴定新生隐球菌并揭示其种内不同基因亚型间的遗传进化关系。 展开更多
关键词 新生球菌 基因分类 IGS2 ITS
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刺激隐核虫感染诱导斜带石斑鱼MHCIα和β_2m基因的表达谱分析 被引量:1
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作者 徐冬冬 徐舜 +1 位作者 吴凤依 罗晓春 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2145-2150,共6页
【目的】检验石斑鱼(Epinephelus coioides)MHCIα和β_2m基因是否参与诱导抗寄生虫免疫应答,为揭示鱼类免疫系统启动抗刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)感染的细胞免疫应答分子机制打下基础。【方法】以实时荧光定量PCR对刺激隐核虫... 【目的】检验石斑鱼(Epinephelus coioides)MHCIα和β_2m基因是否参与诱导抗寄生虫免疫应答,为揭示鱼类免疫系统启动抗刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)感染的细胞免疫应答分子机制打下基础。【方法】以实时荧光定量PCR对刺激隐核虫感染斜带石斑鱼前后MHC Iα和β_2m基因在感染局部位点和免疫器官中的表达变化进行检测。【结果】MHCIα和β_2m基因在健康斜带石斑鱼的组织中均呈组成性表达,且以在外周血、腮、头肾和脾脏中的表达量较高。经刺激隐核虫感染后,MHCIα和β_2m基因在斜带石斑鱼皮肤中的表达明显上调,均在感染后第5 d达峰值,其中MHCIα基因的最大表达量为2.6倍、β_2m基因的最大表达量为6.1倍;在腮中二者呈波动性变化,而在头肾中以显著下调为主。在脾脏中,MHCIα基因在刺激隐核虫感染后第5 d显著上调表达,为对照组的2.0倍,至感染后第7 d其表达水平略微下调,为对照组的1.5倍;β_2m基因表达于感染后12 h即升高至对照组的4.0倍,此后呈下调表达趋势,至感染后第5 d其表达水平再次上调为对照组的3.4倍。【结论】在刺激隐核虫感染过程中,斜带石斑鱼MHCIα和β_2m基因的相对表达量在皮肤、鳃、头肾和脾脏中均发生了明显变化,即鱼类MHCⅠ类分子可能参与了机体的细胞免疫,在抗寄生虫感染的特异性免疫应答过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 石斑鱼 刺激核虫 MHCIα基因 β2m基因 表达谱分析
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SXI2a基因在新生和格特隐球菌交配型鉴定中的作用
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作者 吴劲松 冯晓博 +2 位作者 卢月梅 吴伟元 李文青 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期463-466,共4页
目的设计针对a交配型位点内特有的SXI2a基因的特异扩增法,评价其在鉴定新生和格特隐球菌所有主要基因型a交配型中的作用。方法在SXI2a基因4号外显子的序列保守区设计引物SXI2aF-SXI2aR特异扩增新生和格特隐球菌a交配型,并比较其与现有... 目的设计针对a交配型位点内特有的SXI2a基因的特异扩增法,评价其在鉴定新生和格特隐球菌所有主要基因型a交配型中的作用。方法在SXI2a基因4号外显子的序列保守区设计引物SXI2aF-SXI2aR特异扩增新生和格特隐球菌a交配型,并比较其与现有的针对STE20a、MFa或STE3a基因的特异扩增法及交配试验在鉴定新生和格特隐球菌所有主要基因型a交配型中的作用。结果针对SXI2a基因的特异扩增法准确鉴定受试的各主要基因型a交配型菌株,而针对STE20a、MFa或STE3a基因的特异扩增法均至少无法扩增1种以上主要基因型的a交配型。部分受试菌株不能发生交配,交配试验无法鉴定其交配型。结论针对SXI2a基因的PCR扩增可鉴定新生和格特隐球菌各主要基因型的a交配型。SXI2aF-SXI2aR引物在快速鉴定a交配型中具有更好的通用性和特异性。 展开更多
关键词 新生球菌 SXI2a基因 交配型 基因 聚合酶链反应
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家蚕生物钟基因Bmcry1与Bmcry2的克隆及生物信息学分析 被引量:7
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作者 王文栋 梁辉 +4 位作者 朱晓苏 陶卉 徐丽 司马杨虎 徐世清 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期9-19,共11页
隐花色素基因(cryptochrome gene,Cry)是已确认的主要生物钟基因之一,它广泛分布于细菌和真核生物中。昆虫Cry基因分为Cry1和Cry2两类,果蝇只有Cry1,蜜蜂等膜翅目昆虫只有Cry2。为了研究鳞翅目模式昆虫家蚕Bombxy mori的昼夜生物钟分子... 隐花色素基因(cryptochrome gene,Cry)是已确认的主要生物钟基因之一,它广泛分布于细菌和真核生物中。昆虫Cry基因分为Cry1和Cry2两类,果蝇只有Cry1,蜜蜂等膜翅目昆虫只有Cry2。为了研究鳞翅目模式昆虫家蚕Bombxy mori的昼夜生物钟分子调控机制和昆虫CRY蛋白的进化,本研究克降了家蚕Bmcry1与Bmcry2基因的全长cDNA序列,长度分别为2 166 bp和2 389 bp(GenBank登录号分别为HM747059和HM747060),拼接了全基因序列(GenBank登录号分别为HM747057和HM747058)。Bmcry1基因具有12个外显子和11个内含子,Bmcry2具有9个外显子,8个内含子。染色体定位表明Bmcry1和Bmcry2分别位于第17号和15号染色体。通过同源建模获得了Bmcry1和Bmcry2蛋白的三维结构,其FAD入口大而深,这与CRY不与嘧啶二聚体结合相符;Bmcry1和Bmcry2表面多为负电荷,只在FAD入口位置有正电荷寓集。多序列比对、蛋白质基序和功能域分析、聚类分析等结果显示,Bmcry1和Bmcry2分属昆虫的CRY1和CRY2,与柞蚕Antheraea pernyi等鳞翅目昆虫中CRY蛋白的亲缘关系最近。家蚕的两类CRY与其他昆虫CRY相似,也都具有DNA光解酶和FAD结合功能域,但保守位点和蛋白基序位点不同。本实验为进一步研究家蚕CRY1和CRY2的分子进化机制和功能创造了条件。 展开更多
关键词 家蚕 生物钟 花色素基因 生物信息学分析 分子进化 同源建模
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2个玉米ZmCRY1a基因的克隆及其响应光质处理的表达模式 被引量:3
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作者 闫蕾 杨宗举 +7 位作者 苏亮 肖阳 郭林 宋梅芳 孙蕾 孟凡华 白建荣 杨建平 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1298-1308,共11页
隐花色素(cryptochrome,CRY)是植物蓝光的主要受体,参与其调节生长发育及生物钟过程。为研究隐花色素在玉米光形态建成及生物钟调控方面的作用,本研究利用同源克隆的方法得到玉米自交系B73的2个ZmCRY1a基因的c DNA序列,分别命名为ZmCRY... 隐花色素(cryptochrome,CRY)是植物蓝光的主要受体,参与其调节生长发育及生物钟过程。为研究隐花色素在玉米光形态建成及生物钟调控方面的作用,本研究利用同源克隆的方法得到玉米自交系B73的2个ZmCRY1a基因的c DNA序列,分别命名为ZmCRY1a1和ZmCRY1a2。这2个基因的编码区(coding DNA sequence,CDS)序列长度都为2124个核苷酸,编码707个氨基酸。生物信息学分析表明ZmCRY1a1和ZmCRY1a2推测的氨基酸序列均包含DNA photolyase、FAD binding和Crytochrome C结构域;与拟南芥及其他常见作物的CRY比对并构建系统发育树显示,这2个基因与水稻Os CRY1a氨基酸序列一致性最高,而与拟南芥和大豆等双子叶植物的CRY1氨基酸序列一致性相对较低。利用实时荧光定量PCR分析了ZmCRY1a1和ZmCRY1a2在不同器官及响应光质、光质转换及长日照与短日照处理的表达模式。在检测的器官中,ZmCRY1a1的表达丰度均高于ZmCRY1a2;这2个基因在成株期叶片中表达丰度最高,分别是根中ZmCRY1a1的52.1倍和6.2倍。相对于黑暗下,二者在各种持续光质中的表达丰度均较高,尤其在蓝光和远红光条件下。尽管是作为编码蓝光受体的基因,2个ZmCRY1a的表达却能强烈地响应远红光和红光转换处理。同样二者也能响应不同光周期处理,长日照条件下,ZmCRY1a1的转录在一个光周期内共出现5个峰值,而ZmCRY1a2的转录只有4个峰值;短日照条件下,2个ZmCRY1a的表达出现了极其相似的模式,均在进入黑暗后10 h和14 h时出现2个最高峰。由此推测2个ZmCRY1a可能在玉米光形态建成与开花调节中发挥重要作用。 展开更多
关键词 玉米 花色素 光信号转导 基因克隆 表达模式
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