云南省7个县村隐花青鹅膏的毒性差异研究

目的 对比云南省7个县村的隐花青鹅膏对小鼠肝脏和肾脏的毒性差异。方法 将昆明小鼠随机分为7组,每组细分为6 h、3 d、7 d、14 d,4个时间点组,每个时间组包含5只小鼠。采用云南省7个县村的隐花青鹅膏进行灌胃实验,对照组(0 h)使用等量的生理盐水进行灌胃。在每次灌胃后不同时间点抽取眼球进行取血,检测血清中谷氨酰转移酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、尿酸(UA)水平。同时称量小鼠肝脏和肾脏,测定其肝脏、肾脏指数,并利用HE染色观察肝、肾组织的情况。结果 牟定县余丁村(MDYD)和禄劝县永翠村(LQYC)组的隐花青鹅膏对小鼠肝脏和肾脏造成急性损伤。在灌胃后6 h,小鼠血清生化指标开始上升,到第7天达到峰值,第14天开始下降,显示出损伤趋于缓解(P <0.05)。而腾冲市东华村(TCDH)组和禄劝县永翠村(LQYC)组的隐花青鹅膏仅对小鼠肝脏有损害,在第14天后血清中AST、ALT和UA水平依然呈上升趋势,表明该地区的隐花青鹅膏对肝脏影响时间较长(P <0.05)。鹤庆县磨光村(HQMG)组、南涧县德安村(NJDA)组以及牟定县高平村(MDGP)组的隐花青鹅膏对小鼠肝脏和肾脏都造成损伤,且在第14天后血清中AST、ALT和UA水平呈持续增高趋势(P <0.05),显示出小鼠的肝脏和肾脏损害并未出现改善。结论 云南省不同县村的隐花青鹅膏均存在不同程度的肝脏、肾脏毒性,对肝肾有潜在危害,建议在食用隐花青鹅膏时谨慎对待。

云南不明原因猝死地区隐花青鹅膏的毒性研究

目的探究云南不明原因猝死案件事发当地隐花青鹅膏的毒性及毒理机制。方法采集事发地的隐花青鹅膏,经基因测序鉴定种属后制成干粉和熬煮物,SD大鼠灌胃染毒,提血清测定肝、肾功能以及心肌酶谱的生化指标。灌胃染毒7次后,取大鼠心肌、肝脏和肾脏组织进行HE染色和透射电镜观察。最后运用SPSS 21.0统计学软件分析数据。结果高剂量灌胃的两实验组大鼠在灌胃3次后出现活动减少、精神萎靡、食欲减退等症状。灌胃1次后各实验组的尿酸(Ua)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)均明显升高(P<0.05);两高剂量实验组的乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)显著升高(P<0.05)。HE染色发现,各实验组均出现心肌纤维断裂、肾小管上皮细胞水肿,熬煮物组肝细胞水肿明显,干粉组肝细胞脂肪变性、坏死,高剂量组的心肌、肝细胞和肾小管变化较明显。透射电镜发现,各实验组大鼠的肝细胞线粒体、粗面内质网损伤,心肌细胞线粒体损伤,干粉组还伴有溶酶体增多、脂滴现象,部分心肌原纤维断裂。结论YNSUD事发地的隐花青鹅膏对SD大鼠具有明显的肝毒性和心肌毒性,熬煮不能灭毒,食用具有一定的安全隐患,其心肌毒性可能是YNSUD发生的原因之一。

一起云南不明原因猝死案件中4种野生菌的细胞毒性

目的探究一起云南不明原因猝死(Yunnan sudden unexplained death,YNSUD)案件中涉及的4种野生菌的细胞毒性,为YNSUD的防治提供实验依据。方法采集事件发生家庭食用过的4种野生菌,通过专家辨认和基因测序鉴定种属。运用超声波萃取法提取4种野生菌的生品浸膏干预HEK293细胞,然后用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)筛选出有明显细胞毒性的野生菌。将筛选出的野生菌再分别制成生品、熬煮和熬煮后酶解3种浸膏,所得3种浸膏以不同浓度干预HEK293细胞,用CCK-8与乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测法联合检测细胞毒性,并用倒置相差显微镜观察细胞形态。结果4种野生菌分别为粉黄黄肉牛肝菌(Butyriboletus roseoflavus)、美味牛肝菌(Boletus edulis)、变绿红菇(Rus⁃sula virescens)和隐花青鹅膏(Amanita manginiana)。仅在隐花青鹅膏中发现细胞毒性,其生品浸膏在质量浓度为0.1 mg/mL时显示出细胞毒性,熬煮浸膏和熬煮后酶解浸膏分别在质量浓度为0.4 mg/mL和0.7 mg/mL时有明显细胞毒性。除数量明显减少外,隐花青鹅膏提取物干预后的HEK293细胞还表现出突触增多及折光性差等改变。结论该起YNSUD案件涉及的野生菌中,隐花青鹅膏的提取物具有明显细胞毒性,通过熬煮和酶解两种工艺可以降低其部分毒性,但不能完全灭毒,食用该菌具有一定的安全隐患,隐花青鹅膏可能是导致该起YNSUD案件的原因之一。